牛蒡醇提取物抗腫瘤活性研究

徐 力

（長春中醫藥大學附屬醫院藥劑科，吉林 長春 130021）

牛蒡（Arctiumlal，aLinn）別名大力子、牛子等。牛蒡為我國古老的藥食兩用蔬菜，明朝李時珍稱其“剪苗淘為蔬，取根煮，曝為脯，云其益人”，《本草綱目》中詳載其“通十二經脈，除五臟惡氣”；《名醫別錄》稱其“久服輕身耐老”。牛蒡于公元940年前后傳入日本，并被培育成優良品種，現日本人把牛蒡奉為營養和保健價值極佳的高檔蔬菜。牛蒡憑借其獨特的香氣和純正的口味，風靡日本和韓國，走俏東南亞，并引起西歐和美國有識之士的關注，可與人參媲美，有“東洋參”的美譽。

文獻報道牛蒡含有木脂素類、萜類、脂肪酸類等有機物質，在牛蒡子中鑒定了牛蒡苷及其苷元[1-5]。牛蒡的藥理作用至今報道了抗菌及抗真菌、抗糖尿病、免疫調節、鎮痛、鎮靜及誘導植物系統抗性等作用，本研究研究并報道牛蒡醇提取物的體外抗腫瘤作用。

1 實驗材料

1.1 藥物

牛蒡提取物由我院制劑室提取制備。將全草用95%乙醇提取，減壓回收乙醇，干燥，即得黃色粉末，收率3.5%。

1.2 菌株及其來源

中國倉鼠卵巢CHO 細胞株，吉林大學細胞免疫實驗室。

1.3 培養基

固體培養基（g/L）： 葡萄糖 40、蛋白胨 10、酵母浸出粉 10、瓊脂 20、蒸餾水1000mL。液體發酵培養基（g/L）：葡萄糖 40、蛋白胨10、酵母浸出粉 10、蒸餾水 1000mL。

細胞培養基：DMEM/F12培養基（含10%小牛血清以及100μg/mL青霉素和 100μg/mL 鏈霉素）。

1.4 試劑及儀器

無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯等均為分析純。Spectra M2 酶標儀，美國 Molecular Devices 公司。

2 方法與結果

2.1 腫瘤細胞生長抑制實驗方法[6]

細胞的亞培養：CHO細胞經0.25%胰酶消化后加新鮮培養液，于溫度為37℃，5%CO2培養箱中培養，每2～3d更換一次培養液，待細胞生長到對數分裂期，用于進一步實驗。96孔板種子細胞的培養：待細胞進入對數分裂期，將細胞從培養瓶中轉移到96孔板中培養，以每孔4.0×104個細胞接種于96孔細胞培養板中，每孔體積100μL，同時留出3個空白孔（不加細胞），于37℃、5%CO2培養箱中培養24h。加樣品與細胞共培養：待細胞在96孔板中穩定24h且貼壁后，用移液器吸出舊的培養液，然后每孔加90μL 新鮮培養液和10μL溶于12.5%DMSO的樣品，同時設100%對照組、0% 對照組，100%和0%對照孔中分別加入90μL新鮮培養液和10μL 12.5%DMSO（其中100% 對照組是 3 個無細胞的空白孔），于 37℃、5%CO2培養箱中培養 72h。

酶標儀檢測：細胞加樣品共培養72h 后，每孔加20μL 0.05%Resazurin，于培養箱中保溫2h，用酶標儀檢測熒光強度（FLU），激發波長 530nm，發射波長 590nm。

2.2 按照 2.1 中的方法加入供試樣品，每個濃度樣品設 3 個重復，進行樣品的細胞生長抑制活性實驗，各樣品對腫瘤細胞抑制率的具體實驗，結果見表1。

表1 牛蒡提取物對CHO細胞的生長抑制率

由表1 可以看出，牛蒡提取物抑制腫瘤細胞活性差異較顯著，當牛蒡提取物濃度為20mg/mL時對CHO腫瘤細胞的抑制率達到 70.11%。經進一步計算結果，對牛蒡提取物對CHO 細胞株的 IC50為 12.11mg/mL。

3 討 論

本實驗以中國倉鼠卵巢（CHO）細胞株作為模型，用Resazurin 法檢測生長抑制率，對牛蒡提取物進行體外抗腫瘤活性實驗，證明了它的體外抗腫瘤活性。牛蒡的抗腫瘤活性詳細作用機理，有待與進一步研究。

[1]Yamaguchi S,Takido M,Sankawa U,et al.On the constituents of the fruit of ArCtium lapPa[J].Yakugaku Zasshi,1976,96(12):1492-1493.

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[3]王海燕,楊竣山.牛蒡子化學成分的研究[J].藥學學報,1993,28(2):911-913.

[4]羅永明,朱英,李斌,等.牛蒡子揮發油成分的GC-MS分析[J].中藥材,1997,20(I2):621-623.

[5]Moritani S,Nomura M,Takeda Y.Cytotoxic components of Bardanae fructus (Goboshi)[J].Biol Pharm Bull,1996,l9(11):1515.

[6]Promega 公司.CellTiter-BlueTM 細胞活性檢測系統[R].普洛麥格中文通訊,2003.