文拉法辛臨床療效與γ-氨基丁酸β2受體基因的相關(guān)分析

劉善明 韋錦學(xué) 劉祥 林鄞 王英成 李濤 馬小紅

目前對抑郁癥的治療主要是藥物治療，但10%～30%的患者對抗抑郁治療無效［1］或者部分有效，而療效的確定有時最長需6周［2］。近年來的研究表明，個體的不同遺傳背景是藥物療效在個體間與種族間存在差異的重要原因［3］。γ-氨基丁酸能(Gamma-aminobutyric Acid，GABA)系統(tǒng)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的神經(jīng)遞質(zhì)抑制系統(tǒng)，在抑郁癥研究中一直都備受關(guān)注［4］。抑郁動物模型的研究顯示，GABA能藥物有抗抑郁作用，推測抑郁癥患者存在GABA能的功能不足［5］。近來有研究提示，抑郁癥患者枕葉皮質(zhì)GABA濃度較正常人明顯偏低，而抗抑郁藥治療后GABA濃度明顯上升［6］。因此，GABA能基因的多態(tài)性可能是抗抑郁藥療效差異的候選基因。其中，γ-氨基丁酸 β2受體(Gamma-aminobutyric Acid Receptor Subunit beta-2，GABRB2)基因是GABA系統(tǒng)中的重要亞型基因，在不同的腦部區(qū)域廣泛表達(dá)，既往研究發(fā)現(xiàn)該基因與精神疾病可能相關(guān)［7］。故本研究選取GABRB2作為候選基因，尋找可能與抗抑郁藥療效相關(guān)的遺傳學(xué)因素。

1 對象和方法

1.1 研究對象 來自2006年至2007年四川大學(xué)華西醫(yī)院心理衛(wèi)生中心的住院和門診的抑郁癥患者。入組標(biāo)準(zhǔn):①符合第四版美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊(DSM-IV)中重性抑郁障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn);②17項漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)評分大于18分;③既往未接受過抗抑郁治療或停藥2周以上;④未接受過電抽搐治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①患有嚴(yán)重軀體疾病;②最近1月內(nèi)使用過單胺氧化酶抑制劑(MAOI);③正在接受激素治療;④懷孕婦女。所有的疾病診斷均由高年資的精神科主治醫(yī)師完成，診斷一致性良好(Kappa=0.91)。共有151例符合標(biāo)準(zhǔn)的患者入組，男69例，女82例，均為漢族，年齡18～64(36.5±13.2)歲。在詳細(xì)解釋了研究內(nèi)容后，入組者都簽署了書面知情同意書。本研究獲得四川大學(xué)華西醫(yī)院倫理委員會的審查批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 臨床治療 采用臨床自然入組法，患者入組后給予文拉法辛單一藥物治療，觀察6周。文拉法辛起始劑量為75 mg/d，根據(jù)個體治療反應(yīng)于2周內(nèi)達(dá)到225 mg或患者出現(xiàn)癥狀改善的劑量。不合并使用其它抗抑郁劑和抗精神病藥;可使用苯二氮卓類藥物，但不得連續(xù)使用超過7天;禁用電抽搐治療。

1.2.2 療效評定 采用HAMD分別在入組時和治療2、3、4、5、6周后進(jìn)行癥狀評估。將治療 6周后 HAMD總分≤7界定為臨床治愈。對臨床治療中可能出現(xiàn)的副反應(yīng)采用副反應(yīng)量表(Treatment Emergent Symptom Scale，TESS)評定。評定人為參加研究的高年資精神科醫(yī)生，評定一致性良好(Kappa=0.87)。

1.2.3 基因型檢測 入組后即采集受試者2 mL外周靜脈血，使用酚氯仿法提取DNA。基因型檢測在Illumina BeadStation 550檢測儀上使用Illumina定制芯片完成。選取5號染色體上的GABRB2基因，根據(jù)Hap-Map 計劃所公布的數(shù)據(jù)(http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov)，結(jié)合既往文獻(xiàn)報道和單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms，SNP)在基因中的功能位置，共選取29個標(biāo)簽SNPs(TagSNPs)。

1.2.4 統(tǒng)計分析 運用Plink 1.07軟件進(jìn)行29個獨立位點和單倍型與藥物療效的相關(guān)分析。在獨立位點的相關(guān)分析中，最小等位基因頻率小于0.05和Hardy-Weinberg平衡小于0.001的位點被排除在外。多重檢驗采用Bonferroni Correction方法進(jìn)行校正。運用Haploview 4.2軟件完成單倍型分析，采用窗口移動方式(sliding-window)，對所有連續(xù)的2～6個SNPs組合所構(gòu)成的單倍型與藥物療效的相關(guān)性進(jìn)行分析。檢驗水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 治療6周末結(jié)果完成至少6周治療的151例患者，在治療觀察結(jié)束時，達(dá)到臨床痊愈標(biāo)準(zhǔn)的患者77例(男35例，女42例)，非痊愈患者74例(男34例，女40例)，性別之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.01，P＞0.05)。痊愈組患者的年齡為18～62(35.6±12.9)歲，非痊愈組為18～64(37.5±13.5)歲，兩組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.74，P＞0.05)。治療中151例患者有41例次報告不適反應(yīng)，主要包括:口干10例(6.6%)，惡心嘔吐8例(5.3%)，出汗5例(3.3%)、便秘5例(3.3%)等。

2.2 臨床療效與GABRB2基因獨立候選位點的相關(guān)分析 將29個候選SNP位點在文拉法辛治療達(dá)到臨床痊愈與非痊愈組之間的分布進(jìn)行分析，結(jié)果顯示rs10071312和rs4426954的基因型在兩組之間的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，經(jīng)多重檢驗校正后仍具有統(tǒng)計學(xué)意義(均 P=0.02)，見表 1。其中，rs10071312位點的A等位基因攜帶者的治療痊愈率顯著高于G等位基因攜帶者(OR=4.43)，而rs4426954位點的A等位基因攜帶者的治療痊愈率則顯著低于G等位基因攜帶者(OR=0.44)。

表1 文拉法辛臨床療效與候選SNPs的相關(guān)分析

2.3 臨床療效與GABRB2基因候選位點單倍型的相關(guān)分析 在所有入組樣本的單倍型分析中共發(fā)現(xiàn)了208個單倍型，其中出現(xiàn)頻率≥10%的共103個納入分析。有3種單倍型在痊愈組和非痊愈組之間的分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義，分別是A-A-A-A-G-A(rs7724146-rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954)(P＜0.001，總體樣本頻率36.6%;多重檢驗校正后P=0.01)，A-A-A-G-A(rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954)(P＜0.001，總體樣本頻率38.4%;多重檢驗校正后P=0.02)，A-A-A-G-A-G(rs10051667-rs2964773-rs12153421-rs2962402-rs4426954-rs3816596)(P＜0.001，總體樣本頻率35.9%;多重檢驗校正后P=0.03)。

3 討論

GABA受體系統(tǒng)包括GABAA、GABAB和GABAC受體三種類型。既往研究顯示GABA在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和療效中均具有重要作用，如腦影像學(xué)研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者在電抽搐治療后，其腦內(nèi)GABA受體的結(jié)合能力有明顯的改變［8-9］。本研究所選擇的GABRB2是GABA受體的一個亞單位，有研究顯示雙相抑郁患者和精神分裂癥患者的前額葉皮質(zhì)GABRB2基因表達(dá)都有變化［10］。近年來在中國人群的樣本中，研究者對精神分裂癥和雙相情感障礙患者死后的腦組織分析，發(fā)現(xiàn)患者組GABRB2基因表達(dá)明顯高于正常對照組，并且單核苷酸rs2546620和rs187269位點的基因多態(tài)性與GABRB2基因表達(dá)顯著相關(guān)［11］。在一項對難治性抑郁癥的研究中發(fā)現(xiàn)，GABRB基因的點突變可能是造成臨床治療困難的原因之一［12］。Benes等［13］等報道精神分裂癥和雙相情感障礙患者腦中GABA能神經(jīng)元減少，抗抑郁藥可以逆轉(zhuǎn)這種改變，而GABRB2與抗精神病藥治療所需劑量有關(guān)，提示GABRB2可能與精神疾病的癥狀嚴(yán)重度和藥物療效均相關(guān)。在本研究的獨立位點分析中，結(jié)果表明rs10071312和 rs4426954與文拉法辛的療效相關(guān)，而單倍型分析則納入了更多的可能相關(guān)位點。針對精神疾病這種復(fù)雜性疾病的遺傳學(xué)研究，單倍型分析可增加檢測效能，有利于發(fā)現(xiàn)與疾病或治療相關(guān)的微效基因。結(jié)合前述其他研究的結(jié)果，提示GABRB2可能是精神疾病發(fā)病機(jī)制和療效的一個重要易感基因，也許在復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)中發(fā)揮一些基本功能的作用，影響精神疾病的某些共同生物機(jī)制，而非只在某一種疾病中起作用。

綜上所述，本研究顯示GABRB2基因與抗抑郁藥療效差異存在相關(guān)性，支持既往研究顯示的GABA在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和療效中可能均具有重要作用的結(jié)果，但本研究也具有一定的局限性。首先，為了盡可能增加樣本量，研究采用臨床自然入組觀察法，最終納入研究分析的都是完成了至少6周觀察治療的病例，缺少對失訪患者的分析。依從性差和藥物耐受性不好是失訪的重要原因之一，以后研究有必要增加這部分患者的基因型和臨床資料。其次，本研究所選擇的可能候選基因都是標(biāo)簽SNP，因此盡管發(fā)現(xiàn)rs10071312和rs4426954與文拉法辛的療效相關(guān)，但也可能是其它與這兩個位點緊密連鎖的位點才是與治療相關(guān)的真實位點。因此本研究提示對GABA在精神疾病中的作用有必要進(jìn)行深入研究。

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