蒼術(shù)中β－桉葉油醇和茅術(shù)醇的分離制備研究

甄畢賢，才 謙

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600）

中藥蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒、明目的功效，用于濕阻中焦、脘腹脹滿、泄瀉、水腫、腳氣痿躄、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、夜盲、眼目昏澀等癥［1］。目前臨床上多采用蒼術(shù)的麩炒品進(jìn)行應(yīng)用，但蒼術(shù)炮制機(jī)理并不十分明確。本課題為研究蒼術(shù)麩炒后揮發(fā)性成分的變化，而對揮發(fā)油中含量很高且活性較好［2－4］的兩個成分茅術(shù)醇和β－桉葉油醇進(jìn)行分離，為炮制機(jī)理研究提供對照品。β－桉葉油醇和茅術(shù)醇兩種成分是一對異構(gòu)體，二者雙鍵的位置不同，采用普通的硅膠無法將二者分開，本課題采用硅膠－硝酸銀硅膠－凝膠相結(jié)合的方法，分離得到純度符合要求的對照品，且方法較簡單。

1 儀器、試劑與材料

Bruker－600型核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；Sephadex LH－20（瑞士pharmacia公司）；柱色譜硅膠（100～200目，青島海洋化工廠）；薄層色譜硅膠（HF254，青島海洋化工廠）。石油醚（60℃～90℃）、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲醇、氯仿等溶劑均為天津科密歐化學(xué)試劑公司分析純產(chǎn)品。Ag－NO3（AR，沈陽市試劑二廠）；實驗用藥材采自湖北英山，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室王冰教授鑒定為茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.的干燥根莖。25%硝酸銀硅膠的制備方法：稱取600g柱層析用硅膠（100～200目），將150g AgNO3溶于水中，加入硅膠攪拌均勻，減壓回收溶劑，即得。

2 實驗與結(jié)果

2.1 提取和分離

取蒼術(shù)干燥根莖5kg，粉碎成粗粉，浸泡后置滲漉桶中，，加80%乙醇進(jìn)行滲漉，合并滲漉液，減壓回收乙醇，濃縮得濃縮液。將濃縮液加二倍量的水稀釋，按藥液與石油醚（60℃～90℃）的體積比1：1用石油醚（60℃～90℃）進(jìn)行萃取，萃取3次，合并石油醚萃取液。回收石油醚，并濃縮干燥，制成浸膏，稱重225g。

取石油醚層干膏225g進(jìn)行硅膠柱色譜分離，以不同比例的石油醚－乙酸乙酯梯度洗脫，體積比（100：1－1：1），每500mL為一流份，薄層檢查合并相同組分，將含有茅術(shù)醇，β－桉葉油醇的流份（石油醚－乙酸乙酯＝70：1）合為Fr.A，用25%AgNO3硅膠柱，以環(huán)己烷－乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫（體積比100：1－50：1）每400mL為一流份，薄層檢查合并相同組分，將含有茅術(shù)醇的流份（環(huán)己烷－乙酸乙酯＝75：1）合為Fr.a，含有β－桉葉油醇的流份（環(huán)己烷－乙酸乙酯＝75：1）合為Fr.b，F(xiàn)r.a和b分別用Sephadex LH－20凝膠柱純化，氯仿重結(jié)晶，得到化合物Ⅰ、Ⅱ。圖1為化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分離、純化工藝流程圖。

圖1 化合物Ⅰ、Ⅱ的提取、分離、純化工藝流程

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 Ⅰ：白色針晶，易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1HNMR（600MHz，CDCl3）δppm：5.32（1H，m，C（7）－H），1.68（3H，d，C（6）－CH3），1.20（6H，s，C（11）－（CH3）2），0.92（3H，d，C（10）－CH3）。13C－NMR（600MHz，CDCl3）δppm：140.02（C－6），121.65（C－7），71.95（C－11），51.38，48.71，36.69，35.67，33.23，28.38，27.97，27.91，27.65，24.16，19.86，16.15。其1H－NMR，13C－NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報道的茅術(shù)醇數(shù)據(jù)一致，所以鑒定為茅術(shù)醇。其結(jié)構(gòu)如圖2。

圖2 茅術(shù)醇

化合物 Ⅱ：白色針晶，易溶于石油醚、氯仿、甲醇等。1H－NMR（600MHz，CDCl3）δppm：0.70（3H，s，C（14）－CH3），1.20（6H，s，C（9）－（CH3）2），4.45（1H，d，C－15），4.71（1H，m，C－15）。13C－NMR（600MHz，CDCl）δppm：151.133（C－15），105.31（C－4），72.87（C－11），49.79（C－5），49.44（C－7），41.84（C－9），41.12（C－1），36.89（C－3），35.88（C－10），27.17（C－12），27.12（C－13），25.02（C－6），22.37（C－8），16.29（C－14）。其1H－NMR，13C－NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報道的β－桉葉油醇數(shù)據(jù)一致，所以鑒定為β－桉葉油醇。其結(jié)構(gòu)如圖3。

圖3 β－桉葉油醇

3 討論

本文通過采用硅膠－硝酸銀硅膠－凝膠三種柱色譜結(jié)合的方法，從蒼術(shù)80%乙醇提取石油醚萃物中分離得到2個單體化合物，并鑒定了化合物Ⅰ為茅術(shù)醇；化合物Ⅱ為β－桉葉油醇。此方法簡單，且所得對照品純度較高，可以為研究麩炒對蒼術(shù)揮發(fā)性成分的影響提供對照品。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.第1部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：150－151.

［2］王金華，薛寶云，梁愛化，等.蒼術(shù)有效成分β－桉葉醇對小鼠小腸推進(jìn)功能的影響［J］.中國藥學(xué)雜志，2002，37（4）：266.

［3］李偉，鄭天珍.蒼術(shù)對大鼠離體小腸，結(jié)腸收縮活動的影響［J］.中藥藥理與臨床，2000，16（5）：20－27.

［4］周德文，周立勇.術(shù)類的藥理和藥效［J］.國外醫(yī)藥－植物藥分冊，1996，11（3）：120－122.

［5］尹洲，趙金華.茅術(shù)醇與β－桉葉油醇在蒼術(shù)提取物中的分離［J］.中醫(yī)臨床研究，2010，2（4）：63－64.