慢性乙肝不同基因型與拉米夫定耐藥關系的探討

李紅生

乙肝病毒(HBV)基因型是長期點突變累積形成的,由于HBV在逆轉錄過程中的不對稱轉錄和缺乏校對酶的作用,HBV突變率較高,基因型反映了HBV自然感染時發(fā)生變異的特點,是病毒變異進化的結果。根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性≥8%的界線,可將其分為不同的基因型。目前,已鑒定的HBV基因型有A～H八種。近年的研究表明,HBV基因型與疾病的臨床表現(xiàn)、治療效果及預后有密切的聯(lián)系。本研究采用PCR結合微流芯片對本地區(qū)63例慢性活動性乙型肝炎（CAH）患者血清中HBV進行了分型測定，并對所有患者進行拉米夫定抗病毒治療48周后檢測YMDD。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 2003年7月～2005年7月，63例CAH患者血清采自本院門診和住院病人，排除了其他病毒性肝炎以及酒精性肝炎、既往未曾抗病毒治療，其中男40例，女23例，平均年齡（35.2±10.1）歲，診斷標準符合2000年第十次全國傳染病與寄生蟲病學會和肝病學會修訂的病毒性肝炎防治方案。留取血清標本作基因分型、HBV-DNA定量檢測、YMDD檢測。

1.2 HBV-DNA水平的檢測采用熒光定量PCR技術。Taq酶、dUTP和UNG酶購自上海華美生物工程公司。標準品,陰、陽性對照物，PCR緩沖液等購自上海復星實業(yè)公司。引物序列由上海申友公司合成。熒光定量基因擴增儀為瑞士LightCycler公司生產(chǎn)，配備Version5132分析軟件,自行處理相關數(shù)據(jù)。按照HBV-DNA＞103作為陽性判定標準,兩次均為陽性者作為研究對象。

1.3 HBV-DNA基因分型微流芯片檢測

1.4 YMDD檢測

1.5 給藥方案 所有患者給予口服100mg/d常規(guī)劑量的拉米夫定，療程48周，治療后檢查HBV-DNA及YMDD。

1.6 統(tǒng)計學方法 用SAS 8.0統(tǒng)計軟件進行分析，兩個樣本均數(shù)用t檢驗，兩樣本率用x2檢驗。

2 結果

2.1 乙肝病毒基因分型的分布 對63例CAH 患者血清中HBV進行了基因分型，結果為：B型12例（19.05%），C型45例（71.43%），B+C混合型4例（6.35%），未分型2例（3.17%）。

2.2 治療前乙肝病毒基因分型與其DNA水平及ALT水平見表1。

表1 CAH患者ALT及HBV-DNA的檢查結果

2.3 治療后乙肝病毒基因分型與其DNA水平及ALT水平見表2。

表2 治療后CAH患者ALT及HBV-DNA的檢查結果

2.4 治療后基因型與YMDD結果 見表3。

3 討論

本研究結果顯示：我市CAH患者HBV基因型主要是B和C型，其中C基因型占71.43%，B基因型占19.05%，以C型為主，以往資料顯示HBV基因型的分布存在著較為明顯的地區(qū)差異，由南向北分布呈現(xiàn)B型為主C型次之到C型為主B型次之的趨勢，新疆維族以D型為主。

拉米夫定是抗乙肝病毒的主要藥物之一,因其抗病毒作用確切而被廣泛用于治療慢性乙型肝炎。隨著拉米夫定的廣泛應用,由拉米夫定導致的耐藥問題逐漸成為人們關注的焦點，誘發(fā)乙肝病毒YMDD變異是引起拉米夫定耐藥的主要機制，當YMDD變異病毒株成為優(yōu)勢株時就會影響拉米夫定的抗病毒療效，出現(xiàn)耐藥,導致病毒重新活躍，甚至病情的加重或死亡。目前研究認為影響拉米夫定相關YMDD變異的因素有：(1)拉米夫定用藥時間。用藥時間越長,發(fā)生YMDD變異的幾率越大；(2)用藥前病毒荷量、ALT水平及HBeAg狀態(tài)。基線HBV DNA滴度高、ALT水平低或HBeAg陽性者較易發(fā)生YMDD變異；(3)前C區(qū)變異；(4)乙肝病毒基因型；(5)聯(lián)合用藥。本研究證實乙肝病毒基因型和拉米夫定YMDD有關，C型易產(chǎn)生YMDD變異。