血清抵抗素及其基因299G/A多態性與腹型肥胖的相關性研究①

楊德玉 李希圣

(1.安徽中醫學院第一附屬醫院急診科 合肥 230031;2.福建醫科大學第二附屬醫院內分泌科 泉州 100088)

Resistin是由Steppan等[1]于2001年首先報道并命名的一種脂肪來源的新激素,被認為可能作為肥胖與IR聯系的紐帶,參與IR的發生。Ma等[2]發現抵抗素基因299G/A多態與肥胖間可能存在相互作用。本研究擬通過檢測福建泉州地區人群血清抵抗素水平、抵抗素基因299G/A位點多態性、胰島素抵抗指數等指標以探討抵抗素、抵抗素基因299G/A位點多態性在腹型肥胖胰島素抵抗中的作用。

1 對象與方法

1.1 對象

腹型肥胖組:依據國際糖尿病聯盟公布的代謝綜合癥工作定義(2005年)及中心性肥胖診斷標準入選的我院體檢對象125例,其中男65例,女60例,年齡22～70歲,平均(45.6±9.8)歲。排除:(1)惡性腫瘤;(2)糖尿病及中間型高血糖;(3)感染性疾病;(4)近期創傷手術(6個月內);(5)心衰;(6)近期口服調脂藥物。對照組:體檢健康者85例,男45例,女40例,年齡15～61歲,平均(35.8±10.7)歲。

1.2 方法

1.2.1 檢測指標 所有受試對象測定空腹血糖(FPG)、膽固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、載脂蛋白a(ApoA)、載脂蛋白b(ApoB)、抵抗素(Resistin)、胰島素(FINS)。

1.2.2 基因多態性檢測 (1)聚合酶鏈反應:由基因組純化試劑盒提取DNA,以軟件DNAStar設計PCR引物:上游5′GGAAGAAGCCATCAATGAGAGG3′,下 游 5′CCTGTTGGTTTGGAGCTA G GTC3′,擴增片段352bp。在25uL反應體系中擴增基因組DNA。PCR循環參數為:初期94℃變性5min,繼之35個循環,每個循環中94℃變性1min,62℃退火1min,72℃延伸2min,最后于72℃延伸15min。(2)酶切:取限制性內切酶AluI 0.5uL(5U)、10×NEB緩沖液2uL、PCR產物14uL、滅菌雙蒸水3.5uL混勻,37℃水浴酶切16h。最后將PCR剩余11uL和20uL酶切液上樣于3.0%瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙錠染色,凝膠成像分析儀下觀察結果,分析基因型。G/G基因型產生71bp、243bp、23bp和15bp片段;G/A基因型產生71bp、243bp、158bp、85bp、23bp和15bp片段;A/A基因型產生71bp、158bp、85bp、23bp和15bp。

表1 檢測結果(±s)

表1 檢測結果(±s)

注:與對照組比較,﹡P＜0.05

組別 TG TC Resistin FPG FINS Homa-IR對照組 0.81±0.26 4.38±0.68 3.048±1.233 5.120±0.375 6.574±4.181 3.048±1.233腹型肥胖組 1.35±0.82 4.79±0.73 (3.761±1.608)﹡ 5.327±0.374 (9.827±4.431)﹡ (3.761±1.608)﹡

表2 腹型肥胖組與對照組抵抗素基因299G/A等位基因頻率及基因型分布的比較

1.3 統計學處理

采用SPSS 13.0軟件包進行統計學處理。所有數據均以(±s)表示,由于胰島素、胰島素抵抗指數均不是正態分布,故先經自然對數轉換后再進行統計分析,在列表中以原值表示;對性別構成的比較采用χ2檢驗;以Hardy-Weinberg平衡檢驗確認研究標本的群體代表性。

2 結果

2.1 檢測結果(表1)

2.2 2組抵抗素基因299G/A等位基因頻率及基因型分布的比較(表2)

2.3 抵抗素與各種影響因素的多元逐步回歸分析

為了解抵抗素與胰島素抵抗、空腹胰島素等因素的具體相關情況,以抵抗素(Y)為應變量,FINS(X1)、Homa-IR(X2)、WC(X3)、性別(X4)、年齡(X5)、身高(X6)、體重(X7)、收縮壓(X8)、舒張壓(X9)、空腹血糖(X10)、總膽固醇(X11)、甘油三酯(X12)、高密度脂蛋白膽固醇(X13)為自變量,按照入選變量的顯著性水準為0.05、剔除變量的顯著性水準為0.01,進行多元逐步回歸分析,得出回歸方程:Y=-2.541+0.302X1+0.196X2+0.026X3(P值分別為0.009、0.005、0.007)。

3 討論

在抵抗素與胰島素抵抗的關系方面,目前的各種研究存在較大的爭議,其核心問題在于抵抗素是否參與了胰島素抵抗的發生。肥胖患者往往有腹部脂肪堆積,隨著體脂的增加,脂肪細胞數量增多,尤其是脂肪細胞肥大,肥大的脂肪細胞可分泌大量脂肪因子,從而激活交感神經系統、腎素血管緊張素系統[3],導致肥胖相關的代謝紊亂。抵抗素可能作為一種重要的細胞因子參與體內胰島素代謝的調節并可能引起IR等多種代謝紊亂,抵抗素在這種網絡中的作用和地位及抵抗素與糖代謝及脂代謝等的關系,已成為肥胖及代謝紊亂一個新的研究熱點[4]。

本研究中,2組之間Resistin存在明顯差異,這提示人血清中的抵抗素可能來源于脂肪組織,其濃度與體脂含量密切相關,多元逐步回歸結果表明,腹型肥胖患者血清抵抗素水平與胰島素抵抗指數呈顯著正相關,說明抵抗素參與腹型肥胖胰島素抵抗的發生。雖然在入選研究對象時排除了糖尿病及中間型高血糖患者,但2組之間FINS和HOMA-IR仍存在明顯差異,這與肥胖患者常伴胰島素抵抗,并以此為中心環節,引起一系列糖、脂代謝紊亂的特征相符。

隨著抵抗素的發現,對人類抵抗素的基因位點與肥胖之間關系的研究也逐漸深入,發現了多個抵抗素的單核苷酸多態性位點。Ma等[2]發現抵抗素基因299G/A多態與肥胖間可能存在相互作用。本研究針對泉州地區人群抵抗素基因299G／A多態性與腹型肥胖的相關性進行探討,結果顯示,抵抗素基因299位點A等位基因頻率在腹型肥胖組與健康對照人群中差異有顯著意義,提示抵抗素基因299G／A多態性與泉州地區人群腹型肥胖發病有相關性,

綜上所述,抵抗素可能與腹型肥胖的胰島素抵抗密切相關,其基因299G/A多態性位點A等位基因可能參與腹型肥胖和IR的發生。

[1]Steppan CM,Bailey ST,Bhat S,et a1.The hormone resistin links obesity to diabetes[J].Nature,2001,409(6818):307～312.

[2]Ma XW,Warram JH,Trischitta V,et a1.Genetic variants at the resistin locus and risk of type 2 diabetes in Caucasians[J].Clin Endocrinol Metab,2002,87(9):4407～44l0.

[3]Segura J,Ruilope LM.Obesity essential hypertension and renninangiotensin system[J].Public Health Nutr,2007,10(10A):1151～1155.

[4]Fonseca-Alaniz MH,Takada J,Alonso-Vale MI,et a1.Adipose tissue as an endocrine organ:from theory to practice[J].J Pediatr,2007,83(5Suppl):192～203.