紫外分光光度法測定依托紅霉素顆粒溶出度試驗

張 曄

依托紅霉素 （erythromycin estolate）為大環內酯類抗生素，為紅霉素丙酸酯的十二烷基硫酸鹽，對葡萄球菌屬、各組鏈球菌和革蘭陽性桿菌均具抗菌活性。本品對除脆弱擬桿菌和梭桿菌屬以外的各種厭氧菌亦具抗菌活性；對軍團菌屬、胎兒彎曲菌、某些螺旋體、肺炎支原體、立克次體屬和衣原體屬也有抑制作用。本品系抑菌劑，但在高濃度時對某些細菌也具殺菌作用。依托紅霉素在水中幾乎不溶，其制劑的類型及工藝可影響其溶出和體內的吸收。中國藥典2010年版制劑通則中規定混懸顆粒應進行溶出度檢查[1]，依托紅霉素顆粒為混懸顆粒，但正文中對溶出度檢查并未做規定[1]，為確保臨床用藥有效，本文通過對依托紅霉素顆粒溶出行為的考察，并依據試驗結果建立了紫外分光光度法測定依托紅霉素顆粒溶出度的方法，可為制定依托紅霉素顆粒溶出度檢查法提供依據。

1 材 料

UV-240紫外分光光度計；ZRS-8G型溶出度測定儀。依 托 紅 霉 素 顆 粒 （75 mg）， 批 號 ：20101105 20110106 20101204，均為市售品。依托紅霉素原料，A廠提供。鹽酸、硫酸均為分析純。

2 方 法

2.1 檢測波長的選擇 稱取依托紅霉素原料適量，用含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）溶解并稀釋成83 μg/ml的溶液。精密量取5 ml，精密加硫酸溶液（75→100）5 ml，搖勻，放置 30 min，冷卻至室溫，照分光光度法在350～550 nm波長范圍內掃描，結果在482 nm波長處有最大吸收。

2.2 線性范圍考察 稱取依托紅霉素原料適量，用含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）溶解并稀釋成濃度分別為 40、60、80、100、120 μg/ml的溶液。精密量取上述溶液各 5 ml，分別精密加入硫酸溶液（75→100）5 ml，搖勻，放置30 min，照分光光度法在482 nm波長處測定吸光度，結果吸光度分別為 0.274、0.415、0.546、0.691、0.838。 回歸方程A=0.007C-0.008 8（r=0.999 6），表明在 40～120 μg/ml范圍內呈良好的線性關系。

2.3 輔料干擾情況 稱取按處方配制的輔料適量 （約相當于平均裝量），加含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）900 ml振搖溶解，用 0.8 μm 濾膜過濾，精密量取續濾液 5 ml，精密加入硫酸溶液（75→100）5 ml，搖勻，放置30 min，冷卻至室溫，照分光光度法在482 nm波長處測定吸光度，結果輔料在此波長處無吸收，表明輔料對樣品溶出度測定無干擾。

2.4 溶出行為考察 取批號20101105批樣品，考察其溶出行為。取樣品6袋，照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄XC第二法），以含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）900 ml為溶出介質，分別以轉速為 50 r/min和 75 r/min 進行溶出， 經 5、10、20、30、45 min 時各取溶出液5 ml，以0.8 μm濾膜過濾，同時分別補充新鮮介質各5 ml。取續濾液用溶出介質稀釋成83 g/ml的溶液，作為供試品溶液。另取本品10袋，分別精密稱定內容物重量并計算平均裝量，混勻，精密稱取適量（約相當于平均裝量），用乙醇15 ml溶解后，用溶出介質稀釋成83 μg/ml的溶液，濾過，取續濾液作為對照溶液。精密量取上述溶液各5 ml，分別精密加入硫酸溶液（75→100）5 ml，搖勻，放置 30 min，冷卻至室溫，照分光光度法在482 nm波長處測定吸光度，按供試品溶液與對照溶液吸光度的比值計算每袋的溶出量。溶出曲線見圖1。

圖1 溶出曲線

結果表明依托紅霉素顆粒在含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）中溶出性能良好。轉速對其溶出速率影響不大，無論50 r/min還是75 r/min在30 min都能達到溶出平臺，且6袋樣品具有良好的溶出均一性（RSD<5.0%）。

2.5 樣品的溶出度測定 取三批樣品，照溶出度測定法（中國藥典2005年版二部附錄XC第二法），以含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）900 ml為溶出介質，轉速為50 r/min，依法操作，于30 min時取溶出液適量，以0.8 μm濾膜過濾，取續濾液用含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）稀釋成 83 μg/ml的溶液，作為供試品溶液。另取本品10袋，分別精密稱定內容物重量并計算平均裝量，混勻，精密稱取適量（約相當于平均裝量），用乙醇15 ml溶解后，用溶出介質稀釋成83 μg/ml的溶液，濾過，取續濾液作為對照溶液。以下操作同2.4項下，計算三批樣品的溶出度，結果均大于90%。

3 討 論

本文選擇用含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）作為溶出介質。實驗證明，依托紅霉素顆粒在含0.2%的十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液（9→1000 ml）中溶出良好。考慮到本品為粉末，采用轉籃法，往籃中倒樣品時易撒出，把籃體連接到籃軸時由于震動也會導致部分細粉漏出造成誤差，故本文采用槳法試驗。依托紅霉素的化學結構上無共軛雙鍵，在紫外光區無特征吸收，無法直接用紫外分光光度法進行測定，故用硫酸顯色法測定。硫酸顯色反應時，能夠放出大量的熱量，為了保持樣品之間的一致性，需要注意硫酸的加入速度應比較緩慢，使熱量能夠均勻地逐漸散發出去，加硫酸后要搖勻，要放置至室溫后再測定。

本實驗對轉速的影響進行了考察，結果表明50 r/min和75 r/min對依托紅霉素顆粒的溶出行為影響不大，故建議選擇50 r/min。依托紅霉素顆粒在30 min即能達到溶出平臺，建議溶出時間定為30 min。限度建議參照依托紅霉素片定為70%。

本文采用自身對照法計算溶出量，可抵消由主藥原料效價之間、制劑含量之間以及輔料之間等可能存在的差異對溶出量測定的影響。

[1]國家藥典委員會編.中國藥典[S].二部.北京：化學工業出版社，2010. 附錄 14，472.