應用ASE－LC－ESI－MS法快速篩選腫節風的化學成分

羅永東，林培玲，吳水生，梁一池

（福建中醫藥大學 藥學院，福建 福州 350108）

腫節風（Sarcandrae herba）為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandra glabra（Thunb.）Nakai的干燥全草，性苦、辛、平，歸心、肝經，具有清熱涼血、活血消斑、袪風通絡的功效，可用于血熱發斑發疹，風濕痹痛，跌打損傷［1］。現代藥理研究表明，腫節風具有抗腫瘤、廣譜抗菌、提高免疫、抗疲勞、延長壽命、抗寒、治療胃潰瘍、鎮痛和促進骨折愈合等藥理作用［2］，臨床應用廣泛。腫節風藥材含有多種化學成分，主要類型有有機酸、揮發油、倍半萜、黃酮苷及香豆素類化合物等［3］，但其功效成分并不明確。綜合運用相似度評價、系統聚類和主成分分析等模式識別技術對腫節風藥材進行HPLC指紋圖譜研究［4］，提供了一種全面、準確和快速的質量評價模式，但液相色譜法在缺乏標準品對照的條件下難以對色譜峰提供準確的信息，其共有峰的選擇，有一定的隨意性，不一定能反映藥材的內在質量。液相色譜－質譜聯用技術通過對各組分峰紫外吸收光譜和質譜中的準分子離子峰及碎片離子分析，能快速鑒定化學成分，對全面了解藥材中各化學成分的存在情況具有獨特優勢。因此，為更為合理地進行腫節風藥材的指紋圖譜研究，以及后續的腫節風譜效關系研究，本文建立了一種快速的ASE－LC－PADESI－MS分析方法定性分析腫節風藥材的化學成分。

1 儀器與試劑

Waters Quattro Micro液質聯用儀（美國，Waters公司），配有ESI（電噴霧電離）離子源，Masslynx 4.02工作站；one PSE快速壓力溶劑萃取儀（美國，Applied Separations，Inc）；Milli－Q純水機（美國，Millipore 公 司 ），SartoriusBP211D型十萬分之一電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；甲醇、乙腈均為色譜純（德國，MERCK公司）。

反丁烯二酸對照品（fumaric acid，分子式：C4H4O4分子量：116.07；批號：1541－20001），購自中國藥品生物制品檢定所；異嗪皮啶對照品（isofraxidin，分子式：C11H10O5分子量：222.19；批號：071011）和迷迭香酸對照品（rosmarinic acid，分子式：C18H16O8，分子量：360.33；批號：100209）均購自上海宏達商貿有限公司；4－羥基－3－甲氧基苯甲酸（vanillic acid，分子式：C8H8O4分子量：168.19）、4－羥基－3，5－二甲氧基苯甲酸（syringic acid，分子式：C9H10O5，分子量：198.18）、3，4－二羥基苯甲酸（3，4－dihydroxybenzonic acid，分子式：C7H6O4分子量：154.12）、綠原酸（Chlorogenic acid，分子式：C16H18O9分子量：354.3087）、咖啡酸（Cafferic acid，分子式：C9H7O4，分子量：179.15）和依斯坦布林 A（istanbulin A，分子式：C15H20O4，分子量：264.32）為江西中醫學院羅永明教授友情贈予，純度經HPLC（面積歸一法）檢測大于98.0%。腫節風藥材于2011年3月份采于福建三明吉口采育場，經梁一池教授鑒定為金粟蘭科植物草珊瑚Sarcandraglabra（Thunb.）Nakai的干燥全草。

2 方法

2.1 PSE萃取方法制備樣品

腫節風藥材適當粉碎，取粗粉4.0g（不小于20目），置于one PSE快速壓力溶劑萃取儀萃取釜中，萃取釜底部提前加入過濾膜，將萃取釜放在萃取釜固定裝置上，關閉萃取釜門。選擇30%乙醇作為提取溶劑，設定PSE萃取方法參數（預熱平衡時間5min，靜態萃取溫度100℃，壓力56bar，靜態萃取時間10min，沖洗體積60%萃取釜體積，提取次數1次，載氣吹脫時間100s）。啟動one PSE快速壓力溶劑萃取儀，提取完成后自動停止。所得萃取液轉移至50mL容量瓶中，加30%乙醇定容，即得供試品。進樣前過0.22μm濾膜。

2.2 色譜條件

Waters XTerra MS C18色譜柱（2.1mm×150mm，5μm），柱溫40℃，流速0.3mL／min，流動相：乙腈（A）－0.1%甲酸溶液（B），梯度洗脫程序：A：0～25min，15%；25～30min，15%～45%；30～50min，45%；50～55min，45%～100%；55～69min，100%。進樣量5μL，全波長掃描。

2.3 質譜條件

離子化方式：電噴霧離子化（ESI）。正離子模式：毛細管電壓，2.97kV；錐孔電壓70.00V。負離子模式：毛細管電壓，2.50kV；錐孔電壓50.00V。其它二級錐孔電壓3.00V，六級桿透鏡電壓0.3V，離子源溫度120℃，脫溶劑氣溫度200℃，錐孔氣的流量50L／Hr，脫溶劑氣流量350L／Hr，選擇質核比范圍（Mass range）：100～1500m／z。數據由Masslynx 4.00（Waters公司）獲得和處理。

3 結果和討論

圖1為樣品正負離子模式下全掃描圖。提取離子流（EIC）：［M＋H］＋，［M＋Na］＋，［2M＋Na］＋，［M－H］－，［M＋HCOO］－，［2M－H］－等特征準分子離子峰，同時根據化合物液相色譜行為，推斷出22種化合物的分子量。并通過與對照品的質譜行為對照和相關文獻分析［5－7］，鑒定了腫節風藥材9個主要化學成分，結果見表1。

表1 腫節風藥材各色譜峰分析

圖1 樣品的總離子流（TIC）

PSE（Pressurized solvent EXtraction）提取方法為快速溶劑萃取ASE（Accelerated Solvent Extraction）的一種。快速溶劑萃取（ASE，Accelerated Solvent Extraction）是一種在較高的溫度（50℃～150℃）和壓力（60～130bar）下用溶劑萃取固體或半固體樣品的新穎樣品前處理方法，具有萃取時間短、溶劑用量少、提取率高、溶劑回收率高、所得產品品質好等優點，在它推出的很短時間內就被美國國家環保局批準為EPA3545號標準方法［8］。因one PSE快速壓力溶劑萃取儀自身帶有壓力過濾功能，本實驗所制得樣品非常干凈，無常用的超聲萃取方法所得萃取物放置一段時間后產生的沉淀物，對色譜柱影響小。同時，機器操作所帶來的實驗誤差小，重現性好。

本文建立了一種快速溶劑萃取結合液質聯用技術對腫節風藥材化學成分進行快速分析的方法。通過對照品和相關文獻分析，準確地鑒定了腫節風藥材所含的9種化學成分，為腫節風藥材的化學成分的快速篩選提供了一種方法。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版［S］.北京：化學工業出版社，2010：208－209.

［2］張園，呂圭源，俞靜靜.腫節風研究進展［J］.青島醫藥衛生，2006，38（5）：360－362.

［3］付菊琴，曲瑋，梁敬鈺.草珊瑚屬植物的研究進展［J］.海峽藥學，2011，23（1）：1－6.

［4］陳根順，徐麗芳，李鵬.草珊瑚的HPLC指紋圖譜研究［J］.中草藥，2009，42（2）：293－296.

［5］曾愛華，羅永明.草珊瑚化學成分研究［J］.中藥材，2005，28（4）：292－293.

［6］朱麗萍，李媛，楊敬芝，等.草珊瑚的化學成分研究［J］.中國中藥雜志，2009，33（2）：155－157.

［7］段營輝，戴毅，高昊，等.草珊瑚的化學成分研究［J］.中草藥，2005，41（1）：29－32.

［8］劉 靜.ASE快速溶劑萃取——解決固體、半固體樣品前處理的新技術［J］.現代科學儀器，2002，3（7）：59－61.