反相高效液相色譜法測定可舒膠囊中2種成分含量

趙維娟，許茜，陳艷，許景峰

(北京軍區總醫院藥理科，100700)

可舒膠囊是由葛根、陳皮、藿香、白術等中藥制成的復方制劑，具有護肝、解酒之功效［1］。葛根是本方中的君藥，陳皮為臣藥，在質量研究中對其指標成分葛根素和橙皮苷進行定量分析，筆者采用高效液相色譜法檢測制劑中葛根和陳皮的有效成分，其方法快速簡便，結果準確、專屬性強，可作為本品的質量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HP-1100型高效液相色譜儀(G1312A型-二元泵、DVD檢測器、Agilent-1100自動進樣器，美國惠普公司)，Agilent-1100化學工作站(美國惠普公司)，BP-211D分析天平(瑞士賽多利斯)。

1.2 試藥 可舒膠囊(規格:每粒 0.5 g，批號:070320，070322，070326)、陰性對照樣品(按工藝分別制備缺少葛根和陳皮的制劑)均由北京軍區總醫院提供，葛根素(批號:110752-200511)、橙皮苷對照品(批號:110721-200512)均由中國藥品生物制品檢定所提供，甲醇為色譜純，水為重蒸純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果［2］

2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:甲醇-水(40∶60);流速1.0 mL·min-1;檢測波長250 nm和283 nm，參比波長400 nm;數據提取:葛根素250 nm，橙皮苷283 nm，理論板數均＞3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取葛根素和橙皮苷對照品各10 mg，分別置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，制成含量為 100 μg·mL-1的標準儲備溶液。精密量取一定量儲備液，用甲醇制成含葛根素和橙皮苷各25 μg·mL-1的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品4粒，除去膠囊外殼，混勻，精密稱取該膠囊內容物0.6 g，置錐形具塞燒瓶中，加甲醇50 mL，振搖混合，放置2 h。超聲提取30 min，靜置，精密吸取上清液1 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，測定前過孔徑0.45 μm微孔濾膜，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液 分別稱取缺少葛根和缺少陳皮的陰性對照制劑(依照工藝制備而成的陰性對照制劑)粉末各0.6 g，按“2.2.2”項方法制成缺葛根和陳皮的陰性樣品溶液。

2.3 專屬性考察 分別取混合對照品溶液、供試品溶液及各陰性樣品溶液，依法測定。結果表明，陰性對照樣品色譜在葛根素和陳皮苷相應保留時間位置上沒有干擾峰;葛根素和橙皮苷的保留時間約為4.4 min和8.6 min。結果見圖1。

圖1 3種溶液的HPLC圖譜A.空白樣品;B.對照品;C.樣品;1.葛根素;2.橙皮苷

2.4 線性關系考察 精密吸取一定量上述葛根素和橙皮苷標準儲備液，用甲醇制成葛根素和橙皮苷含量各 5，10，25，50，100 μg·mL-1的混合標準對照品溶液，取樣10 μL，注入高效液相色譜儀，測定并記錄峰面積。

以峰面積為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程:葛根素Y=4.088 6X-93.933，r=0.999 9;橙皮苷 Y=1.690 6X+1.105，r=0.999 9。結果表明，葛根素和橙皮苷進樣量在50～1 000 ng范圍內線性關系良好。

2.5 穩定性實驗 同一樣品供試液，分別在0，2，4，6，8 h進樣10 μL，測定并記錄峰面積。結果表明，供試液含量在8 h內穩定性好，葛根素RSD為1.02%，橙皮苷RSD為1.31%。

2.6 精密度實驗 吸取上述對照品溶液，重復進樣5次，記錄峰面積，計算葛根素和橙皮苷的RSD分別為0.50%和0.29%。

2.7 重復性實驗 精密稱取同一批號制劑粉末0.6 g，共6份，按供試品溶液的制備方法依法操作，進樣10 μL，分別測定，本品葛根素和橙皮苷的RSD分別為1.93%和1.83%。結果表明，提取方法重復性良好。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的膠囊(批號:070322，葛根素含量 22.54 mg·g-1、橙皮苷16.16 mg·g-1)內容物0.25 g，分別加入葛根素對照品5 mg、橙皮苷對照品4 mg，按照供試品溶液的制備方法依法操作。進樣10 μL，測定各樣品中葛根素、橙皮苷的含量。結果見表1。葛根素平均回收率100.43%，RSD=1.73%;橙皮苷平均回收率99.90%，RSD=1.61%。

表1 葛根素加樣回收率實驗結果 n=6

2.9 樣品的含量測定 取不同批號的制劑樣品，按照“2.2.2”項方法制成供試品溶液，依法操作，進樣10 μL測定，以標準曲線法計算樣品中葛根素和橙皮苷的含量，結果見表2。

表2 樣品中葛根素和橙皮苷含量測定結果

3 討論

3.1 指標成分篩選 可舒膠囊為中藥復方制劑，葛根是本方君藥，主要成分為葛根素、大豆苷和大豆苷元;陳皮為本方臣藥，主要活性成分為橙皮苷。經考察在本處方中葛根素和橙皮苷的含量較高且性能穩定，采用高效液相色譜法測定樣品含量結果準確，易于控制本品的內在質量［3］。

3.2 色譜條件選擇 依據葛根素和橙皮苷甲醇溶液分別在250和283 nm波長處有紫外吸收的特性，確定檢測波長，由于實驗樣本為多組分的中藥提取物，測定時各組分之間干擾嚴重，為了使指標成分與其他組分能達到較好分離，在篩選流動相配比的同時改變檢測波長以選擇最佳檢測和分離條件。經考察確定以甲醇-水(40∶60)為流動相，采用250和283 nm同時檢測，樣品中葛根素和橙皮苷與其他組分均能達到較好分離;葛根素在250 nm、橙皮苷在283 nm分別提取數據，檢測快速、準確，方法重現性好。

3.3 樣品提取 本品藥材是以含水乙醇提取經干法制粒形成的中藥復方制劑。通過對不同溶劑和提取條件篩選考察發現，樣品采用一定體積的甲醇1次提取完成，能最大限度去除雜質并達到純化樣品的目的，減少了組分間的相互干擾，方法操作簡便，指標成分提取完全。

［1］ 王金萍，曾明，徐娟.可舒膠囊對小鼠酒精肝損傷的影響［J］.中國實驗方劑學，2004，10(6):64-65.

［2］ 吳曉輝，阮金蘭，蔡亞玲.反相高效液相色譜法測定還少膠囊中五味子甲素的含量［J］.醫藥導報，2007，26(4):424-425.

［3］ 中國藥科大學，中國醫藥科技出版社.中國中藥辭海［M］.北京:中國醫藥科技出版社，1997:699.