不同酒制工藝對(duì)丹參中丹酚酸B含量的影響*

常明泉，陳芳，黃良永，袁勝浩，葉立紅，葉方，安志斌，楊光義

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北十堰 442000;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥檢學(xué)院，湖北十堰 442000)

丹參為唇形科植物丹參(Salvia mihiorrhiza Bge)的干燥根及根莖，其味苦，微寒，歸心、肝經(jīng)，具有祛瘀鎮(zhèn)痛、活血通經(jīng)、清心除煩、涼血消癰之功效。其水溶性成分丹酚酸B具有較強(qiáng)的抗氧化作用，是治療冠心病、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集的主要有效成分之一［1-4］。丹參因品種、氣候、產(chǎn)地、采收期及生長(zhǎng)年代的不同，所含主要成分差異較大。房陵丹參產(chǎn)于湖北省十堰市房陵地區(qū)，是當(dāng)?shù)卣攸c(diǎn)發(fā)展的道地藥材之一。特殊的地理環(huán)境、氣候條件、炮制方法對(duì)房陵丹參中有效成分含量可能有一定影響，筆者采用三種傳統(tǒng)的酒制工藝對(duì)房陵丹參進(jìn)行炮制，用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)樣品中丹酚酸B含量進(jìn)行測(cè)定，比較不同酒制工藝對(duì)其含量的影響，篩選最佳酒制工藝，為道地藥材資源的合理開(kāi)發(fā)利用、發(fā)揮最佳臨床療效提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 戴安UltiMate3000型高效液相色譜儀(包括四元梯度、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢測(cè)器);FA2004上皿電子天平(上海精科天平，d=0.1 mg);蒸鍋(蘇泊爾SZ26L2);炒鍋(廣東創(chuàng)生，直徑30 cm);燉藥罐(16號(hào)，康舒廚具公司);TDGC2j-2型調(diào)壓式電爐(1 kW，宏達(dá)電器公司);KWY-102型電熱干燥箱(2.4 kW，武漢市武昌實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.2 試藥 丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110722-200807);2 a生房陵丹參(產(chǎn)地湖北房縣，批號(hào):20090912，由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部葉立紅副主任藥師鑒定為唇形科植物丹參的干燥根及根莖);黃酒(十堰市房縣神農(nóng)泉皇酒有限公司，批號(hào):20091217);甲醇:(色譜純Tedia，批號(hào):910900);乙腈(色譜純，批號(hào):20070907);甲酸(分析純，批號(hào):20080414)，純化水(太和醫(yī)院新鮮生產(chǎn))。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃酒的選用 選用市售完整包裝的黃酒，性狀為淡黃色澄清液體，具有黃酒的特異濃香，用乙醇測(cè)量?jī)x測(cè)定含醇量應(yīng)為(10±2)%。

2.2 房陵丹參原藥材供試品的制備 取房陵丹參干燥根莖，除去雜質(zhì)和殘莖，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥;將飲片粉碎，取本品粉末(過(guò)孔徑0.355mm藥篩)0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液，即得［5-7］。

2.3 酒炙房陵丹參樣品的制備 取房陵丹參飲片10 g，用帶有6號(hào)針頭的注射器吸取黃酒3 g均勻噴灑于藥材表面，拌勻，置直徑為10 cm的玻璃平皿內(nèi)加蓋悶潤(rùn)2 h，待黃酒被藥材全部吸盡后，置炒藥鍋內(nèi)，用文火炒至規(guī)定程度(嗅到藥物固有香氣)，取出，放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.4 酒蒸房陵丹參樣品的制備 稱取房陵丹參飲片10 g，按“2.3”項(xiàng)下方法加入黃酒處理，然后取樣品置蒸鍋內(nèi)加熱蒸制4 h，至蒸透后取出、置烘箱中50℃烘干，取出放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.5 酒燉房陵丹參樣品的制備 稱取房陵丹參飲片10 g，按“2.3”項(xiàng)下方法加入黃酒處理，然后取樣品置燉藥罐內(nèi)，密閉，隔水加熱8 h，燉至輔料完全被吸盡時(shí)，取出放涼，置烘箱中50℃烘干，取出放涼，按原藥材供試品的制備方法同法制備供試品。

2.6 含量測(cè)定

2.6.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;色譜柱為 Dikma-C18(200mm×4.6mm，10 μm);流動(dòng)相為甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59);檢測(cè)波長(zhǎng)為286 nm;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000，柱溫為 30℃;流速為 1.0mL·min-1，進(jìn)樣量為10 μL［8］。

2.6.2 丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品14.7 mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加75%甲醇至刻度，搖勻;制成0.147 mg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.6.3 陰性樣品的制備 取不含房陵丹參的其他試劑，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備成陰性樣品。

2.6.4 干擾實(shí)驗(yàn) 分別取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”“2.6.2”“2.6.3”項(xiàng)下制備的各樣品溶液，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果除陰性樣品外其他各組樣品均在286 nm處有相同的色譜峰出現(xiàn)，見(jiàn)圖1。陰性樣品無(wú)干擾。

2.7 線性關(guān)系考察 分別精密吸取丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品溶液 2.0，5.0，10.0，12.5，15.0，20.0mL 置于 100mL量瓶中，加 75% 甲醇制備成濃度為 2.940，7.350，14.700，18.380，22.050，29.400 μg·mL-1的樣品溶液，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:Y=19.44X－0.259 7，r=0.999 8，丹酚酸 B 在 2.940 ～29.400 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.8 精密度實(shí)驗(yàn) 取丹酚酸B原藥材供試品溶液，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，依次測(cè)定各峰面積值，結(jié)果RSD為0.86%，表明該方法精密度良好。

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24 h 在“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定丹酚酸 B的含量，結(jié)果 RSD分別為 1.07%，1.30%，1.04%，1.12%，表明各樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別取房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品粉末各6份，每份0.2 g，分別按“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣，測(cè)得丹酚酸B的平均含量分別為 6.43%，2.73%，1.85%，4.66%，RSD分別為 0.94%，0.79%，0.85%，0.98%(n=5)。

2.11 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密量取已測(cè)知含量的房陵丹參原藥材供試品、酒炙品、酒蒸品、酒燉品溶液各6份，再分別加入丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品溶液(1.838 μg·mL-1)適量，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果其平均回收率分別為 97.9%，99.3%，97.8%，99.3%，RSD 分別為1.63%，1.86%，1.17%，1.47%。

圖1 6種溶液的HPLC色譜圖A.丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)品;B.房陵丹參原藥材供試品;C.酒蒸樣品;D.酒炙樣品 ;E.酒燉樣品;F.陰性樣品;1.丹酚酸BFig.1 HPLC chromatograms of 6 kinds of solutionsA.standard ofsalvianolic acid B;B.miltiorrhizafrom Fangling;C.wine steamed samples;D.wine fried samples;E.wine stewing samples;F.negative samples;1.salvianolic acid B

2.12 樣品含量測(cè)定 分別取“2.2”“2.3”“2.4”“2.5”項(xiàng)下的樣品溶液，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣，測(cè)定丹酚酸B的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同工藝房陵丹參中丹酚酸B的含量測(cè)定結(jié)果Tab.1 Determination results of the content of salvian olic acid B in salvia miltiorrhiza from Fangling processed by different technology %，n=3

3 討論

房陵丹參的干燥根及根莖質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，外皮緊貼不易剝落，丹酚酸B為水溶性成分，多含在丹參外皮中，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，藥材必須粉碎完全、均勻，以免導(dǎo)致取、樣不均造成較大偏差而不能真實(shí)藥材質(zhì)量。在藥材軟化時(shí)，采用了悶潤(rùn)法，使藥材便于切制。

不同工藝的房陵丹參中丹酚酸B含量:原藥材供試品＞酒燉品＞酒炙品＞酒蒸品，可見(jiàn)酒制房陵丹參雖然具有緩和藥性、引藥上行、矯味矯臭、防腐、且易于煎出有效成分的作用［9］，但對(duì)其中丹酚酸B含量也有較大影響。在3種炮制工藝中，酒炙是于鐵鍋中直接加熱，在高溫翻炒過(guò)程中藥材中的丹酚酸B被破壞達(dá)57.5%;酒蒸是在密閉容器中循環(huán)加熱，回流的冷凝水反復(fù)透過(guò)藥材可能溶出一部分丹酚酸B滴入水鍋中，該炮制法使丹酚酸損失達(dá)71.2%;上述兩種炮制方法的丹酚酸B含量已低于《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定(不低于3%)的質(zhì)量要求;酒燉是隔水密閉加熱，丹參受熱溫度相對(duì)較低，沒(méi)有回流蒸汽及液體的洗脫，丹酚酸B損失只有27.5%，相對(duì)上述兩種方法而言損失較少，故認(rèn)為酒制房陵丹參以酒燉為最佳工藝。

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