MVP在口咽鱗癌中的表達及臨床病理意義

邢海杰， 鄧錦文， 卜平風， 王明靜， 鄧啟華

主穹窿蛋白(major vault protein，MVP)在人體多種腫瘤細胞中表達水平較高［1］，且與腫瘤化療反應性及預后密切相關［2-3］。最近研究顯示，MVP參與細胞間信號傳導、細胞分化、免疫啟動和細胞凋亡的調節(jié)［2，4］，是腫瘤潛在的治療靶標［5］。MVP 與口咽鱗癌關系的研究少見報道。本研究旨在檢測

MVP在口咽鱗癌中的表達變化，分析其與口咽鱗癌的臨床病理關系，為口咽鱗癌的臨床診治提供分子生物學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2000年4月至2009年5月收治的口咽鱗癌患者共73例，其中男69例，女4例。年齡27～73歲，中位年齡58.4歲。所有病例均經(jīng)病理檢查證實為鱗狀細胞癌。按Broders分類，鱗癌Ⅰ級34例，Ⅱ級20例，Ⅲ級13例，未分級6例。根據(jù)UICC2002分期標準，T1 3例，T2 28例，T3 32例，T4 10例，N0 47例，N1 13例，N2 11例，N3 2例，所有病例無遠處器官轉移。

1.2 主要儀器及試劑 切片機及烤箱購自上海醫(yī)療儀器廠，鼠抗人MVP單克隆抗體(MVP-56)、二抗及染色劑均購自武漢博士德生物技術公司。

1.3 治療方法 單純手術治療13例，其中根治切除11例，姑息切除2例;單純放療27例;單純化療4例;綜合治療29例，包括手術+放療9例，手術+化療3例，放療+化療7例，化療+放療10例。原發(fā)灶放療劑量為58～70 Gy，平均劑量為66 Gy，術后放療劑量為42～60 Gy，平均劑量為56.4 Gy。頸部放療劑量為42～56 Gy，平均劑量為50.6 Gy，分割劑量均為2 Gy/d。化療方案選擇，DDP+5-FU+BLM方案化療16例，DDP+5-FU方案化療5例，泰素+DDP+5-FU方案化療3例，化療2～4個療程。根據(jù)實體瘤化療療效評價標準，初治接受化療的14例，完全緩解(CR)2例，部分緩解(PR)3例，化療無效及進展9例。

1.4 MVP檢測 收集所有病例組織蠟塊，常規(guī)組織切片，厚度4 μm，脫水脫蠟。采用免疫組織化學法檢測。操作步驟按試劑盒說明書進行，每批實驗均設陰性對照，DAB顯色，蘇木素復染，樹膠封片。

1.5 MVP表達結果判定 以細胞胞漿出現(xiàn)棕黃或亮黃色顆粒為染色陽性。高倍鏡下任取5個視野進行計數(shù)，按陽性細胞比例分為:(－)無陽性細胞出現(xiàn)或陽性細胞數(shù)＜10;(+)陽性細胞數(shù)10～25;(++)陽性細胞數(shù) 26～50;(+++)陽性細胞數(shù) ＞50。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，應用非參數(shù)統(tǒng)計中獨立樣本檢驗、Spearman等級相關進行統(tǒng)計學分析，生存分析采用Log-Rank檢驗，多因素分析使用COX風險比例模型。P＜0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 MVP表達陽性率 73例患者中MVP表達陽性者49例，其中(+)14例，(++)17例，(+++)18例，MVP陽性表達率為67.1%(49/73)。陰性表達24例，陽性表達見圖1。

2.2 MVP表達與口咽鱗癌臨床病理關系 MVP表達水平與口咽鱗癌頸部淋巴結轉移及放、化療敏感性相關，P＜0.05;MVP表達與口咽鱗癌性別、年齡、病理分化程度以及 T分期無相關性，P＞0.05，見表1。患者的5年生存率分別為6.0% 和51.7%，差異有統(tǒng)計學意義(Log Rank=59.7，P ＜ 0.001)，見圖2、3。

表1 MVP表達與口咽鱗癌臨床病理參數(shù)的關系

圖2 73例口咽鱗癌患者總生存率曲線

圖3 73例MVP表達陰性和陽性患者生存率曲線

把年齡、性別、病理分化程度、腫瘤T分期、N分期、治療方法以及MVP表達狀態(tài)引入COX比例風險模型行多因素分析顯示，MVP表達狀態(tài)是口咽鱗癌生存的獨立相關因素，P＜0.001。見表2。

表2 MVP與口咽鱗癌預后的多因素分析結果

3 討論

在人體多種腫瘤細胞中，MVP表達水平較高，表達陽性率為 68.6% ～ 96.7%［3，6］。本組資料中，MVP陽性表達率為67.1%，與有關報道相近，顯示在口咽鱗癌細胞中，MVP的表達水平較高，MVP與口咽鱗癌的發(fā)生、發(fā)展可能存在密切關系。

3.1 MVP與腫瘤淋巴結轉移 MVP表達與淋巴結轉移的關系尚有不同結論。Zuo等［1］檢測68例原發(fā)性乳腺癌中MVP的表達，結果顯示MVP表達陽性的乳腺癌患者淋巴結轉移的風險增高(P＜0.05)，表明MVP表達水平與淋巴結轉移相關。但在食管鱗癌組織中，MVP表達水平的升高與淋巴結轉移無顯著相關性。

本組資料的結果顯示，在頸部淋巴結轉移病例中，MVP表達陽性率顯著高于無頸部淋巴結轉移病例(P＜0.05)，顯示在口咽鱗癌中，MVP表達與頸部淋巴結轉移存在相關性，與Zuo的結論較一致，同時也表明MVP表達與腫瘤細胞的侵襲性有關，MVP表達增高者腫瘤的侵襲性強，腫瘤轉移的機率隨之升高。這可能與MVP的細胞信號調節(jié)作用有關，MVP通過上調Bcl-2表達抑制細胞凋亡［7］，同時，通過磷酸化途徑調節(jié)上皮細胞生長因子信號，影響細胞的增殖［8］，促進腫瘤細胞的轉移，但其調節(jié)機制尚需進一步研究。

3.2 MVP與放療敏感性 MVP與放療敏感性關系的報道不多。Silva等［9］的研究顯示，口咽癌中MVP表達水平變化與口咽癌放療敏感性存在相關性，隨著MVP表達水平的升高，患者的放療敏感性降低(P＜0.05)。本組資料顯示，MVP表達水平較高的患者，對放療的反應性較差，與Silva的結論較一致，但由于病例較少，無法進一步分析MVP表達水平與放療反應性的關系。MVP表達水平影響口咽癌放射治療敏感性的機制還不清楚。有學者認為MVP與PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)的相互作用是重要機制之一，PTEN通過PI3K途徑調節(jié)細胞生長，降低cyclin D1水平［10］，高表達的MVP促進PTEN自胞漿轉運至胞核，在 G0～G1期達峰值，S期下降，延長細胞周期［11］，使放、化療作用于分裂期腫瘤細胞，而處于靜止期的腫瘤細胞易于出現(xiàn)放療耐受［12］。

另一方面，放射線可增加MVP磷酸化，與COP1(photomorphogenic protein 1)分離，下調c-Jun轉錄，MVP與c-Jun作用進一步調節(jié)AP-1(activator protein-1)活性，抑制腫瘤細胞生長，有利于細胞修復潛在的致死性損傷，降低腫瘤細胞對藥物和放射治療的敏感性［13］，同時，DNA損傷增強 MVP啟動子活性，促進 MVP 水平的提高［14］。

3.3 MVP與化療敏感性的關系 目前認為，MVP高表達腫瘤對化療敏感性較差，主要與MVP的漿-核轉運功能有關，MVP可把進入胞核內的細胞毒藥物轉輸至胞漿，使細胞毒藥物失去抗腫瘤靶標［15］。本組資料只有14例患者初治接受化療，5例有效，雖然分析顯示MVP與腫瘤的化療敏感性有關(P＜0.05)，但仍需進一步積累資料觀察。

在口咽鱗癌發(fā)生過程中致癌和抑癌因素的選擇作用使MVP高表達的腫瘤細胞更易于存活并增殖，即MVP表達陽性的腫瘤細胞更易轉運外源或內源性抑癌物質從而減輕對癌細胞核的毒性，使該癌細胞更易于存活和增殖，這也與MVP的生理功能相吻合。

3.4 MVP與口咽鱗癌預后 MVP表達與多種腫瘤的預后相關［16］。在卵巢癌和成人急性粒細胞白血病中，MVP表達可以作為獨立的化療反應性和預后的預測指標［3，17］。

本組患者5年總生存率為24.2%，MVP表達陽性和陰性患者的5年生存率分別為6.0%和51.7%(P ＜ 0.001)，與 Silva 等［9，18］的結論一致。隨著MVP表達水平的升高，口咽鱗癌的放療、化療敏感性下降，臨床療效降低，預后變差。多因素分析結果也顯示，MVP表達陽性是口咽鱗癌預后的獨立預測因素(P＜0.001)，這一結果顯示通過檢測MVP的表達可評估口咽鱗癌的臨床治療效果和預后，值得進一步深入研究。

本研究顯示，MVP與口咽鱗癌的淋巴結轉移和放、化療反應性以及預后密切相關，進一步探討MVP與口咽鱗癌發(fā)生的關系，有利于弄清口咽鱗癌的發(fā)展變化，為口咽鱗癌早期診斷和有效治療提供有意義的生物學評估指標。

［1］ 左文述，魏玲，宋現(xiàn)讓，等.浸潤性乳腺癌組織中P-糖蛋白以及肺耐藥蛋白和多藥耐藥相關蛋白表達的臨床意義［J］.中華醫(yī)學雜志，2006，86(44):3142-3145.

［2］ Steiner E，Holzmann K，Elbling L，et al.Cellular functions of vaults and their involvement in multidrug resistance［J］.Curr Drug Targets，2006，7(8):923-934.

［3］ Lloret M，Lara PC，Bordón E，et al.MVP expression is related to IGF1-R in cervical carcinoma patients treated by radiochemotherapy［J］.Gynecol Oncol，2008，110(3):304-307.

［4］ Ikeda R，Iwashita K，Sumizawa T，et al.Hyperosmotic stress upregulates the expression of major vault protein in SW620 human colon cancer cells［J］.Exp Cell Res，2008，314(16):3017-3026.

［5］ Ryu SJ，Park SC.Targeting major vault protein in senescence-associated apoptosis resistance［J］.Expert Opin Ther Targets，2009，13(4):479-484.

［6］ 李建輝，侯東祥，郭黨學，等.MRP和LRP的表達與食管鱗癌臨床病理特征的關系［J］.西安交通大學學報(醫(yī)學版)，2005，26(4):377-380.

［7］ Ryu SJ，An HJ，Oh YS，et al.On the role of major vault protein in the resistance of senescent human diploid fibroblasts to apoptosis［J］.Cell Death Differ，2008，15(11):1673-1680.

［8］ Kolli S，Zito CI，Mossink MH，et al.The major vault protein is a novel substrate for the tyrosine phosphatase SHP-2 and scaffold protein in epidermal growth factor signaling［J］.J Biol Chem，2004，279(28):29374-29385.

［9］ Silva P，West CM，Slevin N，et al.Tumor expression of major vault protein is an adverse prognostic factor for radiotherapy outcome in oropharyngeal carcinoma［J］.Int J Radiat Oncol Biol Phys，2007，69(1):133-140.

［10］ Chung JH，Eng C.Nuclear-cytoplasmic partitioning of phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10(PTEN)differentially regulates the cell cycle and apoptosis［J］.Cancer Res，2005，65(18):8096-8100.

［11］ Chung JH，Ginn-Pease ME，Eng C.Phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10(PTEN)has nuclear localization signal-like sequences for nuclear import mediated by major vault protein［J］. Cancer Res，2005，65(10):4108-4116.

［12］ Lohrer HD.Regulation of the cell cycle following DNA damage in normal and Ataxia telangiectasia cells［J］.Experientia，1996，52(4):316-328.

［13］ Yi C，Li S，Chen X，et al.Major vault protein，in concert with constitutively photomorphogenic 1，negatively regulates c-Junmediated activator protein 1 transcription in mammalian cells［J］.Cancer Res，2005，65(13):5835-5840.

［14］ Shimamoto Y，Sumizawa T，Haraguchi M，et al.Direct activation of the human major vault protein gene by DNA-damaging agents［J］.Oncol Rep，2006，15(3):645-652.

［15］ Brugger D，Brischwein K，Liu C，et al.Induction of drug resistance and protein kinase C genes in A2780 ovarian cancer cells after incubation with antineoplastic agents at sublethal concentrations［J］.Anticancer Res，2002，22(6C):4229-4232.

［16］ Li XQ，Li J，Shi SB，et al.Expression of MRP1，BCRP，LRP and ERCC1 as prognostic factors in non-small cell lung cancer patients receiving postoperative cisplatin-based chemotherapy［J］.Int J Biol Markers，2009，24(4):230-237.

［17］ Izquierdo MA，Scheffer GL，F(xiàn)lens MJ，et al.Major vault protein LRP-related multidrug resistance［J］.Eur J Cancer，1996，32A(6):979-784.

［18］ Silva P，Slevin NJ，Sloan P，et al.Use of multiple biological markers in radiotherapy-treated head and neck cancer［J］.J Laryngol Otol，2010，124(6):650-658.