ELISA檢測中全自動(dòng)加樣引起拖帶假陽性現(xiàn)象的對策分析

潘志勇

隨著全自動(dòng)加樣設(shè)備在血液篩查中的廣泛應(yīng)用，其加樣過程導(dǎo)致的拖帶現(xiàn)象已引起高度關(guān)注。筆者在進(jìn)行血液標(biāo)本加樣檢測過程中，發(fā)現(xiàn)抗體強(qiáng)陽性標(biāo)本，引起拖帶現(xiàn)象(以抗-HIV為例)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血清標(biāo)本 均來自我站街頭無償獻(xiàn)血者。

1.2 試劑 ELIST試劑為法國伯樂公司生產(chǎn)，在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器 RSP 150＆BEP III全自動(dòng)酶免系統(tǒng)深圳賽勒公司提供。

1.4 方法 根據(jù)檢測項(xiàng)目和試劑說明書的要求，在RSP 150及BEP III控制微機(jī)上編制加樣程序，加樣方向從標(biāo)本架1起、酶標(biāo)板從1到12。吸取分配不同的液體試劑或血清標(biāo)本后，RSP 150按編制程序自動(dòng)沖洗加樣針。

2 結(jié)果

2.1 第1例抗-HIV陽性拖帶現(xiàn)象檢測 出現(xiàn)在抗-HIV同一塊酶標(biāo)板的H2、H3、H4……H7位置上，標(biāo)本檢測OD值見表1。本次實(shí)驗(yàn)的Cut off值為0.134，故6份標(biāo)本5份陽性1份為“灰區(qū)”，根據(jù)抗-HIV檢測規(guī)程，6份標(biāo)本重新雙孔復(fù)試，結(jié)果H2標(biāo)本檢測OD值分別為2.759，2.543仍為強(qiáng)陽性，H3標(biāo)本OD值分別為0.456，0.403為弱陽性，其余4份樣本雙孔復(fù)試為陰性，把H2、H3標(biāo)本送市疾控中心HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)蛋白印跡法(WB)確認(rèn)，H2為抗-HIV陽性，H3為抗-HIV陰性。后追蹤相應(yīng)血袋辯子標(biāo)本并進(jìn)行檢測，H2樣本W(wǎng)B和ELISA結(jié)果為陽性，H3樣本W(wǎng)B和ELISA均為陰性。

2.2 第2例抗-HIV陽性拖帶現(xiàn)象檢測 出現(xiàn)在抗-HIV同一塊酶標(biāo)板的E9、E10、E11、E12位置上，標(biāo)本檢測 OD值見表2。本次實(shí)驗(yàn)的Cut off值為0.146，4份標(biāo)本雙孔復(fù)試，結(jié)果E9標(biāo)本檢測OD值分別為3.110，3.188仍為強(qiáng)陽性，其他3份樣本雙孔復(fù)試為陰性，把E9標(biāo)本送市疾控中心HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)蛋白印跡法(WB)確認(rèn)，仍為抗-HIV陽性。

表1 第1例拖帶陽性檢測結(jié)果

表2 第2例拖帶陽性檢測結(jié)果

2.3 陽性拖帶現(xiàn)象位置的確認(rèn) 以A、B、C……H表示96孔酶標(biāo)板的縱列，1、2、3、……12表示96孔酶標(biāo)板的橫列，其標(biāo)本在酶標(biāo)板的位置可表示為A1……A12，B1……B12，H1……H12等(見圖1)。

圖1 拖帶現(xiàn)象位置圖解

3 討論

目前，許多血站使用全自動(dòng)加樣器及全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)進(jìn)行血液檢測。全自動(dòng)加樣器由微機(jī)控制，可以快速準(zhǔn)確的處理大批量標(biāo)本，并可保證加樣的精密度和一致性，大大減少了勞動(dòng)強(qiáng)度，避免了手工加樣的人為誤差［1］，提高了血液檢測的質(zhì)量和水平。加完血清或試劑后，加樣針根據(jù)編好的程序沖洗加樣針，不能做到手工加樣，一份標(biāo)本一個(gè)加樣頭，因?yàn)槲艺臼褂玫挠谰眯约訕俞槪虼藦睦碚撋现v儀器在加樣運(yùn)行方向上從左到右之間拖帶污染是不可避免的［2］，同樣，同一根加樣針，加完強(qiáng)陽性標(biāo)本，沖洗不干凈，接著加下一樣本，造成樣本污染，結(jié)果出現(xiàn)假陽性(第1例拖帶陽性為此現(xiàn)象)。正因?yàn)槿绱藘x器的生產(chǎn)廠家也考慮到了這個(gè)問題，加完一種試劑或標(biāo)本后機(jī)器自動(dòng)沖洗實(shí)踐證明，一般情況下能避免左右孔之間的拖帶污染，但若遇到高濃度Ag、Ab標(biāo)本，這種拖帶污染是存在的，通過多次實(shí)驗(yàn)尋求本實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)加樣針的最佳清洗程序，盡可能減少拖帶污染。

綜上所述實(shí)驗(yàn)證明，增加加樣針的清洗和擦拭次數(shù)(最佳清洗和擦拭程序)，可以減少拖帶污染。現(xiàn)在市場有專門針對加樣污染使用的清洗劑，據(jù)報(bào)道可以使加樣針污染降低。一次性加樣針減少了洗滌環(huán)節(jié)，在保持血液加樣的高精確度和自動(dòng)化的前提下，又可以完全避免由于拖帶污染帶來的影響［3］。建議血站在血液檢測中盡可能使用一次性加樣針。但如果出現(xiàn)了這種拖帶污染造成的現(xiàn)象時(shí)，在對可疑拖帶污染陽性標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試和確認(rèn)時(shí)，應(yīng)使用相應(yīng)的血袋標(biāo)本并查看獻(xiàn)血者原始資料，并隨訪原獻(xiàn)血者加以證實(shí)。

［1］李慧，惠永慶，劉世榮.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)全自動(dòng)與手工操作方法比較. 中國輸血雜志，2000，13(2)：98．

［2］徐樹良，談維，石斌，等.全自動(dòng)加樣儀引起抗-HIV拖帶陽性分析. 中國輸血雜志，2003，16(2)：106-107．

［3］申俊峰，陸蓉，王軍，等.全自動(dòng)加樣儀一次性加樣針在血液檢測中的應(yīng)用. 貴州醫(yī)藥，2009，33(3)：264-265．