千金藤素對大鼠體內非索非那定藥動學的影響

胡玉琴，蔣學華，于志瀛，陶勇，黃美蘭

(1.廣東食品藥品職業學院，廣州 510520;2.四川大學華西藥學院臨床藥學與藥事管理學系，成都 610041)

非索非那定(fexofenadine)是特非那定在人體的活性代謝產物，是組胺H1受體拮抗藥［1］，用于治療季節性過敏性鼻炎及慢性特發性蕁麻疹。近年來國外研究認為［2-3］，非索非那定的吸收與腸黏膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)密切相關。P-gp介導的腸道分泌可以降低非索非那定的口服吸收。千金藤素(cepharanthine)是從防己科千金藤屬植物的塊根中提取分離出的一種雙芐基異喹啉類生物堿單體化合物，具有抗炎、抑菌、調節免疫等多種生物學活性［4］。國內文獻［5］表明，其有逆轉多藥耐藥的作用，效果明顯優于經典的P-gp逆轉藥，且細胞毒性作用遠低于傳統的逆轉藥。為此，筆者研究了千金藤素對非索非那定在大鼠體內藥動學的影響，為將千金藤素開發為潛在的P-gp抑制藥提供依據。

1 材料

1.1 儀器 LC-10AT高效液相色譜儀［包括SPD-10AV紫外檢測器，LC-10AT泵(日本島津)］，Genius 3漩渦混合儀(德國IKA公司)，Anke TGL-16C臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。

1.2 試藥 非索非那定原料藥(杭州華東醫藥集團康潤制藥有限公司，含量＞99%)，非索非那定對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100852-200601)，非那西丁原料藥(佳木斯鹿靈制藥有限責任公司，含量:＞99.5%，批號:0703035)，非索非那定混懸液(自制，精密稱取30 mg非索非那定原料藥，置10 mL量瓶，用20%甘油稀釋定容至刻度，搖勻，得每毫升含非索非那定3.086 8 mg的胃灌注液)，千金藤素原料藥(昆明長春花科技有限公司提供，含量:93%，批號:20060319P)，甲醇、丙酮為色譜純，水為二級純化水，其他試劑為分析純。

1.3 動物 雄性SD大鼠［四川大學華西實驗動物中心，動物合格證號:0003481，平均體質量為(250±20)g］。

2 方法與結果

2.1 給藥方法 SD大鼠10只，雌雄各半，隨機分成兩組，每組5只，禁食24 h，自由飲水。A組灌胃給予3.086 8 mg·mL-1非索非那定胃灌注液，B組灌胃給予非索非那定濃度為 3.086 8 mg·mL、千金藤素濃度為2.007 mg·mL-1的胃灌注液，均10 mL·kg-1。分別于灌胃后 0，0.083，0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12 h尾靜脈取血約0.35 mL，置0.5 mL肝素化離心管，8 000 r·min-1離心5 min，分離血漿，并于-20 ℃保存。

2.2 血藥濃度測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:DikmaTMC18柱(5.6 mm×250 mm，4.6 μm)，流動相:乙腈-0.5% 磷酸二氫鉀(pH3.8)-三 乙 胺 (30∶ 70∶ 0.3)，流 速:1.2 mL·min-1，檢測波長:220 nm，柱溫:40℃;進樣量:20 μL。

2.2.2 標準曲線的繪制 取大鼠空白血漿100 μL，精密加入非索非那定對照品系列濃度甲醇液20 μL，使血漿濃度分別為 0.098，0.196，0.392，0.980，1.960，4.200，7.000 μg·mL-1。再于各管中精密加入14 μg·mL-1非那西丁(內標)溶液 20 μL，充分混合后加入乙腈 300 μL。渦旋 5 min，15 000 r·min-1離心5 min，取上清液置于另一離心管中，50℃下氮氣揮干后，用流動相75 μL 溶解，渦旋1 min，取20 μL 進樣，記錄色譜圖與峰面積。以非索非那定與內標峰面積比值(Y)為縱坐標，非索非那定濃度(X)為橫坐標，用最小二乘法線性回歸，得回歸方程:Y=0.590 3X-0.042 2(r=0.999 7)。表明血漿樣品在0.098～7.000 μg·mL-1范圍內線性關系良好，定量限為0.098 μg·mL-1。

2.2.3 方法專屬性考察 在“2.2.1”項條件下，分別將空白血漿、空白血漿加內標和非索非那定、血漿樣品，按“2.2.2”項下處理，進樣，色譜圖見圖1。非那西丁的保留時間約10.8 min，非索非那定的保留時間為14.6 min，內源性雜質不干擾內標及非索非那定的分離測定。

2.2.4 方法回收率與精密度實驗 按“2.2.2”項下方法制備高、中、低濃度質控樣品，連續3 d測定，并與標準曲線同時進行，考察方法回收率及日內、內間精密度(表1)。

2.2.5 血漿樣品與相關溶液的穩定性考察 取0.2，5.0 μg·mL-1非索非那定對照品甲醇溶液，室溫放置24 h后測定(n=3)，藥物剩余率分別為(99.73±0.60)%(n=3)和(101.8±2.1)%(n=3)。另將濃度為 0.02，0.5 μg·mL-1的質控樣品，置-70 ℃保存 7 d后測定，藥物剩余率分別為(99.6±3.6)%(n=3)和(106.4±1.4)%(n=3)。高、低濃度的質控樣品按“2.2.2”項下處理后放置12 h測定，藥物剩余率分別為(102.2±0.6)%(n=3)和(103.8±6.6)%(n=3)。結果表明，非索非那定在上述存放狀態下基本穩定。

圖1 空白血漿(A)、空白血漿加非索非那定對照品和內標(B)和大鼠給藥后血漿樣品(C)的HPLC色譜圖1.內標;2.非索非那定Fig．1 HPLC chromatograms blank plasma(A)and blank plasma spiked with fexofenadine and internal standard(I．S)(B)and plasma sample after iv administration of fexofenadine(C)1.I.S;2.fexofenadine

表1 方法回收率和日內、日間精密度實驗結果Tab．1 The recovery，inter-and intra-day precision μg·mL-1，n=5

2.4 藥動學實驗結果 A、B組大鼠給藥后血藥濃度-時間關系曲線呈二室開放模型(圖2)，藥動學參數見表2。

從圖2、表2可以看出，A、B組的血藥濃度-時間曲線形狀相似，均于1～3 h后達峰，且該曲線存在多峰現象。與A組比較，B組血藥濃度升高，AUC0-t、Cmax增大明顯，AUC0-t增加 7.09%(P＜0.01)，Cmax增大15.67%(P＜0.05)。tmax、MRT、Ka變化不明顯(P＞0.05)。表明合用千金藤素后，非索非那定的吸收增加，生物利用度增大。

3 討論

目前已報道的非索非那定血藥濃度測定僅限于高效液相熒光檢測法和液質聯用法［6-7］。高效液相紫外檢測方法一般用來檢測制劑配方中非索非那定的含量。而非索非那定是藥物轉運體P-gp和有機陰離子轉運體的底物，由于它在體內不被代謝，常用來作為體內評價P-gp轉運行為的探針藥物［8-9］。因此，本實驗中建立的方法也可用于轉運體介導的藥動學相互作用的研究。

圖2 2組灌胃給藥后非索非那定藥物濃度-時間曲線Fig．2 Plasma concertration-time curves of fexofenadine after oral administration in the 2 groups

表2 2組大鼠非索非那定的主要藥動學參數Tab．2 Main pharmacokinetic parameters of fexofenadine the 2 groups ±s

表2 2組大鼠非索非那定的主要藥動學參數Tab．2 Main pharmacokinetic parameters of fexofenadine the 2 groups ±s

組別Cmax/(μg·mL-1)tmax/h AUC0-12/(mg·h·L-1)MRT/h Ka/h-1 A 組 1.225±0.770 1.800±0.447 5.379±1.570 5.013±0.660 1.680±0.723 B 組 1.417±0.440 1.400±0.822 8.088±1.760 4.770±0.171 1.895±0.766

大鼠灌胃給予非索非那定后，其體內藥動學過程符合二室開放模型，藥物濃度-時間曲線存在多個峰現象。合用千金藤素后，非索非那定Cmax、AUC0-t、絕對生物利用度顯著增加，但tmax無明顯變化，灌胃給藥后均于1～3 h后達峰。近年來研究表明［5］，千金藤素可部分逆轉細胞的多藥耐藥性，效果明顯優于經典的P-gp逆轉藥，而非索非那定是P-gp的底物［8-9］，因此可以初步認為P-gp可能參與了非索非那定大鼠體內藥動學過程。合用千金藤素后，千金藤素可能限制了P-gp外排型轉運體而使非索非那定的生物利用度增加。

［1］ MARKHAM A，WAGSTAFF A.Fexofenadine［J］.Drugs，1998，55(2):269.

［2］ CHRISTOPHER B，SAMIR G.Grape fruit juice reduces the qral bioavailability of fexofenadine but not desloratadine［J］.Clin Pharmocokinet，2002，41(4):311-318.

［3］ GEORGE K，DRESSER M D，DAVID G，et al.Fruit juices inhibit organic anion transporting polypeptide-mediated drug uptake to decrease the oral availability of fexofenadine［J］.Clin Pharm Ther，2002，71(1):11-20.

［4］ 宋玉成，夏微.鹽酸千金藤素逆轉EAC/ADR細胞多藥耐藥性的作用及其機制［J］.藥學學報，2005，40(3):204-207.

［5］ 武亞玲，王慶端.鹽酸千金藤素逆轉K562/ADR細胞的多藥耐藥性及其與 bcl-2的關系［J］.河南腫瘤學雜志，2005，8(2):93-95.

［6］ TSUKASA U，NORIO Y.Liquid chromatographic determination of fexofenadine in human plasma with fluorescence detection［J］.J Pharm Biomed Anal，2004，35:937-942.

［7］ HOFMANN U，SEILER M，DRESCHER S，et al.Determination of fexofenadine in human plasma and urine by liquid chromatography-mass spectrometry［J］.J Chromatogr B，2002，766:227-233.

［8］ RUSSELL T，STOHZ M，WEIR S.Pharmacokinetics，pharmacodynamicsand tolerance ofsingle-and multiple-dose fexofenadine hydrochloride in healthy male volunteers［J］.Clin Pharm Ther，1998，64(6):612-621.

［9］ STOHZ M，ARUMUGHAM T，IIPPERT C，et al.Effect of food on the bioavailability of fexofenadine hydrochloride(MDL16455A)［J］.Biopharm Drug Dispos，1997，18(7):645-648.