HPLC同時測定米格列醇片有關物質和含量的方法改進研究*

郝光啟，郁樹濤，孫彥余

(魯南制藥集團股份有限公司，臨沂 276006)

米格列醇(C8H17NO5)為去氧野尻霉素衍生物，是一種新型口服α-葡萄糖苷酶抑制劑。如按國家食品藥品監督管理局頒布的質量標準(YBH00592010)對該藥進行檢測，會出現的諸多問題而無法正常檢測[1]。本文通過研究，改變了原流動相組成及pH值，建立了新方法，解決了上述問題。該方法專屬性強、靈敏度高、準確度和重復性好、方法簡便，可同時用于米格列醇片有關物質和含量的定量測定。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent 1100高效液相色譜系統：G1379A脫氣機、G1311A四元泵、G1313A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1315B DAD檢測器、A 10 01化學工作站(美國安捷倫公司)，SHH-100GD藥品強光照射試驗箱(重慶市永生實驗儀器廠)，YB系列真空恒溫干燥箱(天津藥典標準儀器廠)，TTL-10B超純水系統(北京同泰聯科技發展有限公司)，PHS-3C型精密pH計(上海精密科學儀器有限公司)，XS204型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 米格列醇對照品(本公司生產的原料藥，經HPLC面積歸一化法測定純度為99.8%以上)，米格列醇片(本公司生產，批號：081201、081202、081203)。乙腈為色譜純(山東禹王實業有限公司化工分公司)，磷酸二氫銨、三乙胺均為分析純，實驗用水為超純化水。

2 方法與結果

2.1色譜條件及系統適用性 色譜柱：Lichrospher氨丙基硅烷鍵合硅膠色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(江蘇漢邦科技有限公司)；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫銨溶液(三乙胺調pH至7.5)(65∶35)；檢測波長：210 nm；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μl；柱溫：25 ℃；檢測器：二極管陣列檢測器(DAD)。理論塔板數按米格列醇峰計算應不低于1 000。

2.2溶液制備

2.2.1有關物質供試品溶液 取本品細粉適量(含米格列醇約200 mg)，精密稱定，加流動相溶解并稀釋至100 ml，精密量取此液，用流動相稀釋成每1 ml含有600 μg的溶液，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.2有關物質對照溶液 精密量取供試品溶液1 ml，置100 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3含量測定供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細，混合均勻；精密稱取適量(相當于米格列醇約100 mg)，加流動相適量溶解并稀釋成每1 ml中含米格列醇約100 μg，搖勻，濾過。

2.2.4含量測定對照品溶液 取經60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品適量，精密稱定為10.6 mg，置50 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取溶液5 ml置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3專屬性試驗

2.3.1空白輔料干擾試驗 取米格列醇片空白輔料適量(約相當于200 mg的米格列醇處方量)，按有關物質供試品制備法配制溶液，照上述色譜條件依法測定，結果見圖1。由圖可見，空白輔料對米格列醇的測定無干擾。

2.3.2樣品破壞性試驗

2.3.2.1酸破壞 取樣品適量(相當于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液5 ml，100 ℃水浴加熱5 h，冷卻，加堿中和后，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液依法檢查。

2.3.2.2堿破壞 取樣品適量(相當于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5 ml，100 水浴加熱3 h，冷卻，加酸中和后，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液依法檢查。

2.3.2.3熱破壞 取樣品適量(相當于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，于140 ℃恒溫箱中放置5d，冷卻，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液依法檢查。

2.3.2.4氧化破壞 取樣品適量(相當于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加30%過氧化氫溶液0.5 ml，常溫放置1 min，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液依法檢查。

2.3.2.5光照破壞 取樣品適量(相當于米格列醇約15 mg)，置25 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，置于照度為4 500 Lx強光照射試驗箱中照射20 d，濾過，取續濾液依法檢查。

強制降解結果表明：本方法專屬性強，米格列醇與破壞后的輔料峰及降解產物完全分離，說明本色譜條件適用于米格列醇片的檢測。色譜圖見圖1。

1.米格列醇

2.4有關物質檢查 依“2.2.1”和“2.2.2”項下方法分別配制有關物質供試品溶液和對照溶液。精密量取對照溶液20 μl注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%～20%；再準確量取供試品溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液色譜圖中如顯示雜質峰，扣除輔料峰外，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的1/2(0.5%)，各雜質峰峰面積的和，不得大于對照溶液主峰面積(1.0%)。三批樣品(批號081201、081202、081203)最大單個雜質結果分別為：0.08%、0.08%和0.07%，總有關物質分別為：0.60%、0.55%和0.51%，結果均符合規定。

2.5含量測定

2.5.1線性試驗 取“2.2.4”項下對照品儲備液，分別精密量取1.0、3.0、5.0、7.0和9.0 ml，各置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。依法測定，以米格列醇峰面積對其濃度(μg/ml)進行線性回歸，回歸方程為：Y=0.13X-3.13(r=0.999 5)。由此可見：米格列醇濃度在21.2～190.8 μg/ml范圍內線性關系良好。

2.5.2精密度試驗 取“2.2.4”項下對照品溶液，依法連續進樣6次，記錄峰面積，結果米格列醇峰面積的RSD為0.074%(n=6)，說明方法重復性良好。

2.5.3重復性試驗 取一批樣品(批號：081201)，分別依“2.2.3”和“2.2.4”項下方法配制6份供試品溶液和1份對照品溶液，在確定的色譜條件下測定，米格列醇片的平均含量(占標示量)為99.1%，RSD為0.083%(n=6)。

2.5.4溶液穩定性試驗 取“2.2.3”項下含量測定供試品溶液，依法分別于0、1、3、5、8和10 h后進樣分析。結果米格列醇峰面積的RSD為0.13%(n=6)，表明米格列醇溶液在10 h內穩定。

2.5.5回收率試驗 分別精密稱取經60 ℃減壓干燥至恒重的米格列醇對照品16、20和24 mg各3份，各置于100 ml量瓶中，并按處方量比例分別加入空白輔料，加流動相溶解并稀釋至刻度，然后依“2.2.4”項下對照品溶液配制方法制備9份回收率試驗溶液。取“2.2.4”項下對照品溶液，按外標法以峰面積計算依法測定，結果平均回收率為100.1%，RSD為1.07%，見表1。

表1 含量回收率試驗結果(%,n=9)

2.5.6定量限和檢測限試驗 精密稱取米格列醇對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成一系列不同濃度的溶液，依法測定。當信噪比S/N =10時，米格列醇濃度為0.19 μg/ml，米格列醇的定量限為3.80 ng；當信噪比S/N =3時，米格列醇濃度為0.062 μg/ml，米格列醇的檢測限為1.24 ng。

2.5.7含量測定結果 取3批樣品(批號081201、081202、081203)依法測定，結果三批樣品含量(占標示量)分別為99.1%、98.6%和100.3%，均符合規定。

3 討論

依國家藥監局批準的米格列醇片質量標準(YBH00592010)，如前言所述情況，該產品無法正常檢測,而本文建立的方法專屬性強、準確度高、重復性好，可同時用于米格列醇片的有關物質檢查和含量測定，經實驗證實本法亦可作為米格列醇原料藥的有關物質檢查和含量測定的檢測方法。

1 郝光啟，李進啟，葛梅，等.米格列醇片溶出度HPLC檢測方法改進研究.天津藥學,2011,23(1): 16