荔枝殼多糖傳統水提法最佳工藝優化研究

惠 春，盧夢驍，林大專，張凌贏，曾憲東

1.長春醫學高等專科學校，吉林長春 130031；2.同濟大學數學系，上海 200092

荔枝（Litchi chinesis Sonn.）屬于無患子科植物，因具有較高的營養價值和養顏滋補作用，被視為“果中珍品”。據《本草綱目》記載：“常食荔枝能補腦健身，治療瘰疬，開胃益脾[1]。”荔枝殼作為荔枝食用后的廢棄物被扔掉，造成了資源浪費和環境污染。有報道[2]荔枝殼中含有多種活性成分，如黃酮、酚酸和多糖類物質，有較高的加工利用價值。活性多糖對降血壓、降血脂等有一定功效[3]。目前對荔枝核、肉中多糖的提取方法研究較多，而對荔枝殼中多糖的提取方法研究鮮見報道，本研究立足荔枝殼廢棄物的再利用，并對其活性成分多糖提取條件進行優化，以最大限度提高荔枝殼中多糖的提取率。

1 儀器與材料

1.1 儀器

TU1800雙光束紫外可見分光光度計 （北京普西通用儀器責任有限公司）。電子天平BS224S（賽多利斯科學儀器北京有限公司）。

1.2 材料

荔枝殼（購于長春藥材公司）、苯酚（開原市化學試劑一廠）、硫酸（北京化工廠）、95%乙醇（北京化工廠）、無水乙醇（北京化工廠）等均為分析純試劑。D-無水葡萄糖 （批號：110833-200904，中國藥品生物制品檢定所）

2 方法與結果

2.1 方法

2.1.1 供試品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的荔枝殼5.0 g，水提濃縮后定容于100 ml的容量瓶中。精密吸取上述提取液10 ml，用5倍量95%的乙醇醇沉過夜，離心（4000 r/min）后用95%乙醇洗滌醇沉物，用水定容于25 ml容量瓶中，即制備得荔枝殼多糖供試品溶液。

2.1.2 荔枝殼多糖的測定方法 依據以葡萄糖為標準品的硫酸-苯酚比色法[4]。

2.1.3 對照品溶液的配制 精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖0.0146 g，定量轉移至100 ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，即得0.146 mg/ml的對照品溶液。

2.1.4 標準曲線的制備[5]精密吸取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml上述對照品溶液至5支具塞試管中，然后依次加入蒸餾水至2 ml，再各加6%苯酚試劑1.0 ml，搖勻后精密加入濃硫酸5 ml，放置。5 min后置沸水浴中加熱，15 min后立即轉入冷水浴中。至室溫后在490 nm波長處測定吸收度，即得標準曲線，以質量M對吸收度A作線性回歸，得回歸方程：A=0.007788M-0.05088，r=0.9999。

2.1.5 精密度試驗 精密量取微波提取法項下“5號”樣品（精密稱取干燥至恒重的荔枝殼0.5040 g，用95%乙醇索式提取，脫脂后，將預處理后的樣品加1∶20倍的水，在100℃、3 min、900 W功率下于微波萃取儀內提取，合并提取液，定容于100 ml容量瓶中，即得），共制備6份，按標準曲線制備項下的方法測定吸光度，結果RSD為0.642%（n=6），表明精密度符合要求。

2.1.6 穩定性試驗 精密量取對照品溶液0.6 ml，照“2.1.4”項下的方法測定吸光度，每隔30 min測定一次，至2.5 h時，測得RSD為0.585%（n=6），說明吸光度在150 min內穩定。

2.1.7 重現性試驗 精密量取微波提取法 （功率單因素影響）項下“5號”樣品1.0 ml，按標準曲線的制備項下的方法測定吸光度，重復操作6次，測得RSD為0.902%（n=6）。

2.1.8 加樣回收率試驗 精密吸取微波提取法（功率單因素影響）項下“5號”樣品液 0.5 ml（6份），分別加入對照品溶液0.5 ml，照樣品測定項下方法測定吸光度，計算回收率，結果測得 RSD=0.463%（n=6）。

2.1.9 荔枝殼多糖樣品液的測定 精密吸取1.0 ml荔枝殼多糖樣品液，按“2.1.4”標準曲線制備項下的方法操作。

2.2 結果

2.2.1 單因素試驗結果 單因素中的提取次數、提取時間、料液比、提取溫度對多糖得率的影響，見圖1～4。

圖1 提取次數對多糖得率的影響

圖2 提取時間對多糖得率的影響

2.2.2 正交試驗結果 選擇正交表L9（34），以提取時間、溫度和料液比做如下三因素、三水平的正交實驗。因素—水平設計，見表 1；正交試驗結果，見表 2、3。

3 討論

3.1 單因素試驗結果討論

3.1.1 提取次數對多糖得率的影響 圖1顯示，隨著提取次數的增加，樣品多糖得率無顯著性遞增，考慮時間和能源的節儉不浪費，以選擇提取2次較為合適。

3.1.2 提取時間對多糖得率的影響 圖2顯示，3 h以前，隨著提取時間的延長多糖得率上升較大，3 h以后，多糖得率隨著時間的變化不顯著。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交試驗極差分析結果

3.1.3 料液比對多糖得率的影響 圖3顯示，當料液比為1∶30時，多糖得率達到最高點。

3.1.4 提取溫度對多糖得率的影響 圖4顯示，當提取溫度達到90℃以后，溫度提高對多糖得率的影響顯著。

表3 正交試驗方差分析結果

3.2 正交試驗結果討論

從以上實驗結果和方差分析，可以得出以下結論：

3.2.1 由RC＜RA＜RB可以依次排列出影響荔枝殼中多糖得率的因素順序為提取溫度、提取時間和料液比。

3.2.2 由 k1A＜k2A＜k3A、k1B＜k2B＜k3B和 k3C＜k2C＜k1C可以得出 A3B3C1為荔枝殼多糖提取的最佳工藝條件，即提取時間為3 h、提取溫度為 100℃、料液比為1∶20。

3.3.3 在 α=0.05 水平下，F0.05（2，2）=19，由于 F 均小于 F0.05（2，2）=19，故A、B、C三因素對荔枝殼中多糖得率影響均不顯著。

[1]唐小俊,池建偉,張名位,等.荔枝多糖的提取條件及含量測定[J].華南師范大學學報,2005,4(2):27-31.

[2]楊寶,趙謀明,李寶珍,等.荔枝殼活性成分提取工藝條件研究[J].食品與機械,2004,20(6):28-30.

[3]吳仲梁,韓偉,陶軍,等.快速檢測食品中金黃葡萄球菌的檢測方法[J].中國食品工業,2003,(6):56-57.

[4]董周勇,池建偉,楊公明,等.荔枝多糖微波提取工藝研究[J].食品工業科技,2006,(3):118-121.

[5]吳雅靜,張名位,孫遠明,等.荔枝多糖的超聲輔助提取工藝優化研究[J].華南師范大學學報:自然科學版,2007,(7):119-124.