宮頸液基細胞學檢查及上皮內瘤變中Ki-67和PTEN表達的臨床意義

張觀宇 ，許立莉 ，王建琴 ，孫鳳娟 ，韓吉萍

1.遼寧省遼陽市遼化總醫院病理科，遼寧遼陽 111003；2.遼寧省遼陽市遼化總醫院婦產科，遼寧遼陽 111003

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，近40年來由于宮頸細胞學篩查的普遍與應用，宮頸癌和癌前病變得以早期發現、早期治療，其發病率和死亡率明顯下降[1-2]。研究資料表明，宮頸癌通常由上皮內瘤變演變而來，由于上皮內瘤變與鱗狀上皮內增生、腺上皮鱗化等病變在形態上常有相似之處，單純依靠病理形態學進行鑒別比較困難。因此，本研究在液基細胞學檢查宮頸病變的基礎上，觀察分析其相應組織形態變化、免疫組織學Ki-67和PTEN的改變，旨在探討其在宮頸病變診斷和鑒別診斷的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集遼化總醫院2010年1月～2011年3月宮頸液基細胞學檢查病例1330例，年齡24～79歲，平均年齡44.7歲。

1.2 方法

1.2.1 宮頸細胞學檢查 采用進口新柏氏一次性無菌采樣器，將宮頸細胞采集刷前面的刷毛伸入宮頸管并抵住宮頸，按順時針方向旋轉3～5圈，并迅速將采集刷伸入細胞保存液中反復推壓、搖動。

表1 44例宮頸黏膜上皮中Ki-67和PTEN的表達

1.2.2 陰道鏡檢查和宮頸活檢 宮頸液基細胞學檢查陽性者（≥ASC-US定為細胞學陽性[1]）通過陰道鏡選擇可疑病灶準確定位、分點取活檢。

1.2.3 病理學檢查 所有標本常規制片，HE染色，從每例分點取材的標本中選取病變最顯著的組織塊，連續切片，超敏TMHRP法進行免疫組織化學染色，一抗Ki-67和PTEN購自北京英碩力新柏科技有限公司，選取20例宮頸炎作為對照。

1.3 結果判定

Ki-67陽性表達為胞核呈現棕黃色顆粒，在著色區域選擇5個高倍視野，每個視野計數100個上皮細胞，陽性細胞數≤10%為（-），＞10%為（+）[3]。 PTEN 陽性表達為胞核呈現棕黃色顆粒，判定標準同Ki-67。

1.4 統計學分析

采用SPSS 11.0軟件進行統計學處理，計數資料數據采用χ2檢驗，采用非參數Spearman等級進行相關檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

1330例液基細胞檢查發現非典型鱗狀細胞61例，組織學檢查24例為上皮內瘤變，其中，CINⅠ11例，CINⅡ～CINⅢ13例。Ki-67和PTEN在24例上皮內瘤變和20例對照的表達情況見表1。對照組和低度上皮內瘤變中Ki-67和PTEN表達未見有相關性，低度上皮內瘤變和高度上皮內瘤變中Ki-67 和 PTEN 顯示呈負相關（r=-0.818，P＜0.05），表 2。

表2 24例宮頸病變上皮中Ki-67和PTEN相關性分析（例）

3 討論

從世界范圍來講，宮頸癌在年輕女性發病率有所增加。在我國，目前宮頸癌發病率居婦科惡性腫瘤首位[4]，已經成為嚴重威脅婦女健康的疾病[5]，為此，2006年科技部將包括宮頸癌在內的常見惡性腫瘤的預防、早診和綜合治療納入“十一五”國家科技重大項目，2009年中央財政撥款7640萬元，在全國200個縣為農村婦女免費進行宮頸癌篩查。宮頸液基細胞學檢查及檢測后對陽性病例做宮頸活檢是目前診斷宮頸病變的有效手段，但僅僅是根據常規HE切片對于某些宮頸良性病變與低度上皮內瘤變（CINⅠ）以及低度上皮內瘤變與高度上皮內瘤變（CINⅡ～CINⅢ）的鑒別診斷存在一定的困難。

Ki-67是一種在細胞 G1、S、M、G2期均會出現的核抗原，表達的高低可以準確反映細胞增殖的情況[6]。已有研究發現，Ki-67有可能作為確定癌變人群高危個體分子標志物[7]。本組研究表明，對照組為良性病變，Ki-67多在基底層表達，即使在個別鱗狀細胞乳頭狀增生中，Ki-67陽性細胞只是散在分布，考慮是上皮鱗化后處在不成熟階段，增殖較活躍。低度上皮內瘤變中Ki-67陽性率升高，但與對照組的表達率差異無顯著性（P＞0.05）。高度上皮內瘤變中Ki-67陽性細胞數顯著增高，且陽性細胞增至上皮的中層和表層，統計學分析顯示，低度上皮內瘤變和高度上皮內瘤變組間差異顯著（P＜0.05）。

PTEN是1997年由Stick等3個研究小組分別發現的一種抑癌基因，定位于人類染色體10q23，PTEN由403個氨基酸組成，具有磷酸酶活性，起到阻止細胞生長和促進細胞凋亡等作用[8]。在人類的前列腺癌、子宮內膜癌、腦膠質細胞瘤等多種腫瘤中，發現PTEN蛋白表達缺失，提示該基因的表達降低與腫瘤的發生有關，但具體機制尚不清楚。本研究結果顯示，PTEN在正常對照組陽性率為100%（20/20），在宮頸上皮內瘤變中PTEN陽性率下降，高度病變中僅為15.4%（2/13），且隨著上皮內瘤變級別升高PTEN水平逐漸降低，說明PTEN低表達與宮頸癌的發生、發展有關。

腫瘤的發生、發展是多基因長期協同作用的結果。本研究還發現，在宮頸上皮內瘤變中Ki-67和PTEN的表達出現負相關（r=-0.818），說明Ki-67陽性同時PTEN陰性的病例具有更高的癌變風險，聯合檢測可以起到互相補充的作用。

綜上所述，對宮頸癌的篩查和預防，臨床通過涂醋白、涂碘方法只提高了宮頸病變取材的準確率，液基細胞學檢查與病理組織學診斷只能簡單進行分級，而聯合檢測Ki-67和PTEN則可以反映細胞增殖狀態，對于低度和高度上皮內瘤變鑒別具有重要意義，對于高度上皮內瘤變風險評估具有重要的生物學意義，可以更好地指導臨床治療，降低對患者的損害，是早期合理預防宮頸癌的重要途徑。

[1]金善姬,李點珠,崔賢子,等.液基薄層細胞學檢查與巴氏涂片法臨床比較應用[J].中國醫藥科學,2011,1(1):45-46.

[2]樂杰.婦產科學[M].7版.北京:人民衛生出版社,2009:263.

[3]劉彤,崔莉,許麗娟,等.P16、Ki-67蛋白表達及HPV檢測在宮頸上皮內瘤變中的診斷意義[J].診斷病理學雜志,2009,16(5):343-345.

[4]紀小龍,張雷.診斷免疫組織化學[M].北京:人民軍醫出版社,2011:99.

[5]劉金鳳.正確認識液基細胞學檢測在宮頸病變篩查的價值[J].中國婦幼保健,2010,25(15):2167.

[6]閆麗鳳,王堯影,張觀宇,等.49例子宮內膜樣腺癌中Ki-67和PTEN表達與臨床病理特點分析[J].中國現代醫生,2010,48(20):37-38.

[7]Lala PK.Significance of uitric oxide in carcinogenesis tumor progression and cancer theropy[J].Cancer Metastasis Rev,1998,17(1):1-6.

[8]Weng LP,Smith WM,Dahia PL,et al.PTEN suppresses breast cancer cell growth by phosphatase activity-dependent G1 arrest followed by cell death[J].Cancer Res,1999,59(22):5808-5814.