嬰兒保肺寧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

張麗萍，李志梅

(浙江省溫州市藥品檢驗(yàn)所，325028)

嬰兒保肺寧收載于《部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第八冊(cè)，該藥具有清肺化痰、止咳降逆的功效。用于肺熱咳嗽、喘滿痰盛、嘔吐身熱。處方由川貝母160 g，橘紅120 g，姜半夏80 g，赭石60 g，桔梗、百部、紫蘇梗、紫蘇子(炒)各50 g，天竺黃、朱砂、冰片各40 g，硼砂、石膏、滑石各30 g組成［1］。現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)僅限于散劑的常規(guī)檢查項(xiàng)目，專屬性不強(qiáng)，難以控制該藥品質(zhì)量。為提高該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平，確保療效，參照有關(guān)文獻(xiàn)［2］，筆者對(duì)川貝母、橘紅及桔梗進(jìn)行了薄層鑒別;采用高效液相色譜法對(duì)處方中橘紅中的主要有效成分橙皮苷進(jìn)行了含量測(cè)定，為有效控制該藥品的質(zhì)量提供了可靠的依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(具二極管陣列檢測(cè)器)，METTLE XS205DU百萬(wàn)分之一天平。橙皮苷對(duì)照品(批號(hào):110721-200613)、貝母素乙對(duì)照品(批號(hào):110751-200303)、桔梗對(duì)照藥材(批號(hào):121028-200608)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。嬰兒保肺寧(按處方及制法自制樣品3批，處方中藥材均購(gòu)自溫州醫(yī)藥商業(yè)集團(tuán)，經(jīng)我所中藥室鑒定來(lái)源符合規(guī)定。制法:以上14味，除朱砂水飛或粉碎成極細(xì)粉，冰片研成細(xì)粉外，其余川貝母等12味粉碎成細(xì)粉，與上述朱砂、冰片等粉末配研，過(guò)篩，混勻，即得)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 川貝母的鑒別 取本品5 g，加濃氨試液10 mL，密塞，浸泡 1 h，加二氯甲烷 40 mL，超聲處理1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺川貝母的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。取貝母素乙對(duì)照品加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液。作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μL，對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液-水(18∶2∶1∶0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同的橙紅色的斑點(diǎn)。而陰性樣品色譜相同位置上，未顯相同斑點(diǎn)。

2.1.2 桔梗的鑒別 取本品3 g，加7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合液20 mL，加熱回流3 h，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加水30 mL洗滌，棄去洗液，三氯甲烷液用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺桔梗的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。另取桔梗對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚(1∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。而陰性樣品色譜相同位置上，未顯相同斑點(diǎn)。

2.1.3 橘紅的鑒別 取本品粉末2 g，加甲醇10 mL，加熱回流20 min，濾過(guò)，取濾液5 mL，濃縮至 1 mL，作為供試品溶液。另取缺橘紅的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照液。另取橙皮苷對(duì)照品加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅥB)實(shí)驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(15∶3∶2)為展開(kāi)劑，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(波長(zhǎng)365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的淺黃色的熒光斑點(diǎn)，而陰性樣品色譜相同位置上未顯相同斑點(diǎn)。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇-醋酸-水(35∶2∶63)為流動(dòng)相，流速1 mL·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm，柱溫:30℃。進(jìn)樣量:5 μL。按處方藥味的比例，自配不含橘紅的群藥，依“2.2.3”項(xiàng)方法制備缺橘紅陰性樣品溶液。上述條件下，供試品溶液中橙皮苷色譜峰與其他峰分離良好，峰形對(duì)稱，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h的橙皮苷適量，精密稱定，用甲醇溶解并配制成濃度為40 μg·m L-1的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取混勻的樣品約0.4 g，精密稱定，精密加甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，回流提取1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液用孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

圖1 嬰兒保肺寧中橙皮苷的HPLC圖譜A.陰性樣品;B.樣品;C.對(duì)照品;1.橙皮苷

2.2.4 線性關(guān)系考察 取濃度為41.05 μg·m L-1對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 1，2，5，8，10 μL，記錄色譜峰的面積。以橙皮苷進(jìn)樣量(X，μg)為橫座標(biāo)，對(duì)照品峰面積(Y)為縱座標(biāo)，得到橙皮苷的回歸方程為:Y=992.7X+3.483 9(r=0.999 5)，表明橙皮苷在0.041 05～0.410 5 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 吸取同一對(duì)照品溶液各5 μL，分別連續(xù)6次進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，對(duì)照品溶液品溶液橙皮苷峰面積RSD為0.97%。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液放置0，1，2，3，6 h后進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，橙皮苷RSD為1.78%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫下放置6 h穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取6份同一批次嬰兒保肺寧各約0.4 g，按供試品溶液制備方法操作，測(cè)定，測(cè)得橙皮苷含量，計(jì)算RSD，橙皮苷RSD為0.96%，表明此方法

重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取2.64 mg·g-1樣品6份，每份約0.2 g，精密稱定后，分別精密加入橙皮苷對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液的制備方法制備樣品溶液。按上述色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)橙皮苷含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。平均回收率97.55%，RSD=1.51%。

表1 嬰兒保肺寧中橙皮苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 樣品含量測(cè)定 取樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算橙皮苷的含量，結(jié)果含量分別為2.51，2.64，2.76 mg·g-1。按嬰兒保肺寧處方中橘紅量計(jì)算，1 g含橙皮苷應(yīng)不得少于2.19 mg，結(jié)果已達(dá)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

筆者在本實(shí)驗(yàn)中對(duì)含量測(cè)定項(xiàng)中流動(dòng)相曾比較了甲醇-水［3］及甲醇-醋酸-水［4］多種不同配比，提取方法比較了加甲醇、乙醇、75%乙醇超聲處理45，60 min及加熱回流提取30，60 min［5］等多種提取方法，結(jié)果顯示加甲醇加熱回流提取1 h提取完全，用甲醇-醋酸-水(35∶2∶63)為流動(dòng)相出峰時(shí)間適當(dāng)，且橙皮苷與鄰峰基線分離好，峰形好，重現(xiàn)性好。

原標(biāo)準(zhǔn)中僅有散劑的常規(guī)檢查項(xiàng)目，筆者通過(guò)優(yōu)化色譜條件，檢測(cè)橙皮苷的含量，增強(qiáng)了專屬性;另增加了川貝母、桔梗和橘紅的薄層鑒別，進(jìn)一步提高完善了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第八冊(cè)［S］.1993:167.

［2］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:262-263.

［3］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:355-356.

［4］ 王福霞彭柳 王曉瓊.高效液相色譜法測(cè)定健胃消食口服液橙皮苷含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(2):236-237.

［5］ 蔣慶宇，陳平，廖琦，等.高效液相色譜法測(cè)定追風(fēng)藥酒中橙皮苷含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2009，18(7):19-20.