曲美他嗪與帕瑞昔布聯(lián)合給藥對急性心肌梗死期大鼠心臟的保護作用

羅 文， 李悅山

(廣州醫(yī)學院藥理學教研室，廣東 廣州 510182)

急性心肌梗死后，臨床上主要的治療思路是“盡快溶栓再灌注”，但是對于缺血引發(fā)的心肌細胞凋亡［1］，目前沒有相應的治療方法。環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase 2，COX－2)作為一種重要的炎癥反應介質，在正常的心肌細胞中含量非常低，但是當受到缺血、缺氧等刺激時會誘導性表達增高，在心肌缺血性損傷中發(fā)揮重要調節(jié)作用［4－10］。目前，關于COX－2是心肌缺血損傷過程中的保護因子還是有害因子爭論較大。曲美他嗪(trimetazidine，TMZ)是一種新型的細胞保護劑，能優(yōu)化缺血時心肌細胞的能量代謝，在早期缺血/再灌注損傷中有抗細胞凋亡的作用［3］，而在急性心肌梗死中是否同樣具有抗心肌細胞凋亡的作用未見報道。本研究選用大鼠急性心肌梗死模型，使用改善心肌能量代謝的TMZ和選擇性COX－2抑制劑帕瑞昔布鈉(parecoxib sodium)分別單獨給藥和聯(lián)合給藥治療，觀察它們是否能對急性心肌梗死大鼠心臟細胞發(fā)揮保護作用，并初步探討其機制。

材料和方法

1 材料

1.1 主要試劑 注射用帕瑞昔布鈉(美國輝瑞制藥有限公司)，鹽酸曲美他嗪片(天津施維雅制藥有限公司)。總RNA提取試劑Trizol(TaKaRa)，RT試劑盒(廣州萊德爾公司)，PCR loading dye mix(TaKa-Ra)。GAPDH(glyceraldehyde－3－phosphate dehydrogenase)、Bcl－2(B －cell leukemia/lymphoma －2)、Bax(Bcl－2 －associated protein X)引物均由Invitrogen合成。COX －2、Bax、Bcl－2、cleaved caspase－3(CC－3)Ⅰ抗購于 Santa Cruz。Caspase－3分光光度法檢測試劑盒購于南京凱基生物。DNA ladder凋亡檢測試劑盒購于碧云天生物技術研究所。

1.2 動物 健康雄性SD大鼠80只，250－300 g，雌雄不限，購于廣東省醫(yī)學實驗動物中心。

2 方法

2.1 動物模型制備 大鼠麻醉后，使用氣管插管輔助呼吸。觀察正常心電圖。開胸暴露心臟后，用6－0絲線結扎冠狀動脈左前降支(left anterior descending，LAD)。以出現(xiàn)ST段與結扎前相比上抬大于0.20 mV 和/或 T 波變寬大于 0.12 mV［5］、心臟左前壁明顯變白等缺血變化作為結扎成功的標志。整個手術過程均保持無菌操作。術后24 h給予足量水和飼料。未見ST段上抬的大鼠棄去。假手術組只穿線，不結扎，其它操作同模型組一致。

2.2 實驗分組及給藥流程 66只大鼠被分為:假手術組(sham):10只，大鼠只穿線，不結扎;急性心肌梗死模型組(acute myocardial ischemia，AMI):14只，AMI+生理鹽水腹腔注射或生理鹽水灌胃;曲美他嗪治療組(AMI+TMZ):14只，AMI+曲美他嗪灌胃給藥(20 mg·kg－1·d－1);帕瑞昔布鈉治療組(AMI+parecoxib):14只，AMI+帕瑞昔布鈉腹腔注射給藥(0.75 mg·kg－1·d－1);曲美他嗪和帕瑞昔布鈉聯(lián)合治療組(AMI+TMZ+parecoxib):14只，AMI+曲美他嗪灌胃給藥(20 mg·kg－1·d－1)+帕瑞昔布鈉腹腔注射給藥(0.75 mg·kg－1·d－1)。所有大鼠常規(guī)給食物和飲水。從造模第3 d至第7 d給藥，術后第8 d開始采集數(shù)據(jù)。

2.3 心功能的測定 取術后第8 d的各組大鼠，麻醉后輔助呼吸。常規(guī)右側頸總動脈插管，采用Pclab－3804科研型生物信號采集系統(tǒng)測量心率(heart rate，HR)、左心室收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末期壓(left ventricular end－diastolic pressure，LVEDP)、左室內壓最大上升速率(maximum of increase rate of left ventricular pressure，+dp/dtmax)和左室內壓最大下降速率(maximum of decrease rate of left ventricular pressure，－dp/dtmax)。

2.4 檢測心肌梗死面積 大鼠迅速處死取心臟，剪去左右心房和右心室，記錄左心室重量。將心臟橫切至5－6片，置于 TTC(2，3，5－triphenyltetrazolium chlorid)緩沖液中37℃避光孵育20 min，可見梗死區(qū)呈灰白色，非梗死區(qū)呈深紅色。在解剖鏡下將梗死區(qū)和非梗死區(qū)分離開來，分別稱重。梗死比例以梗死心肌重量與左心室重量之比表示。

2.5 DNA ladder檢測心肌梗死周邊區(qū)細胞凋亡程度 具體步驟參考碧云天細胞凋亡DNA ladder抽提試劑盒。提取出的DNA用1%瓊脂糖凝膠電泳分析，拍照記錄。

2.6 RT－PCR檢測心肌組織中bax與bcl－2 mRNA含量 提取心肌梗死周邊區(qū)總RNA后，進行逆轉錄和PCR反應。將所得的bax、bcl－2及GAPDH的PCR產物電泳后拍照，結果進行灰度值分析。具體步驟、引物序列和退火溫度參見文獻。

2.7 心肌梗死周邊區(qū)caspase－3活化檢測 參照凱基生物的caspase－3分光光度法檢測試劑盒說明書，通過酶標儀檢測吸光度值，分析caspase－3的活化程度。

2.8 Western blotting檢測心肌梗死周邊區(qū)COX－2、Bax、Bcl－2、CC－3蛋白水平 提取心肌組織總蛋白后，BCA法測定蛋白濃度。電泳，轉膜，脫脂奶粉封閉，孵育Ⅰ抗(1∶1000)4℃過夜，或 GAPDH(1∶1000)室溫2 h，Ⅱ抗(1∶1000)室溫孵育 2 h，曝光，結果用圖像分析系統(tǒng)進行分析。

3 統(tǒng)計學處理

結 果

1 聯(lián)合給藥治療對大鼠心功能的影響

大鼠冠狀動脈左前降支結扎后，Vmax、LVSP、+dp/dtmax、LVEDP、－ dp/dtmax均下降(P ＜0.05)。與AMI組相比，帕瑞昔布鈉給藥治療1周后，LVSP與+dp/dtmax均顯著升高(P＜0.05);LVEDP與－dp/dtmax也上升，但是差異無顯著(P＞0.05)。而TMZ給藥治療 1 周后，Vmax、LVSP、+dp/dtmax、LVEDP、－dp/dtmax的變化均差異顯著(P＜0.05)。聯(lián)合治療組的心功能恢復程度要優(yōu)于單獨給藥，見表1、2。

表1 各組大鼠心臟收縮功能指標Table 1.The contractile function of heart in each group(.n=10)

表1 各組大鼠心臟收縮功能指標Table 1.The contractile function of heart in each group(.n=10)

#P ＜0.05 vs sham;◇P ＜0.05 vs AMI;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs AMI+TMZ+parecoxib.

Sham 153.18±9.29 151.22±4.28 3865.02±297.8456 3233.19 ±587.01 AMI 115.63±6.06#△△ 113.06±5.23#△△ 2379.37±301.16#△△AMI+TMZ 138.79±15.06◇△ 129.16±12.51◇△ 2940.61±494.04◇△AMI+parecoxib 135.98±13.09△ 136.29±9.28△ 2997.64±476.24△AMI+TMZ+parecoxib 142.32±10.14 139.56±16.

表2 各組大鼠心臟舒張功能指標Table 2.The diastolic function of heart in each group(.n=10)

表2 各組大鼠心臟舒張功能指標Table 2.The diastolic function of heart in each group(.n=10)

#P＜0.05 vs sham;◇P＜0.05 vs AMI;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs AMI+TMZ+parecoxib.

Group LVEDP(mmHg) －dp/dtmax(mmHg/s).17 Sham 37.21 ±4.28 4143.71 ±162.31 AMI 15.13 ±10.06#△△ 2411.79 ±239.43#△AMI+TMZ 25.05 ±15.51◇△ 3118.49 ±144.23◇AMI+parecoxib 17.86 ±9.28△ 2499.11 ±530.28△AMI+TMZ+parecoxib 29.14 ±14.42 3379.37 ±501△△

2 聯(lián)合給藥治療對大鼠心肌梗死面積的影響

TMZ組與AMI組比較，梗死面積顯著減小(P＜0.01);parecoxib治療組與AMI組相比，梗死面積比例有縮小的趨勢，但是無顯著差異(P＞0.05)。TMZ+parecoxib聯(lián)合治療組與AMI組比較，梗死面積比例縮小(P＜0.01)，與parecoxib治療組相比，梗死面積比例縮小(P＜0.01)，與TMZ組相比，梗死面積比例縮小(P＜0.05)，見表3。

表3 各組大鼠心肌梗死面積比例Table 3.The rate of infarct size of heart in each group(.n=3)

表3 各組大鼠心肌梗死面積比例Table 3.The rate of infarct size of heart in each group(.n=3)

◇◇P ＜0.01 vs AMI;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs AMI+TMZ+parecoxib.

Group The weight of left ventricle(g)The weight of infarct size(g)The rate of infarct size in left ventricle(%)2 4.26±0.12%Sham 0.446 ±0.016 0 0 AMI 0.451±0.022 0.043±0.0016 9.53±0.14% △△AMI+TMZ 0.431±0.019 0.023±0.0013 6.34±0.18% ◇◇△AMI+parecoxib 0.449±0.018 0.041±0.0014 8.99±0.21% △△AMI+TMZ+parecoxib 0.446 ±0.021 0.019 ±0.002

3 聯(lián)合給藥治療對心肌梗死周邊區(qū)細胞凋亡的影響

與sham組相比，AMI組出現(xiàn)明顯的ladder，說明梗死確實能引起心肌細胞出現(xiàn)明顯的凋亡。TMZ和parecoxib單獨給藥組的ladder條帶化程度減弱，說明二者單獨治療均能不同程度地抑制細胞凋亡，而聯(lián)合給藥治療組的抑制作用更加明顯，說明二者具有一定的協(xié)同誘導凋亡的作用，見圖1。

Figure 1.DNA ladder pattern in the infarct border zone of rat heart.M:DNA marker;Lane 1:sham;Lane 2:AMI:Lane 3:AMI+TMZ;Lane 4:AMI+parecoxib;Lane 5:AMI+TMZ+parecoxib.圖1 各組大鼠心梗周邊區(qū)細胞凋亡DNA ladder圖

4 聯(lián)合給藥治療對心肌梗死周邊區(qū)caspase－3活化程度的影響

與sham組相比，AMI組大鼠心肌梗死周邊區(qū)的caspase－3活化程度明顯增高(P＜0.01);parecoxib組與AMI組相比，caspase－3的活化程度下降(P＜0.05);TMZ治療組與AMI組相比，caspase－3的活化程度也下降(P＜0.05);而parecoxib和TMZ聯(lián)合治療組與AMI組相比，caspase－3活化程度顯著下降(P＜0.01)，聯(lián)合給藥治療比單獨給藥治療的效果更明顯，見表4。

表4 各組大鼠心肌梗死周邊區(qū)caspase－3活化程度Table 4.The activation of caspase－3 in the infarct border zone of heart in each group(%..n=4)

表4 各組大鼠心肌梗死周邊區(qū)caspase－3活化程度Table 4.The activation of caspase－3 in the infarct border zone of heart in each group(%..n=4)

##P ＜0.01 vs sham;△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs AMI.

Group Caspase－3 activation Sham 100 AMI 150.73 ±12.81##AMI+TMZ 138.03 ±17.51△AMI+parecoxib 134.23 ±10.11△AMI+TMZ+parecoxib 122.69 ±13.72△△

5 聯(lián)合給藥對心肌梗死周邊區(qū)bax mRNA與bcl－2 mRNA表達的影響

與sham組相比，AMI組的bax/bcl－2 mRNA表達比例升高(P＜0.01);與sham組相比，parecoxib或TMZ單獨給藥時，bax/bcl－2的比例下降(P＜0.05);而parecoxib和TMZ聯(lián)合治療組能顯著逆轉AMI引起的bax/bcl－2表達比例增高(P＜0.05)，聯(lián)合給藥治療效果優(yōu)于單獨給藥治療，見圖2。

Figure 2.Bax，bcl－2 and GAPDH mRNA expression in the infarct border zone of the rat heart in each group.Lane 1:sham;Lane 2:AMI:Lane 3:AMI+TMZ:Lane 4:AMI+parecoxib;Lane 5:AMI+TMZ+parecoxib..n=4.△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs Lane 5.圖2 各組大鼠心肌bax、bcl－2與GAPDH mRNA含量

6 聯(lián)合給藥治療對心肌梗死周邊區(qū)COX－2、Bax、Bcl－2和cleaved caspase－3蛋白表達的影響

COX－2蛋白在假手術組的大鼠心肌組織中幾乎不表達。AMI組與sham組相比，COX－2蛋白表達升高(P＜0.01);parecoxib治療組和聯(lián)合治療組分別與AMI組相比，COX－2的表達均下降(P＜0.01);TMZ治療組COX－2與AMI組相比，表達變化不明顯(P＞0.05)，見圖3。

Figure 3.COX－2 and GAPDH protein levels in the infarct border zone of the rat heart in each group.Lane 1:sham;Lane 2:AMI;Lane 3:AMI+TMZ;Lane 4:AMI+parecoxib;Lane 5:AMI+TMZ+parecoxib..n=6.##P ＜0.01 vs Lane 1;＊＊P ＜0.01 vs Lane 2.圖3 各組大鼠心梗周邊區(qū)心肌COX－2和GAPDH蛋白含量

各組大鼠心肌組織中Bax、Bcl－2的蛋白表達變化趨勢與mRNA表達趨勢相似。AMI組與sham組相比，Bax/Bcl－2蛋白表達比例升高(P＜0.01);與sham組相比，parecoxib或TMZ單獨給藥治療時，Bax/Bcl－2的比例均下降(P＜0.05);而 parecoxib和TMZ聯(lián)合治療組能顯著逆轉AMI引起的Bax/Bcl－2表達比例增高(P＜0.05)，聯(lián)合給藥治療效果優(yōu)于單獨給藥治療，見圖4。

Cleaved caspase－3(CC－3)蛋白在假手術組的大鼠心肌組織中幾乎不表達。AMI組與sham組相比，cleaved caspase－3蛋白表達升高(P＜0.01);parecoxib治療組和TMZ治療組分別與AMI組相比，cleaved caspase－3的蛋白表達均下降(P＜0.01);聯(lián)合給藥治療組與AMI組相比，cleaved caspase－3蛋白表達下降(P＜0.01)，聯(lián)合給藥治療組分別與parecoxib治療組和TMZ治療組相比，cleaved caspase－3蛋白表達下降(P＜0.01)。聯(lián)合給藥治療抑制caspase－3蛋白表達的效果優(yōu)于分別單獨給藥治療，見圖5。

Figure 4.Bax，Bcl－2 and GAPDH protein levels in the infarct border zone of the rat heart in each group.Lane 1:sham;Lane 2:AMI;Lane 3:AMI+TMZ;Lane 4:AMI+parecoxib;Lane 5:AMI+TMZ+parecoxib..n=6.△P ＜0.05，△△P ＜0.01 vs Lane 5.圖4 各組大鼠心肌Bax、Bcl－2和GAPDH蛋白含量

Figure 5.Cleaved caspase－3(CC－3)and GAPDH protein levels in the infarct border zone of the rat heart in cach group.Lane 1:sham;Lane 2:AMI;Lane 3:AMI+TMZ;Lane 4:AMI+parecoxib;Lane 5:AMI+TMZ+parecoxib..n=6.△△P＜0.01 vs Lane 5.圖5 各組大鼠心梗周邊區(qū)心肌cleaced caspase－3(CC－3)和GAPDH蛋白含量

討 論

本實驗利用大鼠模擬人急性心肌梗死模型，通過給予帕瑞昔布鈉和曲美他嗪，首次觀察到:帕瑞昔布鈉與曲美他嗪聯(lián)合給藥具有一定協(xié)同保護缺血心肌的作用，具體表現(xiàn)為改善心功能、縮小心肌梗死面積，其機制可能與共同抑制心肌細胞凋亡有關。

關于COX－2在各種病理狀態(tài)下發(fā)揮作用的研究由來已久。在腫瘤組織、腦組織和腎臟組織中均發(fā)現(xiàn)有缺血缺氧引起的誘導性COX－2表達持續(xù)增高［4－10］。但是關于COX－2在不同狀態(tài)下發(fā)揮的作用則爭論較大。在多種腫瘤組織中，抑制COX－2可以促進腫瘤細胞凋亡，發(fā)揮抑制腫瘤形成的作用［4］。在缺血引起的腦組織損傷模型中，給予選擇性COX－2抑制劑或者敲除(knockout)COX－2基因，這種損傷作用會明顯減輕［6］。而在心肌組織中，Mobert等［7］在豚鼠缺血再灌注模型中使用COX－2抑制劑，心肌細胞結構和功能方面的損傷均加重。但是更多的研究結果顯示，誘導性COX－2的表達增高對缺血心肌中發(fā)揮了不利的作用，抑制COX－2能有效地保護心肌［8－11］。

在我們的實驗中，大鼠冠脈左前降支結扎后，出現(xiàn)了心臟左前壁梗死，反映心肌收縮功能的LVSP、+dp/dtmax和反映舒張功能的 LVEDP、－dp/dtmax均顯著下降，以及出現(xiàn)明顯的心肌細胞凋亡。而且，AMI組與sham組相比，心肌中COX－2蛋白表達顯著增高(P＜0.01)，說明 AMI能夠誘導心肌細胞COX－2表達。帕瑞昔布鈉治療1周后，與AMI組相比，在降低COX－2蛋白表達的同時，心肌收縮功能(LVSP和+dp/dtmax)明顯恢復(P＜0.05)，心肌細胞DNA ladder條帶化程度顯著減弱，只是心肌梗死面積變化不明顯。由此我們推測，在大鼠急性心肌缺血早期，誘導產生的COX－2參與了心肌損傷的過程，發(fā)揮了加重損傷的作用，抑制COX－2能產生一定的心肌保護作用。

曲美他嗪是一種細胞保護劑，是目前唯一經臨床多中心研究證實有抗心絞痛作用的代謝藥物［2］。它能夠在不引起血流動力學改變或血管舒縮的前提下，在細胞水平發(fā)揮抗缺血的作用，主要表現(xiàn)為維持線粒體功能、增加ATP合成和對抗氧自由基損傷的作用［12］。我們的實驗發(fā)現(xiàn)，AMI大鼠接受曲美他嗪治療1周后，心肌的收縮功能、舒張功能、梗死面積和細胞凋亡率都有好轉趨勢，且差異均顯著(P＜0.05)。

帕瑞昔布鈉和曲美他嗪聯(lián)合給藥1周后，心肌梗死大鼠的心肌收縮功能(LVSP和+dp/dtmax)顯著增強(P＜0.05)，且聯(lián)合治療效果優(yōu)于單獨治療(P＜0.05)。值得一提的是，帕瑞昔布鈉無法逆轉心肌的梗死面積，聯(lián)合給藥治療后梗死面積顯著減小，且效果優(yōu)于曲美他嗪單獨給藥治療(P＜0.05);帕瑞昔布鈉不能明顯改善心肌舒張功能，聯(lián)合給藥治療后也顯著改善(P＜0.05)。由此我們推測，帕瑞昔布鈉與曲美他嗪聯(lián)合治療在心肌缺血急性期具有一定的協(xié)同保護缺血心肌的作用。

在我們的實驗中，心肌梗死大鼠的心肌細胞發(fā)生了明顯的凋亡，同時，死亡受體通路中的caspase－3活化程度顯著增高(P＜0.01)，活化態(tài)的caspase－3(cleaved caspase－3，CC－3)蛋白表達也顯著升高(P＜0.01);線粒體信號通路中Bax/Bcl－2 mRNA和蛋白表達比例也增高(P＜0.01)。聯(lián)合給藥治療1周后，細胞凋亡被明顯抑制，與此同時，caspase－3的活性程度明顯降低(P＜0.05)，CC－3蛋白表達下降(P＜0.01)，Bax/Bcl－2 mRNA和蛋白表達比例均下降(P＜0.05)，且聯(lián)合治療效果優(yōu)于單獨給藥治療。由此可知，曲美他嗪和帕瑞昔布鈉聯(lián)合治療在死亡受體通路和線粒體通路引發(fā)的細胞凋亡中，均具有一定的協(xié)同抑制細胞凋亡作用。這可能是聯(lián)合給藥治療發(fā)揮心肌保護作用的機制之一。但是COX－2抑制劑以及聯(lián)合曲美他嗪保護心肌組織的具體機制，尚需更多的實驗加以探明，在此提出一些可能的建議:(1)諸多實驗證實，COX－2能通過改變心肌細胞內的鈣循環(huán)，改變心肌組織的變力狀態(tài)(inotropic state)，進而改變心肌細胞的結構和功能［13］;(2)前列腺素(prostaglandins，PGs)的生成和釋放能夠引起炎性因子和生長因子的表達增高，抑制COX－2可以抑制PGs的生成，并最終減輕炎癥滲出和損傷［14］;(3)COX－2介導的氧化損傷已經被證實對心肌組織的功能和結構有十分不利的影響［15］。

綜上所述，我們證實曲美他嗪和帕瑞昔布鈉聯(lián)合治療對急性心肌梗死大鼠的心臟具有一定的協(xié)同保護作用。這對研究選擇性COX－2抑制劑在急性心肌缺血性疾病的作用，具有十分重要的意義，為缺血性心肌病的治療提供了新的思路。

［1］Abbate A，Santini D，Biondi－Zoccai GG，et al.Cyclooxygenase－2(COX－2)expression at the site of recent myocardial infarction:friend or foe?［J］.Heart，2004，90(4):440－443.

［2］Fox K，Ardissino D，Buszman P，et al.Guidelines on the management of stable angina pectoris:executive summary［J］.Eur Heart J，2006，27(11):1341 －1381.

［3］梁文武，尹瑞興，劉唐威，等.曲美他嗪對新西蘭白兔缺血/再灌注心肌細胞凋亡的影響［J］.廣西醫(yī)學，2006，28(4):481 －484.

［4］Masferrer JL，Leahy KM，Koki AT，et al.Antiangiogenic and antitumor activities of cyclooxygenase－2 inhibitors［J］.Cancer Res，2000，60(5):1306 －1315.

［5］盧喜烈.ST段抬高的臨床意義［J］.臨床心電學雜志，2005，14(3):164 －165.

［6］Takadera T，Yumoto H，Tozuka Y，et al.Prostaglandin E2induces caspase－dependent apoptosis in rat cortical cells［J］.Neurosci Lett，2002，317(2):61 －64.

［7］Jacqueline M，Bernhard F.Cyclooxygenase inhibition aggravates ischemia－reperfusion injury in the perfused guinea pig heart:involvement of isoprostanes［J］.J Am Coll Cardiol，1998，31(7):1687 －1694.

［8］Antonio A，F(xiàn)adi N，Salloum，et al.Improvement of cardiac function with parecoxib，A cyclo－oxygenase－2 inhibitor，in a rat model of ischemic heart failure［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2007，49(6):416 －418.

［9］Fadi NS，Nicholas N，Ignacio M，et al.Parecoxib inhibits apoptosis in acute myocardial infarction due to permanent coronary ligation but not due to ischemia－reperfusion［J］.J Cardiovasc Pharmacol，2009，53(6):495 －498.

［10］Shinmura K，Xuan YT，Tang XL，et al.Inducible nitric oxide synthase modulates cyclooxygenase－2 activity in the heart of conscious rabbits during the late phase of ischemic preconditioning［J］.Circ Res，2002，90(5):602 －608.

［11］Abbate A，Limana F，Capogrossi MC，et al.Cyclooxygenase－2(COX－2)inhibition reduces apoptosis in acute myocardial infarction［J］.Apoptosis，2006，11(6):1061 －1063.

［12］Morin D，Elimadi A，Sapena R，et al.Evidence for the existence of［3H］－trimetazidine binding sites involved in the regulation of the mitochondrial permeability transition pore［J］.Br J Pharmacol，1998，123(7):1385 － 1394.

［13］Damron DS，Summers BA.Arachidonic acid enhances contraction and intracellular Ca2+transients in individual rat ventricular myocytes［J］.Am J Physiol，1997，272(1 Pt 2):H350－H359.

［14］Seibert K，Zhang Y，Leahy K，et al.Pharmacological and biochemical demonstration of the role of cyclooxygenase 2 in inflammation and pain［J］.Pro Natl Acad Sci USA，1994，91(25):12013－12017.

［15］Agha AM，ElKhatib AS，AlZuhair H.Modulation of oxidant status by meloxicam in experimentally induced arthritis［J］.Pharmacol Res，1999，40(4):385 －392.