果旭阿湯中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量測(cè)定

陳曉紅，陳睿，陳元濤，熱增才旦，段黎昊

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，西寧 810001;2.青海師范大學(xué)化學(xué)系，西寧 810008;3.青海省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，西寧 810008)

藏藥果旭阿湯是藏醫(yī)藥世家通過(guò)長(zhǎng)期實(shí)踐總結(jié)出的治療血隆病的經(jīng)典處方之一，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·藏藥》第1冊(cè)中［1］，在《四部醫(yī)典》［2］和青海的藏藥志中也有記載。該處方主治功能為開(kāi)胸解郁行氣、鎮(zhèn)痛，用于治療血隆病引起的胸悶氣短、胸脅疼痛和肩背脹痛等癥。通過(guò)查閱文獻(xiàn)［3-7］，筆者未見(jiàn)果旭阿湯中藏木香有效成分土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量測(cè)定方法的報(bào)道，因此通過(guò)對(duì)藏木香中有效成分提取方法、提取溶劑以及影響測(cè)定結(jié)果的其他參數(shù)進(jìn)行了比較，采用氣相色譜法測(cè)定藏藥果旭阿湯中藏木香有效成分土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量，為該藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 氣相色譜儀(Agilent 7890型);FID檢測(cè)器;GCD-500G高純氫氣發(fā)生器(北京佳維科創(chuàng)科技有限公司)。超聲儀(KQ-250DV型，250 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 土木香內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110760-200507，供含量測(cè)定用);異土木香內(nèi)酯對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110761-200204，供含量測(cè)定用);超純水;乙酸乙酯(色譜純);藏藥果旭阿湯樣品所用藥材均由青海省藏醫(yī)藥研究所提供(批號(hào):100801，100802，100803)，并經(jīng)青海省藥品檢驗(yàn)所鑒定。各缺味陰性對(duì)照樣品按四味藏木香湯散的處方及制備工藝進(jìn)行缺味制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取條件的選擇 同時(shí)提取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，采用乙酸乙酯超聲提取30min。

2.2 色譜條件 色譜柱:SE-30(30 m×0.32mm，0.50 μm);程 序 升 溫 法:初 始 溫 度 50℃，以20℃·min-1升 至 170℃，保 持 28min，再 以25℃·min-1升至250℃;分流比:10∶1;檢測(cè)器溫度:260℃;載氣:氮?dú)?流速:1.0mL·min-1。

2.3 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯對(duì)照品各20 mg，置10mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，配成2.00 mg·mL-1儲(chǔ)備液。各吸取2.00 mg·mL-1土木香內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備液和異土木香內(nèi)酯對(duì)照品儲(chǔ)備液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mL，分別置于5mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，制得土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯系列對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液 精密稱取果旭阿湯樣品(懸鉤木、藏木香、寬筋藤、干姜和馬錢(qián)子按處方比例混勻，藏木香在成藥中所占的比例約為20.2%，過(guò)孔徑0.355mm藥篩)3份，加入乙酸乙酯30mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30min，取出，冷至室溫，再稱定質(zhì)量，用乙酸乙酯補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，取濾液作為供試品溶液。

2.5 空白實(shí)驗(yàn) 取不含藏木香成分的果旭阿湯陰性樣品1份，按“2.4”項(xiàng)方法制成陰性樣品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各1.0 μL注入氣相色譜儀，按色譜條件依次測(cè)定。結(jié)果該陰性溶液在土木香內(nèi)酯峰的位置上無(wú)干擾。

2.6 線性關(guān)系考察 分別吸取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯系列對(duì)照品溶液1.0 μL進(jìn)樣，測(cè)定其含量。結(jié)果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯均在 0.1～1.0 mg·mL-1內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為Y=1.35×103X+8.17(r=0.999 3)，Y=1.25×103X+32.3(r=0.999 8)，前者檢測(cè)限為 2.7 μg·mL-1(S/N=3)，后者檢測(cè)限為 2.6 μg·mL-1。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 分別取0.20 mg·mL-1土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定其含量。結(jié)果，土木香內(nèi)酯的RSD為1.25%(n=6)，異土木香內(nèi)酯的RSD為1.16%(n=6)。說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取樣品粉末按“2.4”項(xiàng)方法分別配制供試品溶液6份，依次測(cè)定土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量。結(jié)果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的平均含量分別為2.65和3.60 mg·g-1，RSD分別為1.44%和1.16%。結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批次供試品，按“2.4”項(xiàng)方法分別配制供試品溶液5份，依次放置0，4，8，12，24 h后，分別測(cè)定。結(jié)果土木香內(nèi)酯的RSD=1.02%(n=5)，異土木香內(nèi)酯的RSD=1.32%(n=5)。說(shuō)明穩(wěn)定性很好。

2.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取已知含量的土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯樣品約1.0 g，分別準(zhǔn)確加入1.00 mg·mL-1對(duì)照品溶液 2.00mL，按“2.4”項(xiàng)方法分別制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯平均回收率分別為97.25%，97.42%;RSD分別為 0.93%，0.90%，見(jiàn)表 1。

表1 土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的加樣回收率測(cè)定結(jié)果Tab.1 Resultsofrecovery ofalantolactoneand isoalantolactone mg，n=6

2.11 樣品含量測(cè)定 取3批樣品，分別按“2.4”項(xiàng)方法制備供試品溶液，依次測(cè)定土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量。結(jié)果土木香內(nèi)酯含量分別為2.65，2.59，2.61 mg·g-1，平均 2.62 mg·g-1，RSD=1.21%(n=3);異土木香內(nèi)酯含量分別為 3.34，3.37，3.39 mg·g-1，平均 3.37 mg·g-1，RSD=0.76%。

3 討論

實(shí)驗(yàn)中同時(shí)提取土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，分別采用三氯甲烷冷浸提取14 h、甲醇超聲提取、乙酸乙酯超聲提取和乙醚回流提取的方法對(duì)同一批樣品進(jìn)行了提取和測(cè)定，對(duì)這幾種方法地提取速度和分離效果進(jìn)行比較研究，發(fā)現(xiàn)提取速度、提取率略有差別:三氯甲烷冷浸法耗時(shí)長(zhǎng)，操作較繁瑣，不利于快速、及時(shí)分析;甲醇超聲提取40min能較完全地提取藥材中的土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯，但耗時(shí)也較長(zhǎng);乙醚回流提取樣品液雖簡(jiǎn)單快速，但脂溶性雜質(zhì)較多，影響色譜柱的分離效果;用乙酸乙酯超聲提取30min法提取率較高，又省時(shí)，故本實(shí)驗(yàn)采用此提取方法。

以乙酸乙酯為溶劑，比較超聲提取法 30，60，90min提取效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲提取30min提取的含量差別不大，由于其操作時(shí)間短，選擇超聲30min為提取條件。

在其他色譜條件固定的條件下，筆者對(duì)5種不同的升溫程序進(jìn)行了選擇，包括初始溫度、升溫速率進(jìn)行了選擇、比較，并且考慮分離度、分析時(shí)間長(zhǎng)短及高沸點(diǎn)雜質(zhì)的影響，選擇了簡(jiǎn)單易行的提取條件和色譜條件，基本消除了其他成分的干擾。

本研究結(jié)果表明，采用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定藏藥果旭阿湯中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量，快速、準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便可靠，重復(fù)性好。本實(shí)驗(yàn)所建立的方法，為更好地控制藏木香藥材及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和藏藥綜合開(kāi)發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］.藏藥.第1冊(cè).1995:309.

［2］玉妥·云丹貢保.四部醫(yī)典(藏文)［M］.拉薩:西藏人民出版社，2000:70.

［3］曾銳，瞿燕，高宇明.反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測(cè)定藏藥六味能消膠囊中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42(7):491－493.

［4］董琦，馬世震，胡鳳祖.高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定不同采收期栽培藏木香中內(nèi)酯類成分［J］.中草藥，2010，41(7):1186.

［5］王秀麗，欒楊，劉擁軍，等.氣相色譜法測(cè)定土木香中土木香內(nèi)酯含量［J］.山東中醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，29(4):322－323.

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［7］楊媛媛，馬曉康，顧政一，等.不同產(chǎn)地新疆赤芍中芍藥苷的含量測(cè)定［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(7):763－764.