復方氨溴索氯雷他定膠囊溶出度測定方法的研究*

毛秀梅，韓 蕊，楊金榮3,

(1.天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300192； 2.天津市人民醫院，天津 300121； 3．天津醫科大學,天津 300070)

復方氨溴索氯雷他定膠囊用于呼吸道感染引起的咳嗽，同時具有稀釋痰液、降低痰液黏稠性作用，可降低氣道阻力，保持呼吸順暢。復方氨溴索氯雷他定膠囊由鹽酸氨溴索和氯雷他定組成，本實驗采用HPLC法對該制劑中鹽酸氨溴索和氯雷他定的溶出度進行測定，方法準確可靠。

1 儀器與試藥

1.1儀器 高效液相色譜儀(SPD-10A PLUS，日本島津)；色譜柱(Kromasil C18，150 mm×4.6 mm，5 μm，天津市色譜科學技術公司)；智能溶出試驗儀(ZRS-8，天津大學無線電廠)。

1.2試藥 復方氨溴索氯雷他定膠囊(自制，每粒膠囊含鹽酸氨溴索30 mg和氯雷他定5 mg)；鹽酸氨溴索對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號100599-200502)、氯雷他定對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號100615-200401)；乙腈色譜純(中國醫學科學院天津協和公司)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1溶出量測定方法的建立

2.1.1溶液的配制

2.1.1.1對照品溶液 精密稱取約鹽酸氨溴索對照品15 mg，置50 ml量瓶中，加鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得溶液濃度為300 mg/L的鹽酸氨溴索對照品儲備液；精密量取上述溶液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為30 mg/L的鹽酸氨溴索對照品溶液。

精密稱取氯雷他定對照品10 mg，置200 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，得溶液濃度為50 mg/L的氯雷他定對照品儲備液；精密量取上述儲備液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為5 mg/L的氯雷他定對照品溶液。

精密量取氯雷他定對照品儲備液和鹽酸氨溴索對照品儲備液各1 ml，置10 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成混合對照品溶液。

2.1.1.2供試品溶液 取30 min時的溶出液，微孔濾膜過濾，續濾液作為供試品溶液。

2.1.1.3陰性對照 精密稱取按處方配比的輔料(包括空膠囊)，置100 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液適量，超聲10 min使充分溶解，冷卻至室溫以流動相定容，搖勻，濾過。取續濾液5 ml，置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為陰性對照溶液。

2.1.2色譜條件與系統適應性試驗[1-3]色譜柱為Kromasil C18(50 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀6.3 g，加0.1 mol/L 氫氧化鈉溶液 600 ml溶解，加水至1 000 ml)-乙腈(50∶50)，pH為7.3；波長247 nm，靈敏度為0.01，流速1 ml/min，進樣量20 μl。

在上述色譜條件下分別取陰性對照溶液、混合對照品溶液和供試品溶液進行測定，見圖1，輔料對測定無干擾，主成分與雜質應能完全分離，分離度大于2.0。在考察了流動相比例變化(±5%)、流動相pH值變化(±0.2)、流速相對值變化(±20%)時等色譜條件變化，主峰的拖尾因子不大于2.0，主峰與雜質峰皆達到基線分離，見圖1。

2.1.3線性與范圍 分別精密稱取1、2、3、4、5和6 ml的鹽酸氨溴索和氯雷他定的儲備液，依次各置50 ml的量瓶中混合，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，配制成相當于對照品混合溶液濃度20%、40%、60%、80%、100%和120%的系列對照品溶液。依“2.1.2”項下方法分別進行測定，以濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸分析。鹽酸氨溴索回歸方程：Y=1.4×106X-2.298×104(r=0.999 7)，表明鹽酸氨溴索在6～36 mg/L濃度范圍內線性關系均良好。氯雷他定回歸方程：Y=2.2×106X-9 278.9(r=0.999 9)，表明氯雷他定在1～6 mg/L濃度范圍內線性關系均良好。

2.1.4精密度 取“2.1.1”項下的混合對照品溶液，連續進樣6次，記錄峰面積，結果鹽酸氨溴索RSD為0.32%，氯雷他定RSD為1.60%。

2.1.5回收率 精密量取氯雷他定和鹽酸氨溴索的儲備液3、4和5 ml各3份，置50 ml量瓶中，加入精密量取的5 ml全輔料溶液混合，再加0.1 mol/L鹽酸溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。結果鹽酸氨溴索平均回收率為100.34%，RSD為0.39%；氯雷他定平均回收率為100.53%，RSD為1.51%。表明該方法用于復方氨溴氯雷片中鹽酸氨溴索和氯雷他定的定量，準確可靠，見表1。

表1 鹽酸氨溴索和氯雷他定回收率測定結果

2.1.6溶液的穩定性 將混合對照品溶液配制后依次放置0、1、2、4、6、8、10和24 h取樣，測定峰面積。結果鹽酸氨溴索RSD為0.59%，氯雷他定RSD為1.62%，表明供試品溶液在常溫下放置24 h比較穩定。

2.2溶出度方法的建立[4，5]

2.2.1溶出介質的選擇 分別以水、0.1 mol/L鹽酸、磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)作為溶出介質，取膠囊置沉降籃中，采用槳法，轉速為50 r/min，介質體積為900 ml，進行測定。分別在5、10、15、20、30和45 min取樣，取樣量為10 ml，濾過，取續濾液作為供試液。以氯雷他定濃度為5 μg/ml和鹽酸氨溴索濃度為30 μg/ml的混合作為對照品溶液，依法測定，計算累積溶出百分率(Q)。結果鹽酸氨溴索在三種溶劑中溶出速度均較快，而氯雷他定在水中溶出不完全，其余兩種介質中均能完全溶出，見圖2和圖3。

圖2 鹽酸氨溴索在不同介質中的溶出曲線

圖3 氯雷他定在不同介質中的溶出曲線

2.2.2籃法和槳法的比較 以0.1 mol/L鹽酸為溶出介質，分別采用籃法(轉速為100 r/min)和槳法(轉速為50 r/min)進行試驗。其溶出曲線基本相似，但籃法溶出量的RSD較大，均一性不好，故選擇槳法，見表2和表3。

表2 不同溶出方法和轉速氯雷他定累積溶出百分率

表3 不同溶出方法和轉速

2.2.3均一性試驗 取膠囊6粒，置沉降籃中，以0.1 mol/L鹽酸為溶出介質，照“2.2.1”項下的方法進行試驗。結果表明溶出均一性良好， RSD均<5%，見表4。

表4 同一批樣品累積溶出百分率均一性試驗結果

3 樣品溶出度測定結果

取本品6粒，置沉降籃中，采用槳法，以0.1 mol/L的鹽酸溶液900 ml為溶出介質，轉速為50 r/min，在20 min取樣，取樣量為10 ml，濾過，取續濾液進樣測定峰面積。計算樣品的溶出度。結果三批樣品中氨溴索和氯雷他定的溶出度均>80%，符合規定，且RSD均<5%，見表5。

4 討論

4.1測定波長的選擇 紫外掃描圖顯示，全輔料在197 nm處有最大吸收峰；鹽酸氨溴索在200～400 nm有3個吸收峰，209 nm處吸光度最高，但與輔料的最大吸收波長相近，對含量測定有影響，308 nm處吸收峰較平坦，吸光度小，靈敏度低，亦不適合含量測定；氯雷他定的最大吸收波長處輔料也有吸收。氨溴索和氯雷他定分別在246.5 nm和247 nm有吸收峰，且無輔料的干擾，故選擇247 nm作為檢測波長。

4.2溶出方法的選擇 通過溶出介質的選擇，由于氯雷他定在0.1 mil/L鹽酸中溶出速度適中，可控性較好，且溶出完全，因此確定以0.1 mil/L鹽酸為溶出介質；由于籃法測定時膠囊殼容易黏附在轉籃的網壁上而使溶出的結果差異性較大，故選擇槳法測定。由于槳法的常用轉速為50 r/min，本實驗的溶出曲線顯示溶出速度適中，故未增加轉速的試驗。

1 湯南，張丹，孫文霞，等．HPLC測定鹽酸氨溴索口腔崩解片的含量及有關物質.華西藥學雜志，2005，20(6)：538

2 趙亞萍．HPLC法檢查氯雷他定及其制劑的有關物質．中國藥品標準，2003，4(3):56

3 柏學東，崔志紅，王兆欽．高效液相色譜法測定氯雷他定顆粒劑的含量.中國藥業， 2008，17(9)：27

4 崔飆，楊新建，王雷，等．不同廠家氯雷他定片的溶出度考查．天津藥學，2007，19(5):24

5 王亞敏．淺談溶出度檢查方法的研究．藥物分析雜志， 2007，27(10)：1667