Cx43和Fas在胃癌組織中的表達

羅海清，官成濃，余忠華，王鎮南，梁亞海

(廣東醫學院附屬醫院，廣東湛江524001)

胃癌的形成和轉移是多因子、多基因共同作用的結果。有研究顯示，多種人類癌細胞都有細胞間隙連接蛋白 43(Cx43)表達的下降［1，2］。Fas 是重要的細胞凋亡調節因子，能在一定程度上反映腫瘤的生物學行為［3］。我們采用免疫組化方法檢測Cx43和Fas在胃癌中的表達情況，探討兩者與胃癌生物學行為的關系。

1 材料與方法

1．1 材料 收集我院2006年1月～2010年12月病理科歸檔的病歷資料完整的70例胃癌組織標本，按全國胃癌協作組病理規范進行病理診斷和分級。在研究中，將腫瘤分成兩個組織學亞型:分化型癌包括乳頭狀腺癌和管狀腺癌，未分化癌包括低分化腺癌、黏液細胞癌和印戒細胞癌。所有患者術前未行化療或放療，同時另取距離癌組織邊緣5 cm非腫瘤的正常組織石蠟標本為對照。

1．2 主要試劑和方法 兔抗人Cx43多克隆抗體和鼠抗人Fas單克隆抗體購自北京中杉金橋生物有限公司，稀釋濃度為1∶50。即用型免疫組化試劑盒購自天津灝洋生物制品有限公司。采用免疫組化SP法，DAB顯色，具體操作按說明書進行。用PBS代替一抗作為陰性對照，采用生物公司提供的陽性切片為陽性對照。

1．3 陽性結果判定 Cx43和Fas分別以胞核和胞質中出現棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞。按半定量積分法判斷兩者表達情況，根據染色強度及陽性細胞所占比例分別記為0～3分。染色強度:未著色為0分，著色淺為1分，中度著色為2分，著色深為3分。陽性細胞百分率:高倍鏡(×400)下隨機選取10個視野，每個視野計數100個細胞。計算其平均陽性百分率。根據平均陽性細胞百分率分為:陽性細胞數≤5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～49%為2分，≥50%為3分。兩項評分相加，0～1分為(-)，2分為(+)，3～4分為(++)，5～6分為(+++)，(+)～(+++)均表示為陽性。

1．4 統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件，各組間差異比較用χ2檢驗，以P≤0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 Cx43和Fas的表達情況 Cx43在胃癌組織中的陽性表達率為44．29%(31/70)，在癌旁正常組織中的陽性表達率為 92．86%(65/70)，χ2=38．314 4，P＜0．01;Fas在胃癌組織中的陽性表達率為40．00%(28/70)，在癌旁正常組織中的陽性表達率為 87．14%(61/70)，χ2=33．588 9，P ＜0．01。

2．2 Cx43、Fas在胃癌組織中的表達與臨床病理因素的關系 見表1。

3 討論

細胞間隙連接通訊在細胞的新陳代謝、內環境穩定、增殖和分化等生理過程中發揮著關鍵的調節作用。間隙連接主要通過縫隙連接蛋白發揮作用。Cx43表達減少或缺失與多種腫瘤的發生、發展及轉移密切相關［4］。Miekus等［5］報道，前列腺上皮表達Cx43蛋白，而進展期分化差的癌細胞Cx43表達明顯降低。Pu等［6］研究發現Cx43表達水平與星形膠質細胞瘤的惡性程度和腫瘤增殖活性呈負相關，認為Cx43在膠質細胞瘤的惡性發展中起關鍵作用。本研究表明Cx43在胃癌腫瘤組織中的表達率低于正常組織，且與胃癌組織學分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移有關。

表1 Cx43、Fas蛋白表達水平與胃癌臨床病理因素的關系［例(%)］

凋亡異常與腫瘤的發生及神經系統退行性病變有重要關系。Fas是近年發現的細胞凋亡信號受體，當與其特異性配體結合后，可以傳導凋亡信號，誘導所在細胞的凋亡［7］。Das等［8］觀察 Fas在 29例宮頸癌和3種宮頸癌細胞系中的表達，發現Fas表達明顯下調。Munakata等在對卵巢癌組織Fas表達的研究中發現，Fas在卵巢癌組織中低表達，而在正常卵巢組織中高表達。本研究表明Fas在胃癌腫瘤組織中的表達率低于正常組織，且表達強度與胃癌的組織學分化程度、浸潤深度、TNM分期、淋巴結轉移有關。

上述結果表明，Cx43和Fas表達與胃癌的發生發展有一定的相關性，胃癌組織中Cx43和Fas表達水平的檢測有助于判斷胃癌惡性程度。

［1］Liang QL，Wang BR，Chen GQ，et al．Clinical significance of vascular endothelial growth factor and connexin43 for predicting pancreatic cancer clinicopathologic parameters［J］．Med Oncol，2010，27(4):1164-1170．

［2］Jinn Y，Inase N．Connexin 43，E-cadherin，beta-catenin and ZO-1 expression，and aberrant methylation of the connexin 43 gene in NSCLC［J］．Anticancer Res，2010，30(6):2271-2278．

［3］Liang QL，Li ZY，Chen GQ，et al．Prognostic value of serum soluble Fas in patients with locally advanced unresectable rectal cancer receiving concurrent chemoradiotherapy［J］．J Zhejiang Univ Sci B，2010，11(12):912-917．

［4］Herrero-González S，Gangoso E，Giaume C，et al．Connexin43 inhibits the oncogenic activity of c-Src in C6 glioma cells［J］．Oncogene，2010，29(42):5712-5723．

［5］Miekus K，Czernik M，Sroka J，et al．Contact stimulation of prostate cancer cell migration:the role of gap junctional coupling and migration stimulated by heterotypic cell-to-cell contacts in determination of the metastatic phenotype of Dunning rat prostate cancer cells［J］．Biol Cell，2005，97(12):893-903．

［6］Pu P，Xia Z，Yu S，et al．Altered expression of Cx43 in astrocytic tumors［J］．Clin Neurol Neurosurg，2004，107(1):49-54．

［7］Boroumand-Noughabi S，Sima HR，Ghaffarzadehgan K，et al．Soluble Fas might serve as a diagnostic tool for gastric adenocarcinoma［J］．BMC Cancer，2010，10:275．

［8］Das H，Koizumi T，Sugimoto T，et al．Quantitation of Fas and Fas ligand gene expression in human ovarian，cervical and endometrial carcinomas using real-time quantitative RT-PCR ［J］．Br J Cancer，2000，82(10):1682-1688．