中藥制劑復方薏藍顆粒中龍膽苦苷的含量分析

陳毅華 楊志華 劉鎮峰

復方薏藍顆粒是本醫院的中藥自制制劑，于2010年在本醫院制劑室現有生產條件的基礎上，聯合廣東一方制藥廠的技術力量進行生產，經申報廣東省藥監局審核批準取得醫院中藥自制制劑注冊生產批準文號(粵Z20100090)。該制劑由板藍根、連翹、龍膽草、夏枯草、重樓、紫草、薏苡仁等中藥材組成，具有清熱除濕、活血解毒的功效。臨床上用于治療濕熱蘊毒型引起的帶狀皰疹、單純皰疹、濕疣、扁平疣等癥，療效確切。該制劑中藥材成分復雜，為控制本制劑的內在質量，保證臨床用藥效果，龍膽苦苷作為制劑中的主要成分之一，本文參考文獻［1，2］采用高效液相色譜法測定制劑中龍膽苦苷的含量，作為該制劑生產質量的內部控制標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜系統，Waters 2487雙波長紫外檢測器，N2000色譜工作站，MILLIPOKE Smiplicity 185純水器，瑞士 CAMAG Reprostar(薄層成像系統)，硅膠G薄層板(浙江省路橋四甲生化塑料廠)，G2170AA數據處理軟件系統。

1.2 試藥 龍膽苦苷對照品(批號0737-9910)購于中國藥品生物制品檢定所。復方薏藍顆粒由本醫院制劑室生產的中藥制劑，所用藥材均為生產用同批藥材。試劑：甲醇為進口色譜純，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

1.3 含量測定

1.3.1 色譜條件 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠;色譜柱：Shimpack CLC ODS(150 mm ×6.0 mm，5 μm);流動相：乙腈-水(13∶87);流速：1.0 ml/min，檢測波長：276 nm，進樣量：20 μl［1，2］。

1.3.2 對照品溶液的制備 取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，用流動相溶解，并稀釋定容，制成每1 ml含龍膽苦苷0.5 mg的溶液，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末(過三號篩)5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，超聲提取20 min，取出放置室溫，加50%甲醇至原稱重。搖勻，濾過，棄去初濾液，續濾液作為供試品溶液。

1.3.4 陰性對照溶液的制備 處方中除去龍膽按制劑工藝制備，制得陰性對照品溶液。

1.3.5 陰性試驗 按上述儀器和試驗條件，將龍膽苦苷對照品溶液，供試品溶液及陰性對照溶液分別進樣測定，結果其他成分對龍膽苦苷的測定無干擾。

1.3.6 線性關系考察 精密吸取上述對照品溶液，并適當稀釋。按測定時實際配制的對照品溶液濃度分別為0.259、0.518、0.777、1.036、1.295 mg/ml，分別精密吸取 10 μl注入液相色譜儀，每種濃度進樣3次，測得平均峰面積分別為206758、413915、625456、8228830、1035451，以龍膽苦苷峰面積積分值對進樣量(μg)進行直線回歸，得標準曲線：Y=392+8.0 ×104X，r=0.9998，表明龍膽苦苷進樣量在2.6 ～13 μg范圍內有良好的線性關系。

1.3.7 精密度試驗 精密吸取同一批號(20110513)的黃芩苷對照品溶液20 μl，重復進樣5次，測得峰面積積分值，結果RSD為0.94%。

1.3.8 穩定性試驗 取龍膽苦苷對照品溶液和供試品溶液各20 μl，按含量測定項下方法測定，在8 h內每次間隔2 h進樣測定1次，結果峰面積積分值前后變化不明顯，對照品溶液RSD為0.57%，供試品溶液的RSD為0.93%。

1.3.9 重現性試驗 取同一批樣品(批號：20110513)5份，按以擬定的樣品測定方法，分別測定 5次，結果 RSD為1.21%。

1.3.10 回收率試驗 精密稱取已知龍膽苦苷含量的樣品，分別加入一定量的龍膽苦苷對照品(3種不同水平，各3份)，按上述的樣品溶液制備并進樣測定，計算回收率，結果見表1。

1.3.11 樣品測定 分別精密吸取對照品溶液與樣品供試液各20 μl，按上述色譜條件測定。5批樣品中龍膽苦苷的含量測定結果見表2。

表1 龍膽苦苷回收率試驗結果

表2 樣品中龍膽苦苷的含量測定結果(mg/g)

2 小結與討論

2.1 關于龍膽藥材中龍膽苦苷的含量測定方法，根據有關文獻記載已有薄層色譜法、比色法和高效液相色譜法等。本文采用高效液相色譜法對樣品的測定具有較好的分辨性及重現性。在測定過程中發現：若采用流動相甲醇∶水(1∶4)得到的龍膽苦苷峰，峰形較寬。故采用乙腈∶水(13∶87)作為流動相，得到的龍膽苦苷峰峰形對稱，陰性樣品無干擾，與其他成分達到基線分離。

2.2 分析過程中，由于使用不同的硅膠板，必然存在著厚薄差異，影響測量結果，所以要測量板與板之間的矯正系數，方法如下：在各薄層板上各點5 μl的標準品，它的峰面積積分值與繪制標準曲線板上的5 μl標準品峰面積積分值的比值，即為校正系數。

2.3 在桔梗的定性鑒別中曾采用了加酸水解，再用氯仿萃取的方法，但上樣量太大，效果不好，后改用酸水、氯仿雙項水解的方法，達到了很好效果。展開時，曾采用展開系統石油醚(60℃ ～90℃)-醋酸乙酯-冰醋酸(25∶7∶0.5)，斑點的分離度不好;氯仿-異丙醇-冰醋酸(9∶1∶0.5)，Rf值太大，后改為氯仿-異丙醇-冰醋酸(15∶1∶0.5)則達到了較好分離效果。

2.4 本文通過薄層鑒別分析，中藥材桔梗、枳殼、連翹的鑒別不僅專屬性強且重現性好，可作為復方清肺消痤顆粒制劑的定性指標。對于定量測定，根據相關文獻，選定制劑中黃芩苷的含量作為指標。在測定時，對超聲提取法和熱回流提取法進行了比較，發現效果相近，故選擇操作較簡便的超聲提取法。按處方制備工藝制成不含黃芩的陰性樣品，按樣品測定方法同法測定。結果表明陰性樣品中其他組分對黃芩苷的含量測定無干擾。

［1］中華人民共和國藥典(一部).北京：中國醫藥科技出版社，2010．

［2］何偉，張峰.龍膽瀉肝顆粒質量標準研究.山東醫藥工業，2002，21(2)：1．