類風濕關節炎患者外周血CD19+CD23+B淋巴細胞水平及其與疾病活動性的關系

林 威 陳素娟 (福建醫科大學附屬協和醫院干部病房，福建 福州 35000)

類風濕關節炎 (rheumatoidarthritis，RA)發病機制可能與遺傳、細菌與病毒感染、機體免疫功能紊亂、環境及激素等有關〔1〕。近年來證據表明B淋巴細胞與多種自身免疫性疾病的發病機制有關，但B淋巴細胞在RA發病機制中的作用一直存在爭議〔2〕。白細胞分化抗原 (CD)19是B細胞表面所特有的CD抗原分子，在B細胞分化及成熟的全過程中均表達〔3〕，其分子表達可代表B淋巴細胞水平。而CD23是B細胞活化和克隆性增生的標志之一〔4〕，因此外周血CD23+/CD19+細胞的含量可代表活化B淋巴細胞的水平。本研究通過分析外周血B淋巴細胞相關表面標記CD19、CD23的表達與RA患者疾病活動度指標的相關性，評估CD19+CD23+B淋巴細胞檢測在反映病情嚴重程度和監測病情活動性、指導臨床用藥方面潛在的價值，并進一步探討B淋巴細胞在RA發病機制中的作用，為臨床治療方案的選擇提供理論依據。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2008年4月至2009年10月我院收治的50例RA患者為研究對象(RA組)，均符合1987年美國風濕病協會制定的RA診斷標準。排除其他結締組織病;其他原因引起的嚴重的肝、腎疾病;其他原因引起的血液、內分泌系統病變;各種感染性疾病或惡性腫瘤等患者。其中男16例，女34例;年齡20～70〔平均(50.9±4.7)〕歲;病程 0.5～28年，平均(4.8±2.5)年。另選擇同期健康體檢者20例為對照組，性別、年齡均與RA組患者相匹配。

1.2 方法

1.2.1 B淋巴細胞相關表面標記CD19、CD23的檢測 RA組患者均于入院時抽取清晨空腹靜脈血3 ml;正常對照組于體檢時抽取清晨空腹靜脈血3 ml。3 000 r/min離心15 min，棄上清，留取沉淀細胞并打散，轉入流式管中，應用流式細胞儀(美國貝克曼公司)檢測外周血B淋巴細胞相關表面標記CD19、CD23的表達。淋巴細胞分離液、破膜打孔液、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)標記-抗人CD19單克隆抗體、藻紅蛋白(phycoerythrin，PE)標記-抗人CD23單克隆抗體及同型對照等均購自美國貝克曼公司。

1.2.2 疾病活動度指標 收集RA組患者的臨床資料和實驗室指標，包括晨僵時間、關節壓痛數(個，采用28關節計數法)、關節腫脹數(個，采用28關節計數法)、疾病活動指數28(DAS28)、紅細胞沉降率(ESR)、C-反應蛋白(CRP)、類風濕因子(RF)、血小板計數(PLT)等。

1.3 統計學處理 應用SPSS11.0統計軟件，資料數據以表示，兩組之間比較采用t檢驗，相關資料用Pearson相關分析。

2 結果

2.1 RA組患者和對照組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達率 RA組患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細胞百分率均明顯較正常對照組顯著升高(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達率比較(，%)

表1 兩組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達率比較(，%)

與對照組比較:1)P＜0.05

組別 n CD19+ CD23+ CD23+/CD19+RA組 50 12.64±2.931) 9.25±2.171) 5.84±1.481)對照組20 6.37±1.74 2.46±0.78 1.95±0.62

2.2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達率與DAS的相關性 相關性分析顯示，CD19+表達率與晨僵時間、關節壓痛數、關節腫脹數、RF、PLT、DAS28呈正相關(均P＜0.05)，而與ESR、CRP無明顯相關關系(均P＞0.05)。CD23+及CD23+/CD19+表達率與晨僵時間、關節壓痛數、關節腫脹數、ESR、CRP、RF、PLT、DAS28 呈顯著正相關關系(均P＜0.05)，見表2。

表2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達率與疾病活動度指標的相關性

3 討論

以往對RA發病機制的研究多集中在成纖維細胞、巨噬細胞、T細胞或細胞因子等方面，而B淋巴細胞作為抗體介導的體液免疫反應的始動細胞，其與RA發病機制的關系近幾年逐漸受到重視。首先是組織病理學發現在RA患者滑膜組織中存在著豐富的 B細胞〔5〕，同時 Brezinschek等〔6〕研究發現利妥昔單抗用于治療難治性RA患者取得較好的療效，其作用機制是損耗外周血中的B細胞，提示B細胞可能在RA的發病機制中起著重要作用。因此研究B淋巴細胞與RA的關系對進一步認識RA發病機制及研發新的免疫治療具有重要價值。

CD19是分子量為95 kD的Ig超家族成員，屬于B細胞限制性抗原，其表達高低可代表外周血B淋巴細胞水平，功能類似于T細胞表面的CD4/CD8，具有協同受體的作用，參與調控B細胞的活化和增殖及信號傳導過程。目前認為CD19+B細胞可能在RA的發病機制中發揮重要作用〔7，8〕。CD23是分子量為45 kD的低親和力IgE Fc受體〔9〕，其分子結構包括一個由23個氨基酸殘基組成的胞漿內N末端、21個殘基的跨膜區和277個殘基的膜外區。CD23是重要的白細胞分化抗原，同時也是T細胞來源的低分子量B細胞生長因子受體，主要在B細胞、嗜酸粒細胞、激活的單核/巨噬細胞、部分T細胞等細胞膜上表達。研究發現CD23的持續性表達反映了B淋巴細胞克隆性增生，常作為B淋巴細胞的激活分化標志之一〔10，11〕，而外周血CD23+/CD19+細胞的表達則代表活化B淋巴細胞水平。

本研究結果發現 RA組患者外周血 CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細胞百分率均較正常對照組顯著升高，提示B淋巴細胞的異常表達在RA發病機制中可能起一定作用。同時分析RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細胞表達與疾病活動度指標的相關性，發現CD19+細胞表達與晨僵時間、關節壓痛數、關節腫脹數、RF、PLT、DAS28呈正相關，而與ESR、CRP無明顯相關關系，說明在一定程度上，CD19+表達反映了RA病情活動性。CD23+及CD23+/CD19+細胞表達率與疾病活動度指標均呈顯著正相關關系，說明 CD23+及CD23+/CD19+與RA的病情活動關系密切，CD23+及CD23+/CD19+檢測可為RA的病情監測提供一定的參考。推測可能是RA患者體內各種調控因素刺激B淋巴細胞持續增殖，CD23分子高表達，而CD23高表達對B細胞分化、增殖和成熟有促進作用，使B細胞呈現高反應性而異常活化，并合成和分泌大量自身抗體，加重RA患者的自身免疫紊亂，促進患者病情發展。這也進一步證明了B細胞在RA發病機制中發揮著重要作用，且與疾病活動有關，但具體作用機制仍有待深入研究。

綜上所述，外周血中CD19+、CD23+及CD23+/CD19+淋巴細胞的異常表達在RA發病機制中可能起一定作用，且與疾病活動性相關。因此，聯合監測CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細胞的表達率對RA病情監控具有一定價值，且探討B淋巴細胞在RA發病中的具體作用機制，有望為應用生物制劑治療RA以及新藥的開發提供理論依據。

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