氫溴酸高烏甲素分散片的溶出度考察

胡雪蓮，余濤，邢茂，雷健，陳琳，張恩娟

(第三軍醫大學新橋醫院藥劑科，重慶 400037)

氫溴酸高烏甲素是從高烏頭中提取總堿，經化學分離獲得的二萜類單體—刺烏頭堿的氫溴酸鹽［1］，為國內首創的非依賴性鎮痛藥，是衛生部《癌癥患者三階梯鎮痛療法指導原則》中規定的中度鎮痛藥。臨床廣泛用于癌癥鎮痛、術后鎮痛等［2-8］。目前已批準使用的劑型僅有注射劑、片劑和貼片，注射劑起效快，但攜帶及使用不方便，普通片劑和貼片起效慢，不能達到迅速鎮痛的要求。因此，筆者研制攜帶、使用方便，又能迅速起效的氫溴酸高烏甲素分散片，采用高效液相色譜(HPLC)法對其溶出行為進行研究。因本品規格較小(5 mg)，故采用小杯法進行研究。

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀(美國Waters公司)、Waters 2487紫外檢測器;ZRS-8智能藥物溶出儀(天津大學無線電廠制造);氫溴酸高烏甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100289-200902)，氫溴酸高烏甲素分散片(自制，規格:每片 5 mg，批號:090601，090602，090603)，氫溴酸高烏甲素片(福州海王福藥制藥有限公司，規格:每片 5 mg，批號:0812280)，甲醇(色譜純，Scharlau Chemie S.A.)，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5 μm);流動相:0.05 mol·L-1磷酸二氫鈉-甲醇(28∶72);柱溫:25℃;檢測波長:252 nm;流速:1.0mL·min-1;進樣體積:20 μL。

2.2 檢測波長的選擇 精密稱取氫溴酸高烏甲素對照品適量，用流動相制成每毫升約含20 μg的溶液，以流動相為空白于200～400 nm波長掃描。結果對照品在221，252，309 nm處有吸收峰。考慮到221 nm靠近末端吸收，309 nm波長處峰值較低，因此選擇波長252 nm為檢測波長。

2.3 色譜條件的選擇及系統適用性 參考氫溴酸高烏甲素含量和有關物質研究［9-10］的色譜條件進行實驗，選 用18柱 (250mm ×4.6mm，5 μm)，以0.05 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液-甲醇(28∶72)為流動相，結果主峰峰形對稱，理論板數＞1 500，主峰與鄰近峰的分離度＞1.5。故選擇此色譜條件。

2.4 溶出轉速的選擇 采用小杯法，以100mL水為溶劑，考察轉速分別為100，50 r·min-1時的溶出情況，結果50 r·min-1，10 min時溶出即＞80%，說明氫溴酸高烏甲素分散片溶出較快，故選擇50 r·min-1較合適。

2.5 溶出介質的選擇 照溶出度測定法(《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄X C第三法)，轉速為50 r·min-1，分別選擇水、0.1 mol·L-1鹽酸、磷酸鹽緩沖液(pH6.8)3種溶出介質進行考察，結果在3種溶出介質中的溶出行為相似，無明顯差別。因此選擇水為氫溴酸高烏甲素分散片的溶出介質。

2.6 濾膜吸附的考察 分別采用濾膜(孔徑0.45 μm)過濾和離心(3 000 r·min-1)兩種方式處理溶出液，結果兩種方式處理的峰面積十分相近，說明采用濾膜(孔徑0.45 μm)過濾不會對主藥產生吸附，而濾膜過濾較離心法簡單易行，因此采用濾膜過濾法處理樣品。

2.7 溶出度方法驗證

2.7.1 系統適用性考察 稱取氫溴酸高烏甲素分散片細粉適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50 μg的溶液，取 20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果主峰峰形對稱，理論板數＞1 500;與鄰近峰分離度＞1.5，已完全分離。

另取氫溴酸高烏甲素對照品溶液，連續進樣5次，每次20 μL，記錄色譜圖，計算各峰面積的RSD，考察本色譜系統的重復性。結果連續進樣5次的峰面積RSD 為0.65%(＜1.0%)，說明本色譜系統重復性很好。

2.7.2 專屬性考察 分別稱取氫溴酸高烏甲素對照品、氫溴酸高烏甲素分散片細粉、空白輔料適量，用水配制成每毫升約含氫溴酸高烏甲素50 μg的溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。結果空白輔料約在3.1 min出現較小的輔料峰，但與主峰相距甚遠，對溶出度測定無干擾。說明所選擇的溶出度測定方法專屬性較好。

圖1 氫溴酸高烏甲素HPLC圖A.空白對照;B.氫溴酸高烏甲素對照品;C.氫溴酸高烏甲素分散片;1.氫溴酸高烏甲素Fig.1 HPLC chromatogram of lappaconitine hydrobromideA.blank control;B.the reference of lappaconitine hydrobromide;C.lappaconitine hydrobromide dispersible tablets;1.lappaconitine hydrobromide

2.7.3 溶出液穩定性考察 取專屬性項下的樣品溶液，分別于室溫下放置 0，2，4，6，12，24 h 后，取 20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果各時間點的峰面積RSD 為1.35%(＜2.0%)，說明本品溶出液的穩定性較好，至少在24 h內穩定。

2.7.4 線性關系考察 精密稱取氫溴酸高烏甲素對照品12.2 mg，置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備溶液。分別精密量取貯備溶液0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL 置 10mL 量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.76，24.40，39.04，48.80，58.56，73.20 μg·mL-1的溶液。分別取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標，主峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y=19 583X－14 259(r=0.999 7)。氫溴酸高烏甲素在9.76 ～73.20 μg·mL-1濃度范圍內峰面積與濃度呈良好的線性關系。

2.7.5 溶出度回收實驗 按氫溴酸高烏甲素分散片溶出度測定濃度的50%，80%，100%進行回收實驗。分別精密稱取氫溴酸高烏甲素對照品約6.25，10.00，12.50 mg各3份，置250mL量瓶中，再分別加入空白輔料約0.14 g，加水溶解并稀釋至刻度，濾過，取續濾液作為供試品溶液。另精密稱取氫溴酸高烏甲素對照品約10 mg，置25mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。再精密量取該溶液1mL，置10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為對照品溶液。按“2.3”項下的色譜條件，分別取供試品溶液及對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算回收率。結果3個濃度的回收率均在97% ～103%之間(表1)，平均回收率為100.30%，RSD為1.34%，說明該方法的準確度較高。

表1 氫溴酸高烏甲素溶出度回收實驗結果Tab.1 Recovery of the dissolution of lappaconitine hydrobromide n=9

2.8 溶出均一性考察及與市售片比較 測定3批氫溴酸高烏甲素分散片中試樣品溶出曲線，考察溶出均一性。采用小杯法，以 100mL水為溶劑，轉速50 r·min-1。取樣時間點設為10，20，30，45，60 min，分別計算累積溶出度。同法測定市售氫溴酸高烏甲素普通片的溶出曲線，與分散片進行比較。累積溶出曲線見圖2。

3 討論

氫溴酸高烏甲素片劑因規格較小(5 mg)，質量標準［11］(衛生部標準二部第5冊)采用的溶出度測定方法為:“取本品數片(相當于氫溴酸高烏甲素50 mg)，照溶出度測定法(《中華人民共和國藥典》1995年版二部附錄ⅩC第2法)，加水800mL為溶劑，轉速為100 r·min-1，經 45 min 時，吸取溶液 20mL，濾過，精密量取濾液10mL置于25mL量瓶中，照含量測定項下自……測定每片的溶出量。限度為標示量的80%”。按照此方法，一個溶出杯要放10片樣品，實際上測得的是10片樣品的平均值，不能真實反映出每片的溶出情況。分析原因，可能因為此標準制訂較早，當時尚未普遍使用小杯法，故對規格較小的氫溴酸高烏甲素片劑采取了以上方法。

因此，采用小杯法進行氫溴酸高烏甲素分散片溶出方法研究，結果3批氫溴酸高烏甲素分散片溶出度均一性好，10 min內累積溶出度＞80%，而普通片40 min時溶出度才達到80%，說明分散片的釋藥速度較普通片快，提示氫溴酸高烏甲素分散片的吸收可能比普通片快，因此有望達到迅速鎮痛的目的。

［1］唐希燦，朱梅英，馮潔，等.刺烏頭堿氫溴酸鹽的藥理作用研究［J］.藥學學報，1983，18(8):579－584.

［2］安一明，戴建平，陳力，等.高烏甲素貼片治療癌癥疼痛的臨床研究［J］.中國腫瘤臨床與康復，1997，4(2):86－87.

［3］闕鐵生，鐘進才，周曉敏.高烏甲素透皮貼劑治療中重度癌痛［J］.中國臨床康復，2005，9(2):211.

［4］楊濤，王利利，王均爐.氯諾昔康和高烏甲素用于老年人中上腹部手術后自控鎮痛的效果比較［J］.醫藥導報，2005，24(9):782－783.

［5］孫爍.高烏甲素復合舒芬太尼用于術后鎮痛的臨床觀察［J］.現代中西醫結合雜志，2010，19(32):4185－4186.

［6］胡兆春，葉香芳.高烏甲素伍用嗎啡用于硬膜外持續鎮痛的臨床觀察［J］.海峽藥學，2010，22(6):195－196.

［7］王井泉.高烏甲素治療56例膽道術后患者疼痛的臨床療效分析［J］.中國臨床藥理學與治療學，2010，15(5):551－554.

［8］戴秀琴，方韜.高烏甲素合用芬太尼在術后靜脈鎮痛中的應用［J］.中國醫院藥學雜志，2009，29(5):402－404.

［9］胡雪蓮，余濤，邢茂，等.HPLC法測定氫溴酸高烏甲素的含量和有關物質［J］.醫藥導報，2011，30(2):249－251.

［10］王鴻，高建青，李新平.超聲波對氫溴酸高烏甲素透皮吸收的影響［J］.醫藥導報，2009，28(3):295－296.

［11］中華人民共和國衛生部藥品標準(二部)第5冊［S］.1996:53.