反相高效液相色譜法測定可舒膠囊中2種成分含量

趙維娟，許茜，陳艷，許景峰

(北京軍區(qū)總醫(yī)院藥理科，100700)

可舒膠囊是由葛根、陳皮、藿香、白術(shù)等中藥制成的復(fù)方制劑，具有護(hù)肝、解酒之功效［1］。葛根是本方中的君藥，陳皮為臣藥，在質(zhì)量研究中對其指標(biāo)成分葛根素和橙皮苷進(jìn)行定量分析，筆者采用高效液相色譜法檢測制劑中葛根和陳皮的有效成分，其方法快速簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP-1100型高效液相色譜儀(G1312A型-二元泵、DVD檢測器、Agilent-1100自動進(jìn)樣器，美國惠普公司)，Agilent-1100化學(xué)工作站(美國惠普公司)，BP-211D分析天平(瑞士賽多利斯)。

1.2 試藥 可舒膠囊(規(guī)格:每粒 0.5 g，批號:070320，070322，070326)、陰性對照樣品(按工藝分別制備缺少葛根和陳皮的制劑)均由北京軍區(qū)總醫(yī)院提供，葛根素(批號:110752-200511)、橙皮苷對照品(批號:110721-200512)均由中國藥品生物制品檢定所提供，甲醇為色譜純，水為重蒸純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果［2］

2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:甲醇-水(40∶60);流速1.0 mL·min-1;檢測波長250 nm和283 nm，參比波長400 nm;數(shù)據(jù)提取:葛根素250 nm，橙皮苷283 nm，理論板數(shù)均＞3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取葛根素和橙皮苷對照品各10 mg，分別置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成含量為 100 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。精密量取一定量儲備液，用甲醇制成含葛根素和橙皮苷各25 μg·mL-1的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品4粒，除去膠囊外殼，混勻，精密稱取該膠囊內(nèi)容物0.6 g，置錐形具塞燒瓶中，加甲醇50 mL，振搖混合，放置2 h。超聲提取30 min，靜置，精密吸取上清液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，測定前過孔徑0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 分別稱取缺少葛根和缺少陳皮的陰性對照制劑(依照工藝制備而成的陰性對照制劑)粉末各0.6 g，按“2.2.2”項方法制成缺葛根和陳皮的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察 分別取混合對照品溶液、供試品溶液及各陰性樣品溶液，依法測定。結(jié)果表明，陰性對照樣品色譜在葛根素和陳皮苷相應(yīng)保留時間位置上沒有干擾峰;葛根素和橙皮苷的保留時間約為4.4 min和8.6 min。結(jié)果見圖1。

圖1 3種溶液的HPLC圖譜A.空白樣品;B.對照品;C.樣品;1.葛根素;2.橙皮苷

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取一定量上述葛根素和橙皮苷標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇制成葛根素和橙皮苷含量各 5，10，25，50，100 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，取樣10 μL，注入高效液相色譜儀，測定并記錄峰面積。

以峰面積為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:葛根素Y=4.088 6X-93.933，r=0.999 9;橙皮苷 Y=1.690 6X+1.105，r=0.999 9。結(jié)果表明，葛根素和橙皮苷進(jìn)樣量在50～1 000 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 穩(wěn)定性實驗 同一樣品供試液，分別在0，2，4，6，8 h進(jìn)樣10 μL，測定并記錄峰面積。結(jié)果表明，供試液含量在8 h內(nèi)穩(wěn)定性好，葛根素RSD為1.02%，橙皮苷RSD為1.31%。

2.6 精密度實驗 吸取上述對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計算葛根素和橙皮苷的RSD分別為0.50%和0.29%。

2.7 重復(fù)性實驗 精密稱取同一批號制劑粉末0.6 g，共6份，按供試品溶液的制備方法依法操作，進(jìn)樣10 μL，分別測定，本品葛根素和橙皮苷的RSD分別為1.93%和1.83%。結(jié)果表明，提取方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的膠囊(批號:070322，葛根素含量 22.54 mg·g-1、橙皮苷16.16 mg·g-1)內(nèi)容物0.25 g，分別加入葛根素對照品5 mg、橙皮苷對照品4 mg，按照供試品溶液的制備方法依法操作。進(jìn)樣10 μL，測定各樣品中葛根素、橙皮苷的含量。結(jié)果見表1。葛根素平均回收率100.43%，RSD=1.73%;橙皮苷平均回收率99.90%，RSD=1.61%。

表1 葛根素加樣回收率實驗結(jié)果 n=6

2.9 樣品的含量測定 取不同批號的制劑樣品，按照“2.2.2”項方法制成供試品溶液，依法操作，進(jìn)樣10 μL測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算樣品中葛根素和橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中葛根素和橙皮苷含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 指標(biāo)成分篩選 可舒膠囊為中藥復(fù)方制劑，葛根是本方君藥，主要成分為葛根素、大豆苷和大豆苷元;陳皮為本方臣藥，主要活性成分為橙皮苷。經(jīng)考察在本處方中葛根素和橙皮苷的含量較高且性能穩(wěn)定，采用高效液相色譜法測定樣品含量結(jié)果準(zhǔn)確，易于控制本品的內(nèi)在質(zhì)量［3］。

3.2 色譜條件選擇 依據(jù)葛根素和橙皮苷甲醇溶液分別在250和283 nm波長處有紫外吸收的特性，確定檢測波長，由于實驗樣本為多組分的中藥提取物，測定時各組分之間干擾嚴(yán)重，為了使指標(biāo)成分與其他組分能達(dá)到較好分離，在篩選流動相配比的同時改變檢測波長以選擇最佳檢測和分離條件。經(jīng)考察確定以甲醇-水(40∶60)為流動相，采用250和283 nm同時檢測，樣品中葛根素和橙皮苷與其他組分均能達(dá)到較好分離;葛根素在250 nm、橙皮苷在283 nm分別提取數(shù)據(jù)，檢測快速、準(zhǔn)確，方法重現(xiàn)性好。

3.3 樣品提取 本品藥材是以含水乙醇提取經(jīng)干法制粒形成的中藥復(fù)方制劑。通過對不同溶劑和提取條件篩選考察發(fā)現(xiàn)，樣品采用一定體積的甲醇1次提取完成，能最大限度去除雜質(zhì)并達(dá)到純化樣品的目的，減少了組分間的相互干擾，方法操作簡便，指標(biāo)成分提取完全。

［1］ 王金萍，曾明，徐娟.可舒膠囊對小鼠酒精肝損傷的影響［J］.中國實驗方劑學(xué)，2004，10(6):64-65.

［2］ 吳曉輝，阮金蘭，蔡亞玲.反相高效液相色譜法測定還少膠囊中五味子甲素的含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，26(4):424-425.

［3］ 中國藥科大學(xué)，中國醫(yī)藥科技出版社.中國中藥辭海［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，1997:699.