臨床輸注條件下核黃素磷酸鈉的光穩定性研究

喬麗曼，黃晨，張慧，湯塵塵

(溫州醫學院附屬第二醫院藥劑科，325027)

核黃素磷酸鈉為新型水溶性維生素注射用滅菌粉末，其化學名稱為核黃素5＇-(二氫磷酸酯)單鈉鹽二水合物。臨床主要用于治療各種維生素B2缺乏所致的口角炎、脂溢性皮炎、舌炎、神經病變、貧血等。國內外許多研究表明，核黃素及其衍生物還有利尿、防癌、改善心臟功能等作用［1］，并且在預防貧血、白內障、偏頭痛等方面有特殊作用［2］。

核黃素磷酸鈉結構中的異咯嗪環穩定性較差，遇光極易降解［3］。有文獻按制劑的臨床研究原則選擇在高壓汞燈(色溫4 100 K，125 W)、紫外線高壓汞燈(色溫＞5 000 K，125 W)等的強光照條件下的加速實驗進行光穩定性研究［4］，而針對核黃素磷酸鈉在臨床輸注條件下的穩定性考察，筆者尚未見研究報道。筆者在本實驗中模擬臨床輸注條件，考察套避光袋和非避光輸液兩種情況下注射用核黃素磷酸鈉的穩定性，為臨床選用更穩定的輸液提供實驗支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent technologies 1200 series)，G1314A紫外檢測器，色譜柱(十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱)，PHS-3C型精密 PH計，FA1004N電子天平。

1.2 試藥 核黃素磷酸鈉原料藥(山西振東泰盛制藥有限公司，純度:98.7%，批號:0912071)，注射用核黃素磷酸鈉(山西振東泰盛制藥有限公司，規格:每支10 mg，批號:0911241)，10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液(上海百特醫療有限公司，袋裝，規格:250 mL)，甲醇(天津四友精細化學品有限公司一級色譜純，批號:302086-07550)，磷酸二氫鉀(汕頭金沙化工廠，分析純，批號:001201)，水(由本院制劑室提供，純化水)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性實驗 色譜柱(十八烷基硅烷鍵和硅膠色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm);檢測器:紫外檢測器;流動相:甲醇-0.054 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(15∶85);檢測波長:267 nm;流速:2.0 mL·min-1;進樣量:20 μL;柱溫:室溫;按《中華人民共和國藥典》2005年版(5)附錄進行系統適應性實驗，色譜柱理論板數為8 000，與雜質峰分離度R=6.14，且峰形尖銳，無雜質峰干擾。摸索實驗時，將流速調整為1.0 mL·min-1，供試液濃度取擬做標準曲線的上限濃度100 μg·mL-1(《中華人民共和國藥典》2005年版規定濃度的50%)，所得圖譜分別于21，25，33，46，53 min出峰，各峰依次為 3＇，5，-核黃素二磷酸酯;4＇，5，-核黃素二磷酸酯;3＇-核黃素磷酸鈉;4＇-核黃素磷酸鈉;核黃素磷酸鈉。因3＇，4＇-核黃素二磷酸酯濃度過低，無法從圖中積分看到。

開始實驗時，考慮到保留時間不宜過長，于是將流速調為2.0 mL·min-1，供試液濃度取擬做標準曲線的中間濃度40 μg·mL-1。此時與0.9%氯化鈉注射液配伍的圖譜于21，29，34 min出峰，而與10%葡萄糖注射液配伍的圖譜于22，30，35 min出峰，各峰依次為3，-核黃素磷酸鈉;4，-核黃素磷酸鈉;核黃素磷酸鈉。

2.2 線性關系考察 精密稱取干燥至恒重的核黃素磷酸鈉20 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為200 μg·mL-1的儲備液，避光保存。分別精密量取上述儲備液2.5，5.0，10.0，20.0，25.0 mL 加至 50 mL 棕色容量瓶中，加流動相稀釋，定容，使濃度為 10，20，40，80，100 μg·mL-1。按“2.1”項色譜條件，分別精密量取核黃素磷酸鈉對照品溶液20 μL，連續進樣3次，記錄峰面積，取其平均值。以核黃素磷酸鈉的濃度為橫坐標(X)，對應峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，其線性方程為Y=28.888X+4.211 7，R2=0.999 9。結果表明，核黃素磷酸鈉在10～100 μg·mL-1濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

2.3 精密度實驗 精密量取避光保存的核黃素磷酸鈉4 mg，加流動相稀釋成40 μg·mL-1溶液，連續 3 d，每天連續進樣5次，每次20 μL，測定峰面積，根據峰面積求得日內精密度RSD分別為1.24%，1.62%和0.43%(n=5)，日間精密度RSD為0.35%(n=3)。根據高效液相色譜法要求，精密度應該不大于2%，實驗結果符合要求，說明本法精密度良好。

2.4 臨床輸注條件下光穩定性實驗

2.4.1 與0.9%氯化鈉溶液配伍的光穩定性實驗模擬臨床配制與輸注條件，取核黃素磷酸鈉粉針1支(每支10 mg)，0.9%氯化鈉溶液1袋(250 mL)。用注射器抽取適量0.9%氯化鈉溶液注入并轉移至0.9%氯化鈉溶液袋中，搖勻，得供試液A。模擬患者床旁及走廊的袋高度，將供試液A掛于實驗臺上，避免陽光直射。以輸液配好即時起(0 h)的含量為100%計算，分別在0，1，2，4，8，24 h 取樣，且盡量避光操作，進樣20 μL，計算各時間點相當于0 h峰面積的百分含量;同時使用精密pH計測量溶液pH值。連續3 d重復實驗，將3 d同一處理狀態下3個數據的平均值作為實驗結果進行討論。配伍后各時間點的含量變化及百分含量變化結果，如表1所示。配伍4 h后的圖譜僅在31 min出可積分看到的峰，表明分解產物對本次測定無干擾。

同法操作，另配一袋相同的供試液B，套避光袋，將B溶液掛于實驗臺平行位置。同樣連續3 d重復實驗，將3 d同一處理狀態下3個數據的平均值作為實驗結果進行討論。配伍后各時間點的含量變化及百分含量變化結果，如表2所示。

2.4.3 與10%葡萄糖溶液配伍的光穩定性實驗 模擬臨床配制與輸注條件，取核黃素磷酸鈉粉針1支(每支10 mg)，10%葡萄糖溶液1袋(250 mL)。用注射器抽取適量10%葡萄糖溶液注入并轉移至10%葡萄糖溶液袋中，搖勻，得供試液C。模擬患者床旁及走廊的袋高度，將供試液C掛于實驗臺上，避免陽光直射。以輸液配好即時起(0 h)的含量為100.00%計算，分別在0，1，2，4，8，24 h 取樣，且盡量避光操作，進樣 20 μL，計算各時間點相當于0 h峰面積的百分含量;同時使用精密pH計測量溶液pH值，連續3 d重復實驗，將這3 d同一處理狀態下3個數據的平均值作為實驗結果進行討論。配伍后各時間點的含量變化及百分含量變化結果，如表3所示。配伍4 h后圖譜僅在32 min出可積分看到的峰，表明分解產物對本次測定無干擾。

表1 24 h內剩余藥物相對0時含量百分數(供試液A)

表2 24 h內剩余藥物相對0時含量百分數(供試液B)

同法操作，另配一袋相同的供試液D，套避光袋，將D溶液掛于實驗臺平行位置。同樣連續3 d重復實驗，將3 d同一處理狀態下3個數據的平均值作為實驗結果進行討論。配伍后各時間點的含量變化及百分含量變化結果，如表4所示。

表3 24 h內剩余藥物相對0時含量百分數(供試液C)

表4 24 h內剩余藥物相對0時含量百分數(供試液D)

本實驗結果表明，避光與非避光條件下，核黃素磷酸鈉配伍液的pH均隨著時間的推移而減小。供試液B和D的實驗數據表明，核黃素磷酸鈉配伍液在避光條件下，24 h內穩定;而供試液A和C的實驗數據表明，核黃素磷酸鈉配伍液在非避光條件下，2 h內降解程度＜5%，超過2 h則降解程度增大，因此建議臨床除非能保證輸液配好后2 h內滴注完成，否則應套上避光袋滴注。

目前大部分病區所用核黃素磷酸鈉注射液是在靜脈藥物配置中心調配，藥物從配制好到運往病區給患者靜脈滴注的時間間隔一般超過2 h，所以建議藥物化好后盡量避光保存，并且在情況允許范圍內，病區護士盡可能的為患者先輸注核黃素磷酸鈉注射液。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇 根據2005年版《中華人民共和國藥典》(二部)的色譜條件，并參考文獻［6-10］，調節流速為1 mL·min-1，通過實驗驗證，發現保留時間為65 min，保留時間太長，不利于實驗的進行。考慮到色譜柱壓力不可以太大，并參照《美國藥典》［11］和《英國藥典》［12］，調整流速為 2 mL·min-1，此時核黃素磷酸鈉的保留時間約36 min，柱壓約為280 bar，保證實驗順利進行。

3.2 流動相過濾 在進行前期實驗時，流動相沒有過濾，導致實驗多次后，柱壓不斷上升，經過排除各項原因后，最終發現，過濾器中溶劑出口過濾芯變黑，證明其被嚴重污染，所以，流動相配制后，一定要過濾。

3.3 配伍液顏色的變化 避光條件下，核黃素磷酸鈉配伍液的顏色無肉眼可見變化;而非避光條件下，核黃素磷酸鈉配伍液隨著放置時間的延長，顏色逐漸變淺，由黃色轉變為淡黃色。

3.4 維生素C的保護作用 有文獻報道，維生素C對核黃素有一定保護作用，可使其降解速度減緩，而目前臨床上相當一部分患者在用核黃素磷酸鈉的同時也有補充維生素C，這樣有利于更有效地利用核黃素磷酸鈉［13］。

［1］ 王林靜.核黃素與健康［J］.廣東藥學院學報，2000，16(3):223-225，228.

［2］ ［No authors listed］Riboflavin［J］.Monograph Altern Med Rev，2008，13(4):334-340.

［3］ 劉志強，沈向忠，宗儉.高效液相色譜法測定核黃素制劑含量［J］.現代應用藥學，1994，16(8):38-39.

［4］ 饒桂香，達明，何靜.維生素B2對光的穩定性研究［J］.華西藥學雜志，1994，9(3):172-175.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:化學工業出版社，2005:193-197.

［6］ 鄧潔雄.HPLC測定核黃素磷酸鈉中核黃素的含量［J］.廣東藥學院學報，2006，22(1):53-54.

［7］ 馮改利，蒙躍龍，李小安，等.HPLC法測定復方鋅鐵鈣顆粒中維生素 B2的含量［J］.西北藥學雜志，2006，21(5):776-777.

［8］ 李紹波，喬秀明，楊紅.1嬰幼兒配方食品和乳粉中維生素 B2的測定［J］.中國測試技術，2006，32(3):128-131.

［9］ 楊翠琳，鄧曉莉，詹嬌榕.燈盞花素與4種輸液配伍的穩定性探討［J］.海峽藥學，2008，20(6):31-32.

［10］ 高崢，劉蕾.病毒唑與臨床常用的五種抗菌素在配伍輸液中的穩定性探討［J］.新醫學導刊，2008，7(3):66-67.

［11］ United States Pharmacopeial Convention.USP 27 ［S］.USA:Board of Trustees，2000:1646.

［12］ British Pharmacopoeia Commission.Bp 2003 ［S］UK:HMSO，2003:1623.

［13］ 呂小云.核黃素的光降解及維生素C對核黃素的保護效應［J］.青海醫學院學報，2007，28(3):145-153.