幾種氨基酸對哲羅魚生長、消化酶活性及血液生化指標的影響

王常安，徐奇友，許 紅，尹家勝，孫大江

（中國水產科學研究院黑龍江水產研究所，哈爾濱 150070）

隨著動物蛋白供應緊張，價格上漲，植物蛋白的研究與應用越來越引起人們的關注。而當飼料中植物蛋白添加比例增大后，一個突出的問題是，飼料的適口性下降。促攝食物質對改善飼料適口性，刺激嗅覺和味覺等感覺器官，提高飼料轉化效率，促進魚體生長等具有重要意義。日本、美國、前蘇聯早在60年代就開始采用多種方法對水產動物促攝食物質進行了研究[1]，而國內起步較晚[2]，僅在（Carassius auratus）[3]、泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus）[3]、黃鱔 (Monopterus albus)[4]等進行過研究。

氨基酸及其混合物是較好的魚類促攝食物質，而有關氨基酸對哲羅魚的促生長研究鮮有報道。已有研究表明哲羅魚配合飼料中魚粉添加量應不小于40%[5]，為降低魚粉的添加比例，本試驗研究了在低魚粉配合飼料中添加4種晶體氨基酸對哲羅魚的攝食、生長及生理生化指標的影響，以期為晶體氨基酸在哲羅魚飼料中的合理應用奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

選擇體重為(9.29±0.34)g健康的哲羅魚幼魚750尾，隨機分至15個玻璃鋼水族箱（直徑90 cm，水深45 cm）中，每缸50尾。

1.2 試驗設計與試驗飼料

試驗共5個處理，每個處理3個重復。以魚粉含量30%的基礎飼料作為對照組，在此基礎上分別添加0.5%L-Glu、0.5%L-Ala、0.5%Gly和0.5%L-Pro晶體氨基酸，其中氨基酸添加量參照文獻[3-6]。飼料原料粉碎后過60目篩，制粒（1.5 mm），-20℃冰箱中保存。試驗基礎飼料配方及營養水平見表1[7]?；A飼料氨基酸組成及含量見表2（色氨酸未檢）。L-谷氨酸純度為99.6%，甘氨酸純度為99.1%，L-丙氨酸純度為95.8%，L-脯氨酸純度為99.0%。

表1 基礎飼料配方及營養組成（干重）Table 1 Ingredients and approximate composition in the basal diets(air-dry basis) (%)

續表

表2 飼料氨基酸分析結果（干重）Table 2 Analysis result of the amino acids in the basal diets(air-dry basis) (%)

1.3 飼養管理

以商用飼料馴化7 d后正式試驗，流水飼養（0.3×10-3）～（0.4×10-3）m3·h-1，養殖周期為 56 d。水溫9.8～14.2℃，進出水口溶氧8.0～9.0 mg·L-1，pH 7.5～7.8。每天投喂2次，分別在上午8：30和16：30進行，飽食投喂，各組盡量保持一致的投喂量。每14 d調整投喂量。試驗結束后，魚體饑餓24 h，稱重。每重復隨機采集8尾魚，其中4尾用于體成分分析，另4尾用于消化酶活性分析和血液生化指標。

1.4 樣品采集與分析

1.4.1 體成分

用105℃干燥恒重法測定水分含量；以凱氏定氮法測定粗蛋白；使用索氏乙醚抽提法測定粗脂肪；以馬福爐550℃灼燒樣品7 h測定粗灰分。

1.4.2 消化酶活性

冰盤上解剖，取出肝和消化道，剔除脂肪和內含物，用冰浴生理鹽水洗凈，以濾紙吸干水分后稱重。加入9倍體積的預冷生理鹽水，勻漿。4℃條件下，4 000 r·min-1離心10 min，取上清液放為粗酶液，置于-80℃冰箱待測。蛋白酶測定采用福林-酚法[8]，脂肪酶用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法測定[9]，淀粉酶以淀粉-碘比色法測定[10]。

1.4.3 血液生化指標

尾部采血[11]。靜置30 min，在4℃條件，3 000 r·min-1離心10 min，分離血清，置于-80℃冰箱保存待測。血清生化指標采用生化分析儀（貝克曼ProCX4， 美 國）測 定 。 膽 固 醇（Cholesterol，CHOL）、甘油三酯（Glycerinate，TG）、血糖（Blood glucose，GLU）用酶法，補體C3和C4以免疫比色法，高密度脂蛋白（High density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（Low density lipoprotein，LDL）通過直接法，總蛋白（Total protein，TP）和球蛋白（Globulin，GLB）以化學法，白蛋白（Albumin，ALB）是計算值，堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、谷丙轉氨酶（Alanine transaminase，ALT）、谷草轉氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）采用速率法。

1.5 統計分析

生物指標計算：增重率（%）=100×(Wt-W0)/W0；特定生長率（%）=100×(LnWt-LnW0)/t；攝食率（%）=100×F／W0；成活率（%）=100×Nf/Ni；肥滿度=100×Wt/Lt3；餌料系數=F/（Wt-W0）。

其中，W0為試驗開始時魚體質量（g）；Wt為試驗結束時魚體質量（g）；Nf為終末尾數；Ni為初始尾數；Lt試驗結束時魚體長（cm）；F為飼料攝入量（g）；t為飼養時間（d）。

試驗結果以平均值±標準差（X±S）表示，采用SAS 8.2進行單因素方差分析和Duncan′s多重比較，顯著性水平設為0.05。

2 結果與分析

2.1 氨基酸對哲羅魚生長性能影響

基礎飼料中分別添加0.5%的 L-Glu、L-Ala、Gly和L-Pro未顯著提高哲羅魚生長性能。各處理組哲羅魚增重率、特定生長率、肥滿度和成活率均未呈現顯著差異（P>0.05）。從各處理組的攝食率數據看，飼料中分別添加晶體氨基酸L-Glu、L-Ala、Gly、L-Pro后未顯著提高哲羅魚攝食量（P>0.05）。同時，飼料系數亦未呈現顯著變化（P>0.05）。在本試驗條件下，幾種晶體氨基酸單獨添加在哲羅魚基礎飼料中，其促攝食和生長效果并不明顯；幾種非必需氨基酸的添加亦未顯著提高飼料轉化率。

表3 氨基酸對哲羅魚生長性能的影響Table 3 Effects of amino acids on growth performances in taimen Hucho taimen

2.2 對體成分影響

基礎飼料中分別添加0.5%L-Glu、0.5%LAla、0.5%Gly和0.5%L-Pro對哲羅魚魚體粗脂肪、粗灰分和水分均無顯著影響（P>0.05），特別對魚體粗蛋白亦均無顯著影響（P>0.05）。可以看出，在本試驗條件下，幾種非必需氨基酸的添加對哲羅魚的身體組成影響不大。

結果見表4。

表4 氨基酸對哲羅魚體成分的影響Table 4 Effects of amino acids on proximate composition in taimen Hucho taimen （%）

2.3 對消化酶影響

如表5所示，飼料中分別添加0.5%L-Glu、0.5%L-Ala、0.5%Gly和0.5%L-Pro對哲羅魚肝蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均無顯著影響（P>0.05）；對胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均無顯著影響（P>0.05）；與對照組前腸＋幽門盲囊（哲羅魚的幽門盲囊個數較多，而且多分散在前腸部位，很難將兩者分開，故將兩者同時進行測定）蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均差異不顯著（P>0.05）；與對照組后腸蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性均差異不顯著（P>0.05）?？梢姡暳现蟹謩e添加0.5%L-Glu、0.5%L-Ala、0.5%Gly和0.5%L-Pro未顯著提高哲羅魚消化道及消化腺的消化酶活性，因而，未顯著改變機體消化能力。

表5 氨基酸對哲羅魚消化酶的影響Table 5 Effects of amino acids on digestive enzyme activities in taimen Hucho taimen (U·g-1)

2.4 對血液生化指標影響

飼料中分別添加0.5%L-Glu、0.5%L-Ala、0.5%Gly和0.5%L-Pro對哲羅魚血清生化指標影響（見表6）。由表中可以看出，各處理組間血清生化指標無顯著差異（P>0.05）。飼料中分別添加0.5%L-Glu、0.5%L-Ala、0.5%Gly和 0.5%L-Pro后并沒有顯著提高血清TP和ALB（P>0.05），未顯著影響轉氨酶ALT和AST水平（P>0.05）；對血脂（TG、CHOL、HDL、LDL）及免疫指標（GLB、ALP、C3、C4）亦無顯著影響（P>0.05）。由此可以得出，飼料中幾種非必需氨基酸的添加，可能并未改變哲羅魚機體的代謝水平及免疫力。

表6 氨基酸對哲羅魚血液生化指標的影響Table 6 Effects of amino acids on serum indices in taimen Hucho taimen

3 討論與結論

水產動物促攝食物質種類較多，而氨基酸是魚類促攝食物質中主要的活性成分[12]，其主要包括L-谷氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸、L-精氨酸、L-組氨酸、L-脯氨酸、L-亮氨酸、L-酪氨酸、L-蛋氨酸等[13]。如，L-谷氨酸對虹鱒（Oncorhynchus mykiss）具有一定誘食效果[14]；0.5 mmol·L-1L-丙氨酸對真鯛（Pagrosomus major）、條紋鱸（Moron saxasilis)和紅鰭東方鲀 (Takifugu rubripes)有較強引誘作用；0.5 mmol·L-1甘氨酸對條紋鱸和紅鰭東方鲀誘食效果較好[15]；L-脯氨酸對大西洋鮭(Salmo salar)和河鱒（Salmo trutta）誘食效果強烈[16]。但是不同種水產動物對不同的氨基酸反應不同[13]。L-丙氨酸+L-精氨酸+甘氨酸在不同程度上抑制鯽的攝食，卻可引誘泥鰍積極攝食；L-丙氨酸可明顯引誘泥鰍攝食，而甘氨酸卻有顯著抑制作用[3]。本試驗結果表明，飼料中分別添加0.5%L-谷氨酸、0.5%L-丙氨酸、0.5%甘氨酸和0.5%L-脯氨酸后，哲羅魚的攝食率沒有顯著提高（P>0.05），可見，本試驗條件下，幾種晶體氨基酸對哲羅魚的促攝食效果并不明顯。一種原因可能是哲羅魚對晶體氨基酸的利用效果不明顯。徐奇友等研究表明，飼料中添加晶體氨基酸（L-蘇氨酸、L-蛋氨酸、L-賴氨酸）無明顯的促進生長作用[5]。其次，添加晶體氨基酸的濃度對哲羅魚并不適宜。對黃鱔進行的誘食試驗表明，隨著氨基酸濃度從0.5%增加到10.0%，L-精氨酸、L-丙氨酸對黃鱔攝食的影響從微弱抑制轉為促攝食作用，且促攝食作用隨著濃度的增加而增加[4]。此外，可能氨基酸單獨添加對哲羅魚的促攝食效果不明顯，而氨基酸與核苷酸等復合后對哲羅魚具有促生長效果。這因為在作為促攝食物質——天然餌料提取物中，氨基酸、核苷酸和甜菜堿等共同存在[12]。日本鰻鱺（Anguilla japonicus）飼料中添加甘氨酸、L-脯氨酸、L-組氨酸、L-丙氨酸以及尿苷酸組成的復合誘食劑，可提高胃蛋白消化酶活性2倍，飼料效率2.16倍，蛋白質效率2.15倍，同時降低血液中血糖和游離氨基酸含量[17]。

在畜禽飼料中添加晶體氨基酸可提高機體對蛋白質的利用率和飼料轉化效率，從而起到促進畜禽生長效果。然而，水產動物利用晶體氨基酸的能力至今仍無確切結論，可能水產動物腸道能吸收蛋白質分解出的氨基酸而不能直接吸收晶體氨基酸[18]。對虹鱒、鯉（Cyprinus carpio）、羅非魚（Tilapia mossambica）和凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）的研究結果表明，其利用晶體氨基酸的效率遠低于結合蛋白質[18]。本研究表明，飼料中添加的0.5%L-谷氨酸、0.5%L-丙氨酸、0.5%甘氨酸、0.5%L-脯氨酸未被哲羅魚很好吸收。哲羅魚的肝、胃、腸道和幽門盲囊的蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性無明顯變化，說明幾種晶體氨基酸的添加并沒有明顯改善魚體消化機能。氨基酸如果被吸收后，大部分會用作蛋白質的合成，只有少部分多余的氨基酸會被脫去氨基，或轉化成脂質和糖，或進入三羧酸循環被氧化釋放出能量[19]。從本試驗結果來看，添加幾種晶體氨基酸后機體的體成分并沒有發生顯著變化（P>0.05），血清轉氨酶、總蛋白未顯著提高（P>0.05），說明幾種晶體氨基酸并沒有提高機體的蛋白合成能力，同時也證實晶體氨基酸可能并沒有被充分吸收。飼料中添加氨基酸還可影響水產動物免疫力。如：谷氨酸鹽在參與機體免疫作用中是一種重要的氨基酸，它在斑點叉尾鮰（Ictalurus punctatus）巨噬細胞噬菌及淋巴細胞分解作用所必需，也是免疫作用中重要的能量來源；精氨酸能顯著影響斑點叉尾鮰體內和體外一氧化氮的合成，從而調節機體免疫力[20]。本試驗飼料中添加0.5%L-谷氨酸、0.5%L-丙氨酸、0.5%甘氨酸和0.5%L-脯氨酸對哲羅魚血清球蛋白、補體C3、補體C4、堿性磷酸酶等免疫指標未發生改變，一方面可能由于哲羅魚的促攝食效果不明顯，同時，氨基酸未被吸收或吸收率很低，導致添加的氨基酸對機體生理生化指標影響較小。從另一方面來看，這些指標未能完全反映魚體的免疫力，因此，這幾種氨基酸是否已對哲羅魚魚體氨基酸免疫力產生影響，需要進一步證實。

此外，關于魚類促攝食物質作用的研究，人們所采用的方法不同，這在很大程度上造成結果可比性較差[21]。目前，研究的方法主要有攝食行為法、電生理法和生長試驗法等，但各種方法各有利弊。薛敏等認為，首先應通過攝食行為裝置和電生理方法，篩選出對魚類具有明顯有引誘作用的促攝食物質，然后經過長期生長試驗進行精確驗證[21]。哲羅魚于2000年養殖馴化成功，對沉底飼料攝食不積極，而對緩慢沉降的飼料攝食積極，采用迷宮法和觸球試驗不是理想研究手段；而能引起強烈神經沖動的物質又未必具有促攝食作用，因而，以攝食生長試驗研究哲羅魚促攝食物質不失為一種較為有效的研究方法。

低魚粉基礎飼料中添加0.5%L-谷氨酸、0.5%L-丙氨酸、0.5%甘氨酸和0.5%L-脯氨酸對哲羅魚：①促攝食效果不明顯；②生長性能提高不顯著；③全魚的生化組成影響不明顯；④消化道及消化腺的消化酶活性影響不顯著；⑤血清生化指標影響不明顯。

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