不同菌齡銀耳菌種的酶活力測定

溫志強 白盛鎮 鄧優錦

(福建農林大學菌物研究中心,福州 350002)

銀耳(Tremella fuciformis Berk)系我國久負盛名的食藥兼用真菌,歷史上被列為 “參、茸、燕、耳”四大滋補珍品之一,并一度作為宮庭貢品,備受人們喜愛。銀耳也是福建省食用菌產業中的拳頭產品,栽培規模不斷擴大,產量逐年上升。但目前銀耳生產中存在菌種研究滯后、多代自交、繼代延用等問題。銀耳的安全生產必須首先解決菌種問題,而菌種的菌齡是影響栽培產量和質量的重要因素。[1]銀耳菌種質量一般是根據經驗及菌種的生長狀況來確定的,要求菌齡不能太長也不能太短,可至今未見有關銀耳菌種質量檢測指標的報道。本試驗通過對不同菌齡的銀耳菌種的羧甲基纖維素酶(CMC酶)、木聚糖酶、淀粉酶、漆酶、多酚氧化酶等5種酶的活性測定,結合對應菌齡的出耳試驗,以期探明銀耳菌種中的酶活性變化與菌種活力的關系,為銀耳菌種的質量檢測提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

(1)供試菌株。為古田縣用于栽培的同一批接種的銀耳原種Tr01和Tr21。

(2)培養基配方。參照福建古田縣菇農生產栽培配方:棉籽殼84%,麩皮14%,石膏粉2%,水56%。

1.2 試驗方法

(1)酶液制備。分別在菌種瓶中間均勻取白毛團和混合菌絲各5 g(鮮重),加入25 mL蒸餾水并攪勻,浸提2 h后進行抽濾,抽濾后的溶液即為菌絲粗酶液,每處理設5個重復。

(2)酶活力測定。酶活力測定的具體原理和方法參照施特爾馬赫B著、錢嘉淵譯的 《酶的測定方法》。[2]

(3)出耳。出耳的方法及管理參照古田縣生產上的常規方法。[3～5]

2 結果與分析

2.1 出耳情況

從表1可以看出,菌齡為7～12天的菌種,生產的銀耳朵徑較大、耳片適中、展片好、大小均勻、出耳率高,產量和質量均較理想。而菌齡小于7天的菌種生產的銀耳,耳片雖然大而展,但耳片之間的大小差別極大,產量也偏低;菌齡為15天以上的菌種生產的銀耳,耳片小,展片差,產量較低。

2.2 羧甲基纖維素酶 (CMC酶)的活性

從圖1看出,不同菌齡的銀耳菌種均可測到CMC酶活力,白毛團和混合菌絲的酶活力隨菌齡的變化而呈現出不同的趨勢。白毛團的CMC酶活力呈現先上升后下降,菌齡5～12天,CMC酶活力逐漸增大,12天時,酶活力達到最大,其OD值為0.4417。之后開始逐漸下降,30天時其OD值僅為0.2120。而混合菌絲的CMC酶活力隨菌齡的增加而提高,OD值從5天時的0.1107上升到30天時的0.4331。

表1 銀耳栽培種不同菌齡用于生產的表現

圖1 不同菌齡銀耳菌種的羧甲基纖維素酶活性變化

2.3 木聚糖酶的活性

從圖2看出,白毛團和混合菌絲的木聚糖酶活性均呈現先上升后下降再上升的變化趨勢。菌齡為5天時,白毛團木聚糖酶活力的OD值為1.0168,15天時達到最高值,為2.0489,20天時OD值下降至1.3416,之后又開始上升,30天時為1.6260。混合菌絲木聚糖酶活力變化態勢與白毛團雷同,菌齡為5天時OD值比白毛團低,僅為0.2121,15天時為1.7163;20天時OD值降為0.9920,30天時OD值上升至1.5779。菌齡越大,兩者的木聚糖酶活力越接近。

2.4 淀粉酶的活性

圖2 不同菌齡銀耳菌種的木聚糖酶活性變化

從圖3看出,白毛團與混合菌絲的淀粉酶活力變化趨勢相差較大,并無規律性。菌齡為5～12天時,白毛團淀粉酶活力基本呈微下降的趨勢;12～15天,酶活力迅速升高,15天時達到最大,其OD值為0.4280;15～25天淀粉酶活力開始下降,25天時的OD值為0.0859,25天后又有所上升,30天時的OD值為0.1274。混合菌絲的淀粉酶活力比白毛團更呈無序狀態,20天后,酶活力迅速上升,30天時到達頂峰,OD值達0.5355。

圖3 不同菌齡銀耳菌種的淀粉酶活性變化

2.5 漆酶的活性

從圖4看出,銀耳漆酶的活性隨菌齡變大呈現先上升后下降的趨勢,在菌齡為10天時,漆酶活性達到最大,其他菌齡的酶活力均極低。在菌齡為5天和7天時,白毛團漆酶活性很低,OD值接近于0;10天時,酶活性迅速升至最大,OD值為0.2091;此后酶活性開始下降,15天后,酶活性的OD值接近于0。菌齡為5天和7天時,混合菌絲的漆酶活性也很低,OD值接近0;在菌齡為10天和12天時,OD值分別為0.2711和0.2807,此時漆酶活性最大;之后酶活性開始降低,20天之后OD值又接近0。

圖4 不同菌齡銀耳菌種的漆酶活性變化

2.6 多酚氧化酶的活性

從圖5看出,多酚氧化酶活性隨菌齡的變大呈現先上升后下降的趨勢,在菌齡為10天時酶活性達到最大,其他菌齡的酶活力都極低。在菌齡為5天和7天時,白毛團多酚氧化酶活性極低,其OD值接近0,10天時OD值達到最高,為1.0009,12天之后,OD值又接近0。混合菌絲多酚氧化酶活性,菌齡為5天和7天時,OD值也接近0;10天時達到最高值,為0.9840,之后酶活性開始下降,20天后OD值又接近0。

圖5 不同菌齡銀耳菌種的多酚氧化酶活性變化

3 討論

根據本試驗結果,銀耳菌種木聚糖酶的酶活性較大,不同菌齡菌種的木聚糖酶OD值均在1.00以上,而其他酶的酶活性較低。羧甲基纖維素酶、木聚糖酶、淀粉酶3種酶在不同菌齡菌種的白毛團或混合菌絲中,均能檢測到其活性的變化。漆酶和多酚氧化酶的活性較低,其中漆酶只有在培養10天的白毛團,以及培養10天和12天的混合菌絲中檢測到較高的酶活性;多酚氧化酶只在培養10天的白毛團和混合菌絲中檢測到較高的酶活性。

結合出耳試驗,可以初步看出,羧甲基纖維素酶 (CMC酶)、木聚糖酶、漆酶和多酚氧化酶的酶活性變化與銀耳出耳結果存在一定的相關性:①當白毛團CMC酶活力OD值較混合菌絲高0.2以上時,對應菌齡的菌種出耳較好;當白毛團和混合菌絲的CMC酶活力接近,或混合菌絲的酶活性較高時,對應菌齡的菌種出耳較差。②白毛團與混合菌絲的木聚糖酶活力OD值相差0.6～0.7時,銀耳菌種的出耳較好;當兩者的木聚糖酶活力相近時,菌種的出耳較差。③當白毛團和混合菌絲的漆酶活性或多酚氧化酶活性都很高時,相對菌齡的菌種出耳好,菌種活力較高;幼齡和老化菌種的漆酶活性或多酚氧化酶活性均極低,菌種活力也較差。生產上能否將上述酶活測定結果作為銀耳菌種活力的檢測指標,尚需進行進一步的驗證和完善。

[1]黃年來.銀耳菌種生產的原理和方法[J].食用菌,2007(1):25～27.

[2]B·施特爾馬赫 (German)(錢嘉淵譯).酶的測定方法 [M].中國輕工業出版社,1992:10～280.

[3]鐘冬秀,鐘秀媚.不同菌齡銀耳栽培種應用生產試驗 [J].食用菌,2008(4):26～27.

[4]黃年來.中國銀耳生產 [M].北京:中國農業出版社.2000:1～185.

[5]雷銀清.銀耳夏季栽培關鍵技術[J].食用菌,2007(3):54.