束縛加懸吊應激大鼠腦組織單胺類神經遞質的變化及異丙酚對其的影響

李曉梅 楊成君 陸艷娟 (吉林大學白求恩醫學院生物化學與分子生物學實驗中心，吉林 長春 130021)

單胺類神經遞質在應激狀態下其含量異常〔1～4〕，目前尚未有關于麻醉劑異丙酚對應激大鼠不同腦區單胺類神經遞含量變化的報道。本研究旨在觀察異丙酚對束縛加懸吊應激大鼠腦組織不同腦區單胺類神經遞質含量的影響。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 雄性SD大鼠30只，體重(250±10)g，吉林大學實驗動物中心提供。正常飲食，晝夜飼養48 h。于實驗前12～24 h禁食，不限水;實驗分組，雄性SD大鼠30只隨機為:應激對照組(S組)，將大鼠四肢用繃帶分別固定于鼠板上，頭朝下尾朝上懸掛，經股靜脈注射5 ml生理鹽水，在1 h內注射完畢;麻醉劑異丙酚組，分別在1 h內經股靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的異丙酚5 mg/kg(p1組)和10 mg/kg(p2組)束縛加懸吊時間為 6 h〔5〕。

1.2 實驗試劑與儀器 注射用異丙酚，西安力邦制藥有限公司;5-羥色胺(5-HT)，硫酸肌肝，去甲腎上腺素(NE)，多巴胺(DA)(美國SIGMA公司);鄰苯二甲醛(分析純上海化學試劑公司)，L-半胱氨酸(上海康達公司)。熒光分光光度計 RF-5301PC(日本島津公司)，電熱三用水箱DS-1型(北京醫用儀器廠)，冷凍離心機TGL-16G型(上海分析儀器廠)。

1.3 單胺類神經遞質測定與取材 各組動物實驗結束后，處死迅速取腦組織分出不同腦區－80℃保存，用時取出，稱重于冰冷酸性正丁醇中制成勻漿，離心分離水相及有機相。5-HT在堿性條件下與鄰苯二甲醛縮合，形成具有熒光的化合物，NE、DA與氧化劑反應成具有熒光的化合物，上述熒光化合物強度與濃度成直線關系，即可測定其熒光強度〔6〕。

1.4 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件進和分析，數據結果以±s表示，組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結果

2.1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量比較 大劑量異丙酚組腦干DA含量明顯高于鹽水對照組(P＜0.01)，小劑量異丙酚組5-HT含量明顯低于鹽水對照組(P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

與對照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別NE DA 5-HT S組1.01±0.07 1.53±0.21 9.24±0.21 p1組 1.02±0.19 1.79±0.33 6.06±0.722)p2組 1.12±0.08 2.23±0.362)9.25±1.45

2.2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量比較 小劑量異丙酚組NE含量明顯高于鹽水對照組，而5-HT含量明顯低于鹽水對照組(P＜0.01);大劑量異丙酚組小腦NE、DA含量明顯高于鹽水對照組(P＜0.01)。見表2。

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 p1組 0.66±0.312) 1.89±0.18 1.96±0.552)p2組 0.99±0.112) 1.71±0.362)3.47±0.51

2.3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量比較 大劑量異丙酚組皮質DA含量高于鹽水對照組(P＜0.05)。其他與鹽水對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。見表3。

表3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

表3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量變化(μg/g，± s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組1.33±0.94 1.81±0.25 5.43±1.43 p1組 1.28±0.24 1.63±0.35 6.79±1.75 p2組 1.23±0.53 1.42±0.411)5.05±0.79

3 討論

單胺類神經遞質包括NE、DA、5-HT等。應激狀態時這些指標起到了非常重要的作用，檢測腦組織中單胺類神經遞質含量變化對研究這類遞質的生理、生化功能有重要意義。應激反應的重要特征之一是下丘腦-垂體-腎上腺軸激活，主要引起交感神經興奮。許多實驗證明單胺類神經遞質在應激狀態下有改變，同時對機體應激起著主要的調節作用。當個體暴露于應激中，腎上腺軸活性增強，導致腎上腺皮質激素分泌增加，糖皮質激素是主要的應激激素之一，除能升高血壓外，還能影響腎上腺素α受體的表達，增加兒茶酚胺類的作用效果，同時還能通過對中樞神經的影響，抑制前列腺素、緩激肽、5-HT等的合成，繼而引起血管收縮效應。糖皮質激素分泌增加還可以促進腎小管的重吸收，增加血容量，從而升高血壓。在正常情況下，單胺類神經遞質的分泌保持在一定水平，并且他們之間的比例協調，從而維持功能穩定。隨著應激情況出現，單胺類神經遞質也相應地發生改變，從而引起一系列功能紊亂癥狀的發生。本實驗顯示，不同腦區的單胺類神經遞質NE、DA、5-HT對異丙酚作用的敏感性不同，小劑量異丙酚組腦干、小腦5-HT明顯低于對照組，而小腦NE含量明顯高;大劑量異丙酚組腦干、小腦、皮質DA含量升高，說明異丙酚對腦中樞神經產生一定的影響，以改變其神經遞質的釋放，其作用機制有待進一步探討。

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3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur J Pharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disnuption of dopamine homeostasis underlies selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李曉林，陸艷娟，李曉梅，等.束縛加懸吊應激模型大鼠血清、腦組織單胺類神經遞質含量變化〔J〕.中國實驗診斷學，2008;12(11)1349-51.

6 張 燕，王洪斌，楊海霞，等.熒光分光度法測定大鼠不同腦區單胺類神經遞質〔J〕.東北農業大學學報，2010;41(1):94-6.