不同炮制方法對遠志藥效學的比較研究

王光志，陳林，萬德光，劉友平，裴瑾

（成都中醫藥大學藥學院，中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 610075）

遠志為遠志科植物遠志Polygala tenuifolia Willd.或卵葉遠志P.sibirica L.的干燥根，系常用中藥，具有安神益智、祛痰消腫的功效。臨床常用其炮制品。遠志的炮制方法較多，經考證，有炒、甘草煮、姜汁炒、酒蒸、米泔水制、甘草水和黑豆煮、豬膽汁煮、炙、炒炭等［1］，因應用目的不同具體的炮制方法有異。《中國藥典》2010年版（一部）收有生遠志和制遠志［2］。《全國中藥炮制規范》收有“制遠志”、“蜜遠志”及“朱遠志”等［3］。《中藥炮制經驗集成》所收炮制方法較多，有“制遠志”、“姜制”、“炒遠志”、“朱遠志”、“蜜遠志”、“遠志炭”等。萬德光教授把通過農藝措施、采收、加工、炮制、用法等人工干預中藥品質的過程歸納為“中藥品質的多元調控論［4］”。基于炮制是調控中藥品質，保證中醫臨床合理用藥的措施之一，我們前期比較了炒、甘草制、蜜炙、姜制以及酒制五種炮制方法對遠志酸含量的影響［5］。為了進一步研究不同炮制方法對遠志飲片的質量影響，我們對甘草制遠志、蜜遠志與生遠志的藥效學進行了比較研究，現將結果報道如下。

1 材料和方法

1.1 實驗動物、主要試劑和儀器

2月齡體重18～22g昆明種小鼠，由四川醫科院實驗動物研究所提供，動物合格證號：川實管動物質第15號。五羥色胺（5－HT）硫酸肌酐（中國醫藥公司上海化學試劑采購站進口分裝），去甲腎上腺素（NE）（SERVA公司），標準品多巴胺（DA）（Fluka公司），戊巴比妥鈉（中國醫藥集團上海化學試劑公司），必嗽平（廣東汕頭金石制藥總廠）；BP211D電子天平（萬分之一，十萬分之一，德國Sartorius公司）；UV－1100紫外可見分光光度計（上海天美科學儀器有限公司）；CB3201數字描記式小動物活動測定儀（中國川北電子工業公司）；STT－2跳臺儀（中國醫科院藥研所）；960CRT熒光分光光度計；手動玻璃均漿器。

1.2 樣品制備

藥材為遠志的干燥根。生遠志、制遠志及蜜遠志樣品制備方法為課題組篩選的方法［2］，三種樣品均經過水煎，制成含生藥量1g／ml的水煎液，置于4℃冰箱保存。按體重給藥，高劑量組為含生藥量4g／kg，低劑量組為含生藥量1g／kg。

1.3 鎮咳化痰試驗

參照文獻［6］的方法，用小鼠氨水引咳法比較鎮咳作用，用小鼠氣管段酚紅法比較化痰作用。取活動度近似的小鼠80只，隨機分為生遠志高劑量組、生遠志低劑量組、蜜遠志高劑量組、蜜遠志低劑量組、制遠志高劑量組、制遠志低劑量組、對照組、磷酸可待因組等8組，每組10只，雌雄各半。對照組給等量生理鹽水，磷酸可待因劑量為0.02g／kg，必嗽平組劑量為0.035g／kg。

1.4 鎮靜催眠試驗

參照文獻［6］的方法，進行鎮靜催眠試驗。取活動度近似的雄性昆明種小鼠70只，隨機分為生遠志高劑量組、生遠志低劑量組、蜜遠志高劑量組、蜜遠志低劑量組、制遠志高劑量組、制遠志低劑量組、對照組等7組，每組10只，雌雄各半。除對照組外其他組均連續灌胃給藥7d，對照組給等量生理鹽水。末次給藥30min后將各組小鼠分別放數字描記式小動物活動測定儀，適應2min，測定5min內的活動次數。以小鼠自主活動次數為指標，觀察生遠志、蜜遠志以及制遠志對小鼠自發活動的影響。

取健康昆明種小鼠70只，雌雄各半，分組方法同前，每組10只，按相應劑量連續灌胃給藥7d，末次灌胃給藥30min后，腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉40mg／kg。以翻正反射消失1min為入睡潛伏時間。

1.5 小鼠學習記憶試驗

參照文獻［6］的方法，取活動度近似的雌性昆明種小鼠80只。隨機分為8組，每組10只：生遠志高劑量組，生遠志低劑量組，蜜遠志高劑量組，蜜遠志低劑量組，制遠志高劑量組，制遠志低劑量組，腦復康組，對照組。按相應劑量連續灌胃給藥7d，腦復康組給藥1.2g／kg，對照組給等量生理鹽水。末次給藥30min后各組腹腔注射戊巴比妥鈉20mg／kg或30%乙醇0.1mL／kg。10min后將小鼠放入電壓在36V的跳臺儀中，適應2min，通電3min，記錄跳臺次數。24h后進行測試，測試時將小鼠放在跳臺上，同時秒表開始記錄，以3min內跳下次數計為錯誤次數。

1.6 對小鼠腦內單胺類神經遞質含量的影響

參照文獻［6］的方法，小鼠跳臺測試完后，斷頭處死，迅速打開顱腔，取全腦，放于錫箔紙上稱重。將腦組織放入裝有3mL預冷的酸性正丁醇溶液中，除去紙重，求得腦組織凈重。按1∶30比例補充酸性正丁醇量，制備組織勻漿。將組織勻漿倒入帶塞離心管中，振蕩5min，在3 000r／min下離心10min，取適量的正丁醇上清液進行提取和測定。NE于480nm／385nm測定，DA 于375nm／325nm 測定，5－HT于480nm／365nm測定。將所測各管吸光度值（A值）帶入公式，即可得各管5－HT、DA以及NE的含量：含量＝（樣品管A值－空白管A值）／（標準管A值－空白管A值）×0.2×1.5×（1／組織重g）。

1.7 統計學方法

用SPSS11.0統計軟件，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同炮制飲片鎮咳化痰作用比較

蜜遠志較生遠志和制遠志鎮咳、化痰作用增強（P＜0.05）（表1、2）。

表1 生遠志、制遠志、蜜遠志對小鼠鎮咳作用比較Tab.1 Antitussive effect of CRP，GRP and HRP in mice

表2 生遠志、制遠志、蜜遠志對小鼠氣管段酚紅排泌的影響Tab.2 Phenol red secretion effect of CRP，GRP and HRP in mice trachea

2.2 不同炮制飲片鎮靜催眠作用比較

對小鼠的自發活動影響，生遠志高、低劑量組，蜜遠志高、低劑量組，制遠志高、低劑量組均有極顯著性差異；制遠志、蜜遠志與遠志相同劑量組間無顯著性差異，僅有減少的趨勢。對戊巴比妥鈉協同催眠作用的影響，生遠志高、低劑量組，蜜遠志高、低劑量組，制遠志高、低劑量組均有顯著性差異；蜜遠志、制遠志高劑量組與生遠志相同劑量組無顯著性差異，但入睡潛伏時間有縮短的趨勢。結果見表3。

表3 生遠志、制遠志、蜜遠志對小鼠自發活動與入睡潛伏時間的影響Tab.3 Spontaneous activity and sleep latency effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.3 不同炮制飲片對小鼠學習記憶的影響

生遠志高、低劑量組，蜜遠志高、低劑量組，制遠志高、低劑量組間跳臺錯誤次數差異有統計學意義；戊巴比妥鈉處理后的制遠志、蜜遠志與生遠志相同劑量組間錯誤次數差異無統計學意義，而乙醇處理后的制遠志高劑量組與生遠志低劑量組間錯誤次數差異有統計學意義（表4）。

表4 生遠志、蜜遠志對小鼠學習記憶的影響Tab.4 The learning and memory effect of CRP，GRP and HRP in mice

2.4 不同炮制飲片對小鼠腦內單胺類神經遞質含量的影響

結果見表5。戊巴比妥鈉處理后的生遠志、制遠志高劑量組5－HT含量間差異有統計學意義，乙醇處理后的蜜遠志高劑量組、制遠志高劑量組與生遠志低劑量組5－HT含量間差異有統計學意義；戊巴比妥鈉處理后的生遠志高、低劑量組，制遠志低劑量組NE含量間差異有統計學意義；戊巴比妥鈉處理后的生遠志高、低劑量組，制遠志低劑量組NE含量間差異有統計學意義；戊巴比妥鈉處理后的制遠志低劑量組與生遠志低劑量組、腦復康組DA含量間差異有統計學意義（表5）。

表5 不同炮制品對小鼠腦內單胺類神經遞質含量影響Teb.5 The effect of CRP，HRP and GRP on content of brain monoamine neurotransmitters in mice

3 討論

明代陳嘉謨在《本草蒙荃》中提出“凡藥制造，貴在適中，不及則功效難求，太過則氣味反失......酒制升提，姜制發散......”。關于遠志的炮制機制，《雷公炮炙論》中認為：“遠志，凡使，先需去心……去心了，用熟甘草湯浸宿，漉出，曝干用之也”，并認為“若不去心，服之令人悶［7］”。遠志炮制方法自古以來較多，現代研究證明，生遠志對動物的消化道有刺激作用［8，9］，這與其含有的皂苷類成分有關，古人已經意識到通過不同炮制可以減輕其對人體的刺激作用。我們前期比較了不同炮制方法對其遠志酸含量的影響，發現蜜炙、酒制與甘草制均可提高遠志浸出物與遠志酸的含量，而炒法則可降低其浸出物與遠志酸的含量。通過對不同地區炮制規范的調查，現代以制遠志、蜜遠志炮制飲片為多，因此，我們在有效成分比較的基礎上，進一步研究了其藥效學差異。實驗結果表明，蜜遠志能減少小鼠的咳嗽次數，增加其呼吸道酚紅的排泌，而制遠志作用僅有增強趨勢，可能與蜜遠志中炮制輔料蜂蜜味甘滋潤的性能有關。而三種炮制飲片對小鼠的自發活動均有影響，但其差異無統計學意義。遠志甘草制后，能夠減少小鼠跳臺的錯誤次數，且小鼠腦內5－HT、NE及DA含量均升高。

綜上可見，不同炮制方法對化學成分、藥效作用均可產生影響，表明炮制對遠志品質起到了調控作用，這與萬德光教授在中藥品質的多元調控論中“中藥炮制是中藥品質調控措施之一”的觀點吻合。今后，還需進一步加強遠志炮制對其品質調控的機制研究。

［1］萬德光，陳林，劉友平，等.遠志炮制沿革考［J］.中藥材，2005，28（3）：233－235.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：146.

［3］中華人民共和國藥政管理局.全國中藥炮制規范［M］.北京：人民衛生出版社，1988：57－58.

［4］萬德光.中藥品質研究——理論、方法與實踐［M］.上海：上海科學技術出版社，2008：52.

［5］王光志，萬德光.不同炮制方法對遠志質量的影響［J］.中成藥，2009，31（2）：252－255.

［6］陳奇.中藥藥理實驗方法［M］.北京：人民衛生出版社，1994：136，141.

［7］雷敩原著.尚志均輯校.雷公炮炙論［M］.合肥：安徽科學技術出版社，1991：25－26.

［8］吳暉暉，王建，劉賢武，等.遠志及其不同蜜炙品的急性毒性及其對胃腸運動的影響［J］.四川中醫，2006，24（11）：16－18.

［9］鮑薈竹，王建，吳暉暉，等.生遠志及其皂苷與蜜遠志對家兔離體腸平滑肌運動作用機制的實驗研究［J］.時珍國醫國藥，2007，18（2）：29.