子宮內膜癌組織中YKL-40、NF-κ B的表達及臨床意義

陳麗平,盧 丹,孔 祥

(1.川北醫學院附屬醫院婦產科,四川南充,637000;2.揚州大學臨床醫學院婦產科 ,江蘇揚州,225001)

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的上皮惡性腫瘤,子宮內膜樣腺癌占80%～90%[1-2],子宮內膜癌的病因目前不是完全清楚,其發生、發展是一個多因素和多個基因變異的復雜過程[3]。YKL-40(甲殼質酶蛋白40)又名人類軟骨糖蛋白,屬于哺乳動物18糖基水解酶家庭成員之一,近來研究發現YKL-40在腫瘤細胞的生長、侵襲和轉移起重要作用[4-8]。核轉錄因子NF-κ B是一種多向性、多功能的核轉錄因子,可調控細胞凋亡、增殖的相關基因,在細胞癌變過程中發揮重要作用[10-13]。作者采用免疫組化的方法檢測子宮內膜癌組織中YKL-40和NF-KB的表達情況,并比較其與臨床病理特征的關系,探討YKL-40和NF-κ B在子宮內膜癌發生、發展中的作用及相關性。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2002年1月～2007年12月間臨床病理子宮內膜樣腺癌患者石蠟包埋標本65例,患者在術前均未接受化療、放療或其他抗腫瘤治療,標本均來源于江蘇省蘇北人民醫院,由婦產科病理專家復審病理診斷。患者年齡42～70歲,平均53歲。正常子宮內膜標本40例,收集同期因子宮良性腫瘤而行子宮全切(或子宮次全切)的患者或行診斷性刮宮的患者的標本?；颊吣挲g36～54歲,平均43歲。兔抗人YKL-40單克隆抗體購自美國Quidel公司,鼠抗人 NF-κ B-P65均購自北京中山生物技術有限公司。

1.2 方法

上述標本經10%福爾馬林固定,通過常規石蠟包埋,4 μ m連續切片,采用免疫組織化學二步法檢測YKL-40、NF-κ B-P65。以PBS代替一抗做陰性對照,用已知 YKL-40和NF-κ BP65染色陽性的膠質母細胞瘤組織為陽性對照。

1.3 結果判定

YKL-40:YKL-40蛋白定位于細胞漿,以細胞漿出現黃色顆粒染色為陽性細胞。NF-κ B/P65:NF-κ B/P65蛋白定位于細胞漿和(或)細胞核,以細胞漿和(或)細胞核出現黃色顆粒為陽性細胞。YKL-40和NF-κ B/P65采用統一的染色積分評價標準:根據染色細胞百分率及染色強度進行分析評定。①染色強度:棕褐色為3分,棕黃色為 2分,淺黃色為 1分,基本不著色為0分。②陽性細胞細胞占計數細胞的百分率:>75%計4分,50%～75%計3分,26%～50%計2分,6%～25%計1分,≤5%計0分。

2 結 果

2.1 YKL-40和NF-κ B-P65在正常子宮內膜和子宮內膜癌中的表達

在正常子宮內膜中YKL-40的陽性率為32.5%(13/40),在子宮內膜癌中YKL-40的陽性率76.9%(50/65),2組比較差異有顯著意義(P<0.01),NF-κ B/P65在正常子宮內膜及子宮內膜癌組織中的陽性表達率分別30%(12/40)和73.8%(48/65),2組比較差異存在顯著性意義(P<0.01)。

2.2 YKL-40、NF-κ B-P6的表達與子宮內膜癌臨床病理特征

YKL-40、NF-κ B-P65陽性表達率與組織學分級程度有關(P<0.05),而與子宮內膜癌患者的臨床分期、肌層浸潤、淋巴結轉移、年齡均無明顯相關性,見表1。

表1 YKL-40、NF-κ B-P65與子宮內膜癌臨床病理特征的關系

3 討 論

YKL-40屬于哺乳動物甲殼質酶樣蛋白成員,最早是在非泌乳期牛的乳汁分泌物中發現[14-15]。最初對YKL-40的研究主要集中在骨關節炎、類風濕性關節炎等炎癥性關節疾病上。近年來研究發現其與惡性腫瘤聯系密切。YKL-40可以由多種人體腫瘤細胞分泌和表達,其中包括骨腫瘤、乳腺癌、大腸癌、腦腫瘤、肺癌、前列腺癌、惡性膠質細胞瘤、卵巢癌、子宮惡性腫瘤和胰腺癌等[14]。通過對健康婦女、婦科良性疾病患者及子宮內膜癌患者血清YKL-40的測定得出結論,血YKL-40可作為診斷早期子宮內膜癌及高風險人群患者預后不良判定的新的腫瘤指標,而且其獨立于CA125、CA153等常用的腫瘤標專物,國此作者認為YKL-40在惡性腫瘤的診斷、預后、復發、病情監測等方面有重要作用[15]。

NF-κ B是介導細胞內信號傳遞最重要的核轉錄因子,最常見的二聚體是P50/RelA(p65)異源二聚體,幾乎存在于所有的真核細胞中[16]。作為信號傳導途徑中的樞紐,能與炎癥反應、細胞分化和生長、調控免疫應答、細胞粘附和凋亡所必需的許多細胞因子、粘附分子等基因啟動子或增強子部位的κ B位點發生特異性結合,啟動和調節這些基因的轉錄、表達。近來發現其活性在不同的腫瘤細胞類型、不同化療藥物作用等因素顯示不同,可能在腫瘤的發生和發展過程中發揮重要作用。在人類肝癌[17]、膀胱癌[18]、腎癌[19]等多種腫瘤中發現有持續NF-κ B激活的現象,提示NF-κ B在細胞惡變過程中起著重要作用。

本實驗應用免疫組化檢測YKL-40和NF-κ B蛋白在正常子宮內膜和子宮內膜癌組織中的表達情況。通過實驗證實,YKL-40在正常組織中低表達,而在子宮內膜癌組織中高表達,NF-κ B-P65在內膜癌組織中陽性表達率明顯高于正常內膜。在正常子宮內膜YKL-40蛋白與NF-KB-P65表達無相關關系,但在子宮內膜癌中NF-κ B-P65與YKL-40表達呈正相關,表明NF-κ B在子宮內膜癌YKL-40的表達中可能起著重要的作用,NF-κ B可能調控YKL-40的過表達,至少部分是由NF-κ B調控的。在各種致癌因素作用下,激活的NF-κ B由胞漿進入核內,結合 YKL-40啟動子上的NF-κ B結合位點,與其他DNA結合蛋白一起上調YKL-40的表達,引起凋亡失衡、細胞增殖等系列變化。但最近在惡性膠質瘤中的研究發現,NF-κ B是YKL-40的負性調節劑,其與NF-κ B具有顯著的負相關系,在軟骨肉瘤中兩者具有顯著的正相關關系,這都說明了YKL-40的調節的復雜性,是多種因子相互調節的結果[10,20-21]。

對于子宮內膜癌發生、發展中YKL-40及NF-κ B的作用,對于YKL-40及NF-κ B在子宮內膜癌高表達的機制、相關的信號傳導途徑的研究將有助于揭開子宮內膜癌發生機制,并可以發現更多的治療靶點,從而有利于為子宮內膜癌者選擇個體治療方案。

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