活血化瘀中藥對乙酸致胃潰瘍大鼠胃黏膜血流量的影響※

白建樂 劉建平 張書金

(河北省石家莊市中醫院內分泌科，河北 石家莊 050051)

活血化瘀中藥對乙酸致胃潰瘍大鼠胃黏膜血流量的影響※

白建樂 劉建平1張書金

(河北省石家莊市中醫院內分泌科，河北 石家莊 050051)

目的觀察活血化瘀中藥對乙酸致胃潰瘍大鼠胃黏膜血流量(GMBF)的影響，并探討其機制。方法將32只Wistar大鼠隨機分為4組，即空白對照組、模型組、雷尼替丁組及活血化瘀中藥組，每組各8只。模型組、雷尼替丁組及活血化瘀中藥組建立乙酸致胃潰瘍大鼠模型，空白對照組常規飼養。造模后第3 d，雷尼替丁組及活血化瘀中藥組分別予鹽酸雷尼替丁膠囊懸浮液、活血化瘀中藥方0.05 mL/kg灌胃，空白對照組及模型組予等容積0.9%氯化鈉注射液灌胃，連續14 d。各組大鼠末次給藥后，禁食24 h，測定GMBF、潰瘍損傷指數、血漿內皮素(ET)及血清和胃黏膜組織一氧化氮(NO)含量。結果與空白對照組比較，模型組和雷尼替丁組GMBF明顯降低(P＜0.05)，血漿ET明顯升高(P＜0.05)，而活血化瘀中藥組無明顯變化(P＞0.05)。活血化瘀中藥組GMBF、ET與模型組比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，且改善優于雷尼替丁組(P＜0.05)。雷尼替丁組和活血化瘀中藥組潰瘍損傷指數均明顯低于模型組(P＜0.05)。雷尼替丁組與活血化瘀中藥組潰瘍損傷指數比較差異無統計學意義(P＞0.05)。活血化瘀中藥組血清及胃黏膜組織NO含量與空白對照組、模型組及雷尼替丁組比較均明顯升高(P＜0.05)。結論活血化瘀中藥通過減少大鼠血漿ET含量，增加血清及胃黏膜組織NO含量，改善GMBF，從而達到促進潰瘍愈合的目的。

胃潰瘍;胃黏膜;血流速度;疾病模型，動物;活血;中藥療法;一氧化氮

胃潰瘍屬中醫學胃脘痛范疇。病因病機為氣滯血瘀，胃絡損傷。治宜活血化瘀。我們在臨床上以此為法，采用活血化瘀中藥治療胃潰瘍取得了滿意療效。本研究通過實驗研究，觀察活血化瘀中藥對乙酸致胃潰瘍大鼠胃黏膜血流量(gastric mucosal blood flow，GMBF)的影響，為臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康Wistar大鼠32只，雌雄各半，體質量180～250 g，購自河北醫科大學實驗動物中心，動物合格證號:71043。以河北醫科大學實驗動物中心提供的固定平衡飼料飼養，自由飲水。

1.1.2 實驗試劑及儀器 實驗性乙酸(天津泛美醫材有限公司)，10%甲醛溶液(由河北醫科大學實驗動物中心提供)，一氧化氮(NO)試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產批號:060418)，內皮素(ET)放免藥盒(解放軍總醫院科技開發中心放免所，生產批號:060410)，FJ－2021γ放射免疫計數器(國營二六二廠)，SLT溫控酶標儀(上海微百生物科技有限公司)，血流量微機檢測儀(中國合肥機械電子工業部第四七三所)，鉑金電極(深圳市同奧科技有限公司)。

1.1.3 實驗藥物 活血化瘀中藥:虎杖12 g，當歸9 g，川芎9 g，白芍藥 20 g，延胡索 12 g，丹參 20 g，三七(沖服)3 g，甘草5 g。以上藥物均由石家莊樂仁堂藥店提供，常規水煎2次，濃縮至100%，使每mL含生藥1 g。鹽酸雷尼替丁膠囊(江西匯仁藥業有限公司，國藥準字H36021340)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 將32只Wistar大鼠隨機分為4組，即空白對照組、模型組、雷尼替丁組及活血化瘀中藥組，每組各8只。

1.2.2 模型制備 參照文獻［1］進行模型制備。模型組、雷尼替丁組及活血化瘀中藥組術前禁食24 h，自由飲水。然后乙醚吸入麻醉，待麻醉生效后，將大鼠固定于手術臺，腹部剃毛，常規消毒，于劍突下腹中線打開腹腔(切口長度約2 cm)，暴露胃。在胃前壁近幽門處(避開血管)，用微量注射器將乙酸0.01 mL漿膜面注入胃黏膜下層，注射后，胃壁表面立即形成一個圓形或橢圓形隆起，然后隆起變平，形成乳白色不透明區，直徑約5 mm。用縫線將大網膜固定于注射區，以防穿孔。逐層縫合切口。手術嚴格無菌操作。空白對照組不予手術，常規飼養。

1.2.3 給藥方法 造模后第3 d，雷尼替丁組予鹽酸雷尼替丁膠囊懸浮液(用0.9%氯化鈉注射液溶解，每mL氯化鈉注射液含7.75 mg鹽酸雷尼替丁膠囊)0.05 mL/kg灌胃。活血化瘀中藥組予活血化瘀中藥0.05 mL/kg灌胃。空白對照組及模型組分別予等容積0.9%氯化鈉注射液灌胃。各組均連續灌胃14 d。

1.3 觀察指標及方法

1.3.1 GMBF 各組Wistar大鼠在末次灌胃給藥后，禁食24 h，自由飲水。乙醚吸入麻醉各組大鼠，經腹正中打開腹腔，暴露胃，將記錄電極置于胃黏膜層，參考電極置于切口皮下，連接導線于血流量微機檢測儀。予10%氫氣鼻孔吸入15 min后，記錄儀記錄H2清除曲線［2］，根據Fick原理和 Rety方程計算，GMBF=69.3/T1/2［mL/(min·100 g)］［3］。

1.3.2 潰瘍損傷指數及ET、NO含量 GMBF測定結束后，取各組大鼠股動脈血4 mL，2 mL采用硝酸還原酶法測定血清NO，另外2 mL采用放射免疫法測定血漿ET。然后，處死各組大鼠，取出胃組織，沿胃大彎剪開，用0.9%氯化鈉注射液沖洗干凈，將胃自然展開，濾紙汲干。用游標卡尺測量潰瘍的長度和寬度，長為潰瘍的最大直徑，寬為與直徑垂直的最寬距離，潰瘍損傷指數用潰瘍面積=長×寬表示。剪取含潰瘍邊緣約3 mm組織在內的胃潰瘍組織塊，稱質量，每1 g胃組織加入10 mL 0.9%氯化鈉注射液，研磨，混合均勻，檢測胃黏膜組織NO含量。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計學軟件，計量資料用均數±標準差()表示，采用t檢驗。

2 結果

2.1 各組GMBF比較 見表1。

表1 各組GMBF比較mL/(min·100 g)，±s

表1 各組GMBF比較mL/(min·100 g)，±s

與空白對照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05;與雷尼替丁組比較，#P ＜0.05

由表1可見，模型組和雷尼替丁組GMBF與空白組對照組比較明顯降低(P＜0.05)，而活血化瘀中藥組無明顯變化(P＞0.05)。活血化瘀中藥組GMBF與模型組比較明顯升高(P＜0.05)，且高于雷尼替丁組(P＜0.05)。2.2 各組潰瘍損傷指數及血漿ET含量比較 見表2。

表2 各組潰瘍損傷指數及血漿ET含量比較±s

表2 各組潰瘍損傷指數及血漿ET含量比較±s

與空白對照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05;與雷尼替丁組比較，﹟P ＜0.05

組 別 n 潰瘍指數(mm2) 血漿ET(pg/mL)空白對照組8－104.50 ±24.58模型組 8 4.39 ±3.51 141.19 ±21.09*雷尼替丁組 8 1.88±1.80△ 138.77±25.30*活血化瘀中藥組 8 2.38±1.78△ 96.58±12.98△﹟

由表2可見，雷尼替丁組和活血化瘀中藥組潰瘍損傷指數均明顯低于模型組(P＜0.05)。雷尼替丁組與活血化瘀中藥組潰瘍損傷指數比較差異無統計學意義(P＞0.05)。模型組和雷尼替丁組血漿ET與空白對照組比較明顯升高(P＜0.05)，而活血化瘀中藥組無明顯變化(P＞0.05)。活血化瘀中藥組血漿ET與模型組比較明顯降低(P＞0.05)，且低于雷尼替丁組(P＜0.05)。

2.3 各組血清及胃黏膜NO含量比較 見表3。

表3 各組血清及胃黏膜組織NO含量比較μmol/L，±s

表3 各組血清及胃黏膜組織NO含量比較μmol/L，±s

與空白對照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，△P ＜0.05;與雷尼替丁組比較，#P ＜0.05

組 別 n 血清 胃黏膜組織空白對照組8 4.20 ±0.99 2.07 ±0.69模型組 8 4.43 ±0.83 1.84 ±0.40雷尼替丁組 8 4.61 ±1.18 1.91 ±0.50活血化瘀中藥組 8 6.57 ±1.56＊△# 3.15 ±0.54＊△#

由表3可見，活血化瘀中藥組血清及胃黏膜組織NO含量與空白對照組、模型組及雷尼替丁組比較均明顯升高(P＜0.05)。

3 討論

胃潰瘍為臨床常見疾病，其發病機制尚不明確，但普遍認為系因胃酸分泌過多使胃黏膜受損，攻擊因子和保護因子失衡，從而使胃黏膜失去防御能力所致［4］。研究表明，胃黏膜的防御能力與GMBF密切相關［5］，而GMBF的維持很大程度上取決于內皮細胞釋放的舒縮血管因子之間的平衡。NO及ET是內皮細胞依賴的血管舒張因子和收縮因子的主要成分，二者存在負反饋調節，他們之間的動態平衡對調節血管張力和結構重組具有重要意義［6－7］。NO為胃腸道非膽堿能非腎上腺素能神經所釋放的主要抑制性遞質和信使分子，能調節胃腸黏膜血流量，維持黏膜完整性和微血管屏障的正常功能，參與調節胃的酸堿分泌，促進潰瘍愈合［6］。ET是一種強烈的血管張力調節因子，其通過降低胃黏膜血流量，使胃黏膜保護機制削弱而導致胃黏膜損傷［8］，還能明顯增加胃血管阻力和血管灌注壓，有強力致胃潰瘍形成作用［9］。

本研究采用乙酸致胃潰瘍大鼠模型，此方法操作簡單，重復性好，所形成的潰瘍大小穩定，外形與組織結果與人胃潰瘍接近，可用于各種藥物治療胃潰瘍的研究及修復機制的探討［1］。雷尼替丁具有競爭性阻滯組胺與H2受體結合，抑制胃酸分泌的作用，為臨床治療胃潰瘍常用的有效藥物。本實驗通過設立雷尼替丁組，與活血化瘀中藥組比較哪種治療方法效果更佳。

中醫學認為，胃潰瘍多為風、寒、濕邪內客于胃，或情志不暢，肝氣郁結，導致氣滯血瘀，胃絡瘀阻所致。活血化瘀中藥針對胃潰瘍病因病機組方，方中丹參活血化瘀，養血安神;三七止血止痛，散瘀消腫;川芎活血行氣;延胡索理氣活血止痛;當歸補血活血止痛;白芍藥養血斂陰，柔肝止痛;虎杖清熱解毒，活血通經;甘草緩急止痛，調和諸藥。現代藥理研究表明，丹參酚酸類成分為丹參抗消化性潰瘍的有效成分，可通過改善黏膜上皮細胞增生和黏液分泌，抑制迷走神經興奮而降低胃運動，增強胃黏膜的防御功能，減少黏膜皺褶形成而減輕胃黏膜損傷［9］。川芎嗪具有抗血栓形成、擴張小動脈等作用［10］。白芍藥有調理胃腸蠕動功能，抑制乙酰膽堿所致的胃痙攣現象，擴張胃血管，改善局部微循環的作用，還可不同程度地降低胃泌素水平，有利于炎癥的消除和潰瘍面的愈合［10］。

本研究結果表明，模型組GMBF與空白對照組比較明顯下降(P＜0.05)，表明模型組大鼠存在胃微循環障礙，進而形成潰瘍。雷尼替丁組大鼠GMBF、血漿ET含量及血清和胃黏膜組織NO含量與模型組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。而活血化瘀中藥組GMBF與模型組大鼠比較明顯升高(P＜0.05)，潰瘍損傷指數降低(P＜0.05)，這可能是通過減少血漿ET含量(P＜0.05)和增加血清及胃黏膜組織NO含量(P＜0.05)實現的，也可能是活血化瘀中藥直接作用的結果。說明活血化瘀中藥可以改善胃潰瘍大鼠的胃微循環，從而改善受損的胃黏膜。

［1］張叔行，陳玲，陳東明，等.大鼠胃潰瘍模型的制作方法［J］.解剖學雜志，1989，(2):158－159.

［2］Livingston EH，Reedy T，Leung FW，et al.Computerized curve fitting in the analysis of hydrogen gas clearance curves for blood flow determination［J］.American Journal of Physiology，1989，257(4):G668－675.

［3］陳曉莉，蒲曉允.應激對大鼠血管緊張素Ⅱ與胃粘膜微循環及能量代謝的影響［J］.第三軍醫大學學報，2001，23(7):875－876.

［4］陳靜，陸鳳鳴，韓誠正.健脾清熱活血方配合奧美拉唑治療消化性潰瘍臨床觀察［J］.河北中醫，2010，32(8):1174－1176.

［5］趙廣翊，賈佳，孟凌新.星狀神經結阻滯抗鼠急性胃黏膜損傷的實驗研究［J］.中國誤診學雜志，2010，10(10):2272－2274.

［6］馬俊江，李圣愛.一氧化氮與胃潰瘍［J］.生理科學進展，1998，29(3):260－263.

［7］張國鋒，陳易人，張明璈.一氧化氮、內皮素與胃粘膜損傷［J］.胃腸病學和肝病學雜志，1999，8(4):293－296.

［8］寇庚.內皮素與胃粘膜損傷［J］.國外醫學:消化系疾病分冊，2000，20(1):8－11.

［9］Wallace JL，Cirino G，De Nueci G，et al.Endothelin has potent ulcerogenic and vasoconstriction actions in stomach［J］.AM J Physiol，1989，256(4 Pt 1):G661－ 666.

［10］劉娟，劉穎.丹參藥理活性成分研究進展［J］.遼寧中醫藥大學學報，2010，12(7):15－17.

［11］馬清鈞，王淑玲.常用中藥現代研究與臨床［M］.天津:天津科技翻譯出版公司，1995:383－384，637－638.

Study of traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis on gastric mucosal blood flow of rat with acetic acid－ induced gastric ulcer

BAI Jianle，LIU Jianping，ZHANG Shujin.Department of Endo-crinology，Shijiazhuang Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hebei Province，Shijiazhuang050011

ObjectiveTo observe the effect and mechanism of traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis on gastric mucosal blood flow of rat with acetic acid－ induced gastric ulcer.Methods

32 wistar rats were randomly divided into four groups，namely control group，model group，ranitidine and traditional Chinese medicine group，8 rats were in each group.Model group，ranitidine and traditional Chinese medicine group set up acetic acid－ induced gastric ulcer in rats，the control group

conventional breeding.After 3 d modeling ranitidine and traditional Chinese medicine group received ranitidine hydrochloride capsule suspension and traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis 0.05 mL/kg orally，the control group and model group were given equal volume of 0.9%sodium chloride injection，continuous 14 d.Rats in each group after the last administration，fasted 24 h，gastric mucosal blood flow(GMBF)，ulcers damage index，plasma ET and NO levels in serum and gastric mucosa were measured.ResultsGMBF in ranitidine and model group was decreased，plasma ET was increased in comparison with that in control group(P＜0.05).But there was no significant changes in traditional Chinese medicine group on GMBF and plasma ET(P＜0.05).There was significant difference between traditional Chinese medicine group and model group on GMBF and plasma ET(P＜0.05).The improvement of GMBF and plasma ET in traditional Chinese medicine group was superior to that in ranitidine group(P＜0.05).Ulcers damage index in ranitidine and traditional Chinese medicine group was lower than that in model group(P＜0.05).There was no significant difference between ranitidine and traditional Chinese medicine group on ulcers damage index(P＞0.05).NO levels in serum and gastric mucosa in traditional Chinese medicine group was obviously increased in comparison with that in control group，model group and ranitidine group(P＜0.05).ConclusionTraditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis can improve ulcer healing by reducing ET content in rat blood plasma，increasing NO in serum and gastric mucosa and improving gastric mucosal blood flow.

Gastric ulcer;Gastric mucosa;Blood flow;Disease model;Animal;Activating blood;Therapy of traditional Chinese medicine;Nitric oxide

R－332;R322.44;R573.11;R283.661

A

1002－2619(2011)07－1058－03

※項目來源:河北省中醫藥管理局2006年度科研課題計劃(編號:2006002)

1 河北省中醫院消化科，河北 石家莊 050011

白建樂(1976—)，男，主治中醫師，碩士。從事內分泌疾病診療工作。

2011－04－12)