1284份痰標本分枝桿菌涂片鏡檢與培養結果分析

李國紅 苗潤青 賈艷輝 王月珍

(北京市平谷區結核病預防控制中心 北京 101200)

在結核病控制工作中,通過實驗室細菌學檢查診斷傳染性肺結核是全面監督化療策略(DOTS)的重要要素之一,痰結核分枝桿菌檢查對于發現傳染源、確定診斷和化療方案、考核療效、評價防治效果具有重要意義[1]。結核分枝桿菌檢查包括直接涂片和培養。痰涂片抗酸染色查找結核分枝桿菌作為細菌學檢測的常規手段之一,簡便、經濟、快捷,但檢出率低[2]。分枝桿菌培養法靈敏度高于涂片法,可鑒定死菌與活菌,此外,分枝桿菌的分離培養也為進行菌種鑒定和藥物敏感性測定提供菌株,被譽為結核病診斷的“黃金標準”[3]。有研究數據表明采用直接涂片鏡檢與培養法聯合檢測,是提高肺結核患者痰標本中結核分枝桿菌檢出率的有效方法[4]。1985年北京市開始全面開展分枝桿菌培養,2008年開始對全市結核病實驗室的分枝桿菌培養檢查進行質量評估并與痰涂片鏡檢質量控制結果同時進行分析評價。

現將北京市平谷區結控中心實驗室 2009年1月至12月1284份痰結核分枝桿菌涂片鏡檢與培養結果分析如下。

1 材料和方法

1.1 標本來源 2009年1—12月實驗室共接收初診、隨訪痰標本 2307份,其中性狀質量較好的1284份痰標本同時進行痰涂片鏡檢和分離培養。初診患者應送3份痰標本,選擇其中2份合格的痰標本同時做涂片和培養檢測,復診患者按規定每次送檢2份痰標本,選擇其中1份合格的痰標本同時做涂片和培養檢測。

1.2 材料 萋-尼抗酸染色液,酸性羅氏培養基。由珠海貝索生物技術有限公司提供。

1.3 方法 (1)痰標本直接涂片鏡檢采用《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》規定的萋尼染色法,具體參見參考文獻[1]。(2)分枝桿菌分離培養檢查方法采用中國防癆協會推薦方法,具體參見參考文獻[5]。(3)統計學方法：采用SPSS 10.0統計軟件包進行統計處理,對差異數據進行 χ2檢驗,P＜0.01為有統計學意義。

2 結果

2.1 痰涂片鏡檢和培養結果 臨床診斷的肺結核患者和疑似肺結核患者的痰標本1284份。直接痰涂片陽性157份,占12.2%(157/1284),分離培養陽性166份,占12.9%(166/1284),菌陽標本199份,占標本總數的15.5%(199/1284);其中初診痰標本958份,菌陽標本149份,占初診標本數的15.6%(149/958),占菌陽標本數的74.9%(149/199);隨訪痰標本326份,菌陽標本50份,占隨訪痰標本的15.3%(50/326),占菌陽標本數的25.1%(50/199)。

2.2 菌陽標本分布情況 具體結果見表1。隨訪患者涂陽培陰率明顯高于初診患者,差異有統計學意義(χ2=75.42,P＜0.001)。

2.3 涂陽培陰患者分布 2009年1月至12月平谷區新登肺結核患者112例,其中初治患者105例,復治患者7例。新登菌陽患者 70例,占62.5%(70/112),新登初治菌陽患者65例,新登復治菌陽患者5例。新登涂陽培陰患者5例,其中新登初治涂陽培陰患者3例(其中1例患者涂陽標本因培養時接種的2支培養基均污染,無法確定分枝桿菌是否生長而判定為陰性),占新登初治菌陽患者4.6%(3/65);新登復治涂陽培陰患者2例。

2.4 涂陽培陰標本分布情況 由表2可以看出涂陽培陰標本痰菌量87.9%(29/33)在2+以下,隨訪標本71.4%(20/28)涂陽培陰出現在治療第2、3個月末的痰標本。

表1 菌陽標本結果分布

表2 S(+)C(-)標本S(+)分布情況(份)

表3 2009年度抽檢和盲法復檢玻片的準確性(份)

2.5 痰涂片鏡檢和培養結果質量狀況

2.5.1 痰涂片抗酸染色鏡檢質量 按照相關規定,北京結核病控制研究所中心實驗室對本中心實驗室進行抗酸桿菌鏡檢質量評估。2009年度應抽檢和盲法復檢的玻片數為66張。具體鏡檢評測結果見表3。本年度抽檢玻片盲法復檢,未發生定性錯誤和陽性結果的量化誤差。

2.5.2 分枝桿菌分離培養質量 2009年度北京結核病控制研究所中心實驗室對本實驗室分枝桿菌分離培養檢查進行質量評估,我實驗室檢查初診標本958份,初診標本涂陽培陽率為11.1%(北京市平均12.8%)、涂陰培陽率為4.0%(北京市平均5.4%);涂陽培陰率為0.5%(北京市平均0.8%);可視菌落平均時間為21 d(北京市平均17 d)。

3 討論

對我區2009年全年1284份痰抗酸桿菌涂片鏡檢與分枝桿菌培養結果分析顯示,痰標本直接痰涂片陽性率為12.2%(157/1284),分離培養陽性率為12.9%(166/1284),分離培養陽性率高于涂片陽性率5.7%,明顯低于培養陽性率高于涂片陽性率10%的有關報道[6]。總的痰菌陽性檢出率為15.5%(199/1284),高于涂片陽性率27%,也高于培養陽性率20%,差異有統計學意義,與肖和平[7]報道相一致。說明在結核病診療活動中,涂片鏡檢與分離培養聯合檢查,比僅使用其中任何一項檢查,能夠提高抗酸桿菌的發現率。

初診痰標本涂陽培陽率為11.1%、涂陰培陽率為4.0%,全市相應的均值分別是12.8%、5.4%,與全市平均值比較,我區結果較低;可視菌落的平均時間為21 d,與全市均值17 d比較,發現可視菌落的平均時間較晚。以上數字顯示我實驗室分枝桿菌培養檢查質量處于全市平均水平以下,有待進一步改進。分析原因,可能與培養前處理液濃度較高、痰標本的比例較大、消化時間較長、接種量較大或操作過程中污染等有關。

本年度我區隨訪患者痰標本涂陽培陰共28份,來自于24例正在接受抗結核藥物治療的患者。由表2看出涂陽培陰標本S(+)痰菌量87.9%(29/33)在2+以下,隨訪標本涂陽培陰 71.4%(20/28)出現在治療第 2、3個月末的痰標本。91.7%(22/24)的隨訪涂陽培陰患者初診痰菌陽性且排菌量較多。本研究統計結果顯示,隨訪患者涂陽培陰率明顯高于初診患者,隨訪標本涂陽培陰結果占涂陽培陰標本總數的84.8%(28/33)。分析目前隨訪患者痰標本出現涂陽培陰結果的原因,有可能是由于結核藥物的作用,使化療后患者痰標本中的野生株活力低,表現為涂片陽性培養陰性和陽性生長時間延遲[8-10]。同時,也可能由于在肺結核規律治療過程中,有部分痰陰性患者會出現陽轉的現象[11]。

初診患者痰標本檢測中,5例涂陽培陰占0.5%,分析可能存在的影響因素有以下幾個方面。(1)抗生素的影響,部分新登初治患者來本所就診前已自行服用氟喹諾酮類抗生素或抗結核藥品(3例新登初治患者病歷顯示,其中2例患者在來本所就診前自行服用過左氧氟沙星)。(2)實驗室操作不當的影響。1例初治涂陽培陰患者的標本培養過程中污染,可能與去污染程序的忠實度(前處理液的濃度,與痰標本的比例,消化時間),標本的接種(接種量,無菌操作,培養溫度),營養條件(培養基種類,質量和保存)等因素的把握有關[12-14]。(3)結核分枝桿菌的自然變異的影響[15]。

綜合以上數據分析表明,我實驗室整體培養質量與我市平均水平有一定差距,有待提高。應在保證痰標本質量和培養基品質的前提下,做到：(1)嚴格規范無菌操作流程,嚴格掌握前處理液的濃度、與痰標本的比例和接種量,控制降低污染率;(2)增加培養基的觀察次數,由每周1次改為每周2次,有助于更真實地反映陽性結果可視菌落的平均時間;(3)對抗酸桿菌涂片陽性的標本,在進行分枝桿菌分離培養檢查時,可適當延長培養結果的截止報告時間,有助于降低涂陽培陰率。

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