大黃通便顆粒中大黃的含量測定研究

陳邦恩，劉美龍

（福建生物工程職業技術學院，福建 福州 350001）

大黃通便顆粒主要是由大黃等中藥組成，具有清熱通便的功效，臨床常用于治療實熱食滯、便秘以及濕熱型食欲不振等。大黃為其方中主藥，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚為其所含的主要有效成分，故本研究參考中國藥典2010年版一部大黃藥材［1］及文獻報道的含量測定方法，建立高效液相色譜法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，并對方法學進行了考察，該方法簡便，可行，重復性好。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1200液相色譜儀；超純水器（MILLI－Q）；KQ－500VDB型三頻數控超聲波清洗器（奧特寶恩斯儀器有限公司）。

1.2 試藥

對照品：蘆薈大黃素對照品（含量以98.0%計，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110795－201007）；大黃酸對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：0757－200206）；大黃素對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110756－200110）；大黃酚對照品（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110796－200514）；大黃素甲醚對照品（含量以99.8%計，購自中國藥品生物制品檢定所，批號：110758－201013）。樣品：大黃通便顆粒（江蘇辰牌藥業有限公司，批號：110118、110307、110316）以及陰性樣品。試劑：甲醇為色譜純，磷酸為分析純，提取用的甲醇、二氯甲烷為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：XB－C18（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：甲醇－0.1%磷酸溶液（85：15）；檢測波長為254nm；理論塔板數按大黃素峰計算應不低于3000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品適量，加10%二氯甲烷的甲醇溶液溶解，分別制成每1mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各100μg，大黃素甲醚50μg的溶液；分別精密量取上述對照品溶液各1mL，置同一25mL量瓶中，加10%二氯甲烷的甲醇溶液定溶至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備

取本品粉末（過四號篩）約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流45min，放冷，密塞，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）2min，再加二氯甲烷10mL，加熱回流1h，冷卻，移至分液漏斗中，用少量二氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取二氯甲烷液，酸液用二氯甲烷振搖提取2次，每次15mL，合并二氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加10%二氯甲烷甲醇溶液使溶解，轉移至25mL量瓶中，加10%二氯甲烷甲醇溶液至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備

取缺大黃陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.2.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.3 空白試驗

分別吸取“2.2”項下的混合對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，注入高效液相色譜儀進行測定，實驗結果表明陰性樣品溶液在與對照品相應的保留時間處無色譜峰出現。方中各味藥對蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚色譜峰無干擾。結果見圖1。

2.4 線性試驗

精密稱取在105℃干燥12h的蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品和大黃素甲醚對照品適量，加10%二氯甲烷的甲醇溶液溶解分別制成每1mL含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各100μg，大黃素甲醚50μg的溶液。分別精密吸取上述5種溶液各1、2、3、4、5、6、16mL分別置100mL容量瓶中，加10%二氯甲烷的甲醇溶液稀釋定容至刻度，搖勻，即得，精密吸取20μL，分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進行測定。以進樣量（X）對峰面積（Y）進行線性回歸，得回歸方程為：蘆薈大黃素 Y＝5545.9X－31.839，r＝0.9998；大黃酸 Y＝4695.2X－20.192，r＝0.9997；大黃素 Y＝4000.5X－14.995，r＝0.9997；大黃酚 Y＝5814.8X－28.445，r＝0.9996；大黃素甲醚 Y＝3088.1X－7.9162，r＝0.9996。試驗結果表明，蘆薈大黃素在0.02436～0.3898μg／mL范圍內呈良好線性關系；大黃酸在0.0181～0.2896μg／mL范圍內呈良好線性關系；大黃素在0.01856～0.2970μg／mL范圍內呈良好線性關系；大黃酚在0.01866～0.2986 μg／mL范圍內呈良好線性關系；大黃素甲醚在0.01～0.16 μg／mL范圍內呈良好線性關系。

圖1 對照品、樣品及陰性樣品的色譜

2.5 重復性試驗

取同一批號（批號：110118）樣品，按“2.2”項下供試品的方法，平行制備6份供試品溶液，進樣測定，計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，RSD分別為1.01%、2.62%、1.18%、2.54%、2.99%，表明該方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

取同一批號（批號：110118）樣品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12h后按上述色譜條件測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，含量基本不變，RSD分別為2.79%、1.48%、0.50%、0.82%、0.57%，表明供試品液在12h內穩定性良好。

2.7 精密度試驗

在上述色譜條件下，取按“2.2”項下配置的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品溶液分別連續進樣6次，RSD 分別為 1.01%、0.45%、0.68%、0.73%、0.79%。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的大黃通便顆粒（江蘇辰牌藥業有限公司，批號：110118）樣品，分別精密加入一定量的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品，按“2.2”項下操作制備供試品溶液并測定，計算回收率，取得了較滿意的回收率，表明該方法可行。結果見表1、2、3、4、5。

表1 蘆薈大黃素加樣回收率試驗結果（n＝6）

表2 大黃酸加樣回收率試驗結果（n＝6）

表3 大黃素加樣回收率試驗結果（n＝6）

表4 大黃酚加樣回收率試驗結果（n＝6）

表5 大黃素甲醚加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.9 樣品測定

取3批樣品，按“2.2”項下供試品溶液制備方法制備，按上述色譜條件測定，計算，結果見表6。

表6 大黃含量測定結果

3 討論

我們曾比較氯仿與二氯甲烷作為提取溶劑進行提取，結果表明二者提取的含量相當，而氯仿毒性較大，故采用二氯甲烷作為本方法的提取溶劑。本實驗所采用測定方法測定蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚，重現性良好，回收率高，且在該色譜條件下，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚進樣精密度良好，故該方法結論可靠，可作為大黃通便顆粒的質量控制標準。

［1］國家藥典委員會編.中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：22－23.