膠體金免疫層析技術在水產品快速檢測中的應用

杜紅梅

（常德市畜牧獸醫水產局，湖南 常德 415000）

免疫膠體金技術是以膠體金作為示蹤標志物應用于抗原抗體的一種新型的免疫標記技術，是由Faulk和Taytor發明的一種免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用，現已應用到電鏡、光鏡、凝集試驗、體外診斷、斑點滲濾及免疫層析等方面。膠體金免疫層析技術以其獨特的優勢，成為現今快速、靈敏、方便的免疫學檢測技術之一，并開始逐漸應用于水產養殖業的多個領域。

1 膠體金免疫層析技術概述

1.1 基本原理

氯金酸在還原劑如鞣酸、枸櫞酸鈉、白磷、抗壞血酸等作用下，會聚合成一定大小的金顆粒，并在靜電作用下形成穩定的膠體溶液。該膠體溶液疏水，帶負電，被稱為膠體金。膠體金粒子對蛋白質有很強的吸附功能，在弱堿環境下可與蛋白質分子的正電荷基團牢固結合。牛血清白蛋白多肽綴合物、葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、糖蛋白、抗生素、激素、毒素、酶等都能與膠體金進行非共價結合，因而是基礎研究和臨床試驗中非常有用的工具。膠體金的物理性狀與結合物的免疫學和生物學特性，使其廣泛應用于免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

膠體金免疫層析技術是膠體金標記技術結合抗原抗體反應的一種應用形式。先將特異性的抗原或抗體呈條帶狀固定在試紙膜上；然后將膠體金標記試劑（通常是一些抗體或單克隆抗體）吸附在試紙膜的結合墊上；當待檢樣本添加到試紙膜一端的樣本墊之后，樣本在毛細作用下向前移動，先與結合墊上的膠體金標記試劑相互結合，再帶動待檢樣本與金標試劑的結合物移動至特異性的抗原或抗體區域，結合物與抗原或抗體發生特異結合而被截留在固定的位置，顯示在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。

1.2 特 點

與其他標記技術相比，膠體金免疫層析技術有以下特點：易制備，成本低；可同時檢測多種物質；對組織細胞的非特異性吸附作用小，具有高度特異性和高敏感性；不僅可用于光鏡，也可用于透射電鏡和掃描電鏡；檢測結果直接用顏色顯示，肉眼判斷直觀可靠；操作簡單，耗時少。膠體金免疫層析技術實現了檢測技術的“快速、簡便、特異、敏感”，因此廣泛應用到生物學的各個領域。

1.3 分 類

1.3.1 雙抗體夾心法 主要用于檢測生物大分子及顆粒性抗原（蛋白質、病毒、細菌等）。大分子抗原一般有多個抗原結合位點，可同時檢測多種抗體，一般采取單抗和多抗配對或單抗和單抗配對的形式進行檢測。

1.3.2 雙抗原夾心法 其特別之處在于：（1）被包被和標記的均為抗原，檢測時樣品首先與被標記的抗原結合，再與被包被的抗原結合；（2）檢測的是總抗體，即IgG、IgM、IgA等特異性抗體均可作為搭橋抗體而產生陽性結果；（3）同一種檢測試劑檢測不同種屬的抗體，既可檢測人血清抗體，亦可檢測動物血清抗體，對人獸共患病的檢測非常方便；（4）特異性和敏感度易于控制，檢測精確度高。

1.3.3 捕獲法 主要用于感染人體后病原微生物產生的特異性抗體的檢測，因為這些病原微生物主要寄生于細胞內，難于直接檢測其特異性抗原，例如艾滋病毒、風疹病毒、乙腦病毒、丙肝病毒、麻疹等。對于標本較難采集的病原體，也可采用此方法檢測。

1.3.4 競爭抑制法 主要用于小分子物質的檢測，因小分子通常只有一個抗原結合位點，不能同時結合兩個抗體，所以不能采用雙抗體夾心法檢測。目前對體液中小分子肽、農藥殘留、濫用藥物的檢測等均采用此方法。

2 膠體金免疫層析技術在水產品檢測中的應用

我國是一個水產品生產和消費大國。目前，我國水產品質量雖然已有了明顯的提高，但隨著經濟的發展和人口的增長，水產品賴以生存的土壤、水質等遭受不同程度的污染，導致水產品受到危害，影響其質量。另外在水產養殖業生產及加工的過程中，魚藥、飼料及添加劑，特別是明令禁止藥物的違規使用，再加上國內水產品質量標準體系建設的滯后，致使水產品質量安全存在著嚴重的問題。因此，運用現代化檢測手段，加強水產養殖業的質量監督，具有非常重要的現實意義。

近年來，隨著免疫學、分子生物學和儀器自動化的飛速發展，各種檢測的新技術、新方法不斷涌現，如高效液相色譜法、氣相色譜法、液質聯用等色譜分析法；酶聯免疫吸附法、免疫磁珠技術等免疫學檢測技術；聚合酶鏈式反應、熒光定量聚合酶鏈式反應等分子生物學檢測技術等。但是，這些檢測方法成本較高、耗時長、操作復雜，在實際應用過程中有很大的局限性。因此，“快速、簡便、特異、敏感”的膠體金免疫層析技術便成為研究的熱點。

應用膠體金免疫層析技術檢測水產品中的霍亂弧菌已有報道。另外，采用膠體金免疫層析技術對水產品中的四環素類、磺胺甲噁唑、氯霉素、孔雀石綠等藥物殘留的檢測研究表明，該方法操作簡單，結果判定不需要儀器，成本較低，可用于基層單位的初篩定性檢測。

3 膠體金免疫層析技術的發展趨勢

由于膠體金免疫層析技術是基于抗原抗體特異性反應進行的檢測，所以在檢測實際樣本時，由于待檢樣品種類繁多，成分復雜，容易影響抗原抗體反應以及膠體金顆粒與蛋白的吸附，造成假陽性結果。因此，要針對這個不足之處繼續研究膠體金免疫層析技術在水產品檢測中的應用，以提高檢測的靈敏度，提高質量，實現檢測的半定量和定量化。

綜上所述，膠體金免疫層析技術作為一種新型的免疫學快速診斷和檢測技術，將會逐步完善與發展，在水產品的快速檢測中具有很好的應用前景。

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