P27及VEGF在膀胱移行細胞癌中的表達及臨床意義

梁 豪， 李志軍， 張建國， 程遠合， 孫國賢， 肖 飛， 王曉輝， 王曉彬

癌基因的激活與抑癌基因的失活共同導致腫瘤的發生、發展。p27是最近幾年發現的抑癌基因，國內外許多研究發現其表達蛋白P27在腫瘤細胞中的表達明顯降低或消失，表達量與腫瘤的病理分級呈負相關。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種作用強、特異性高的內皮細胞有絲分裂原，其通過與內皮細胞膜上的受體結合而引起一系列的信號轉導，刺激血管內皮細胞增殖，誘導新生血管生成，在腫瘤發展、轉移過程中同樣發揮重要作用。本研究擬采用免疫組化SP法檢測膀胱移行細胞癌與正常組織中P27、VEGF的表達情況，探討二者在膀胱移行細胞癌發生、發展及轉移過程中的作用，為膀胱癌的診斷及臨床治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象及分組 收集2008—2010年河南科技大學第一附屬醫院泌尿外科手術切除的60例術后病理檢查為膀胱移行細胞癌(bladder transitional cell carcinoma，BTCC)的組織作為BTCC組，其中男38例，女22例，年齡45～75歲，平均年齡58歲。按WHO分級標準:G1級24例，G2級21例，G3級15例;臨床分期按2002年UICC的TNM分期標準分為:淺表性癌(Ta～T1)39例，浸潤性癌(T2～T4)21例。同時選擇10例取自恥骨上經膀胱前列腺摘除手術的正常膀胱組織作為對照組。BTCC組與對照組的年齡及性別無顯著差異，具有可比性。

1.2 方法 鼠抗人VEGF單克隆抗體(即用型)，鼠抗人P27單克隆抗體(即用型)及SP試劑盒均購自福建邁新生物技術開發公司;免疫組化步驟按過氧化物酶標記鏈霉素抗生物素(SP)法進行。

1.3 陽性判斷標準 在胞膜和胞質內出現明顯棕黃色顆粒者為VEGF陽性細胞;在胞核內出現明顯棕黃色顆粒者為P27陽性細胞。以福建邁新生物技術開發公司提供的陽性切片作為染色的陽性對照，切片中陽性細胞數≤20%為陰性;陽性細胞數＞20%為陽性。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件處理數據，統計學方法為χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

P27在膀胱移行細胞癌組織中的表達顯著低于正常膀胱組織，兩者相比有統計學意義(P＜0.05);VEGF在膀胱移行細胞癌組織中的表達顯著高于正常膀胱組織，兩者相比有統計學意義(P＜0.05);P27在膀胱移行細胞癌中的陽性表達率隨腫瘤病理分級與臨床分期的升高而降低(P＜0.05);VEGF的陽性表達率則隨腫瘤病理分級與臨床分期的升高而增高(P ＜0.05)。詳見表1、表2。

表1 P27在膀胱移行細胞癌組織及正常膀胱組織中的表達及其與病理分級、臨床分期的關系

表2 VEGF在膀胱移行細胞癌組織及正常膀胱組織中的表達及其與病理分級、臨床分期的關系

3 討論

近年來，隨著分子生物學的發展，腫瘤發病機制的研究也有較大進展。目前普遍認為癌基因的激活、抑癌基因的失活以及兩者的表達失衡導致了細胞增殖和凋亡異常，與腫瘤的發生發展密切相關。膀胱癌是泌尿系統常見的惡性腫瘤，無論發病率還是死亡率均居泌尿系腫瘤的前列［1］。膀胱癌的病理組織學類型有90%以上是移行細胞癌，因此有必要對膀胱移行細胞癌的生物學行為進行研究。本實驗即通過對P27和VEGF在膀胱移行細胞癌組織中表達水平的研究，探討其在BTCC發生和發展過程中的作用，從而為膀胱移行細胞癌的診斷及臨床治療提供理論依據。

3.1 P27與膀胱移行細胞癌 p27是Polyak等首先發現的一種調控細胞周期并抑制細胞分裂的重要基因，他定位于第12號染色體短臂 1區 3帶(12p13)，其編碼的P27蛋白含有198個氨基酸，相對分子質量為27×103，由2個外顯子和2個內含子組成。P27蛋白的N端沒有結構鋅指的結構域，C端有2個分開的核定位信號。P27主要與cyclin結合而抑制CDK的激活過程，從而阻止細胞周期由G1期向S期的轉換，進而負性調控細胞周期進程，抑制細胞增殖。P27還可以作為凋亡的啟動子誘導腫瘤細胞凋亡［2］。一般認為，P27表達的下降可以促進腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移。

本實驗結果與已有的相關報道結果基本一致［3-4］，即大多數正常膀胱組織中P27均高度表達，而BTCC組織中P27的表達明顯降低，說明P27可能在BTCC的發生發展中起重要作用;低分化(G3)的腫瘤組織P27的表達明顯低于高度和中度分化(G1和G2)的腫瘤組織，隨著腫瘤分級和分期的逐漸增高，P27的表達逐漸降低，說明P27可能抑制腫瘤的惡性表型，同時抑制腫瘤的浸潤和轉移。因此，可以根據P27的表達情況初步判斷腫瘤的進展及預后。

3.2 VEGF與膀胱移行細胞癌 VEGF為血管內皮生長因子，是1989年Gosperdarowiz等從牛垂體濾泡星狀細胞體外培養液中分離出來的一種特異性的促血管內皮細胞有絲分裂的因子，是目前知道的唯一能特異性作用于血管內皮細胞的血管生成因子，其通過與內皮細胞膜上的受體結合，使血漿蛋白外滲，引起繼發的信號轉導，最終刺激血管內皮細胞增殖，誘導新生血管生成。VEGF是腫瘤生成和轉移的先決條件之一。目前在許多惡性腫瘤中，如:結腸癌、乳腺癌、肺癌、腎癌等的組織和體外培養的細胞株中均發現 VEGF mRNA的高表達［5-6］。但有關BTCC組織中VEGF表達的研究國內報道很少。

膀胱移行細胞癌是最常見的泌尿系統惡性腫瘤，BTCC瘤體的生長亦依賴于新血管的生成。本實驗結果顯示，正常膀胱組織中VEGF的表達很低(陽性率10%)，而BTCC組織中的表達則明顯升高;隨著腫瘤分級和分期的逐漸增高，VEGF的表達逐漸上升。本實驗結果與 Salven等［7］及 Jacobsen等［8］的報道結果一致。通過對BTCC細胞中VEGF表達的研究，不難推測VEGF在BTCC的發生發展中起促進作用;且VEGF的表達隨著腫瘤病理分級和臨床分期的升高而升高，因此其可作為觀察BTCC的進展情況和判斷臨床預后的指標。

總之，膀胱移行細胞癌組織中P27表達水平的明顯下調以及VEGF表達水平的明顯上調，可能與膀胱移行細胞癌的發生、發展、轉移有關，檢測二者的表達有助于綜合判斷BTCC的生物學行為。

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［8］ Jacobsen J，Rasmuson T，Grankvist K，et al.Vascular endothelial growth factor as prognostic factor in renal cell carcinoma［J］.J Urol，2000，163(1):343-347.