菩人丹超微粉對肥胖型T2DM大血管損傷大鼠ET-1、NO、FFAs含量的影響

龐宗然 劉祖涵 蘇曉慧 王朝暉 張伯禮

(中央民族大學中國少數民族傳統醫學研究院，北京 100081)

糖尿病大血管病變是指主動脈、冠狀動脈、腦基底動脈、腎動脈及周圍動脈等動脈粥樣硬化(AS)。其特點是內皮破損，中層(平滑肌)細胞增殖而增厚，脂類沉積形成斑塊和彈力層的碎裂〔1〕。一氧化氮(NO)與內皮素-1(ET-1)是血管內皮細胞(VEC)合成和分泌的具有拮抗作用的血管活性物質。血栓形成與脂肪酸的動員有關〔2，3〕。依據“養陰清熱、益氣活瘀”調配而成的菩人丹(PRD)降糖方，具有降糖調脂、改善胰島素抵抗、有效遏制血管內皮損傷、防止血管病變的作用。本研究通過測定肥胖型2型糖尿病(T2DM)大血管損傷大鼠血清ET-1、NO和游離脂肪酸(FFAs)含量變化，探討 PRD對 ET-1、NO和FFAs的調節作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級雄性Wistar大鼠，體重(240±20)g，由中國醫學科學院放射醫學研究所實驗動物中心提供。許可證號:SCXK津2005-0001。

1.2 實驗藥物及試劑 PRD超微粉，河北以嶺藥業集團有限公司提供;馬來酸羅格列酮片，4 mg/片，葛蘭素史克(天津)有限公司生產，批號:03110001。鏈脲佐菌素(STZ)，Sigma公司產品;大鼠ET-1放射免疫分析試劑盒，北京市福瑞生物工程公司提供;NO測試試劑盒，南京聚力生物醫學工程研究所產品，批號:010802;FFAs分析試劑盒，南京建成生物工程研究所提供。

1.3 主要儀器 放免γ計量儀(SN-695B型)，上海核所日環光電儀器有限公司;721分光光度計，上海第三分析儀器廠;LD5-2A，北京醫用離心機廠。

1.4 方法

1.4.1 脂肪乳的制備 豬油20 g，甲基硫氧嘧啶1 g，膽固醇8 g，谷氨酸鈉 1 g，蔗糖 5 g，果糖 5 g，吐溫-80 20 ml，丙二醇30 ml，加水定容至100 ml，配成脂肪乳。

1.4.2 肥胖型T2DM大血管損傷大鼠模型的制備 雄性Wistar大鼠，每日灌胃自制的脂肪乳1 ml/100 g，灌胃3 w后，眶靜脈取血，離心血清。放免法檢測血清胰島素(Ins)水平;全自動生化檢測儀檢測總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平;尾靜脈取血，強生血糖儀檢測血糖。挑選TC、TG、LDL-C增高，胰島素敏感指數下降的肥胖大鼠，空腹6 h，尾靜脈快速注射STZ 30 mg/kg，1 w后取尾靜脈血用強生血糖儀檢測血糖，＞16.7 mmol/L的大鼠作為T2DM模型大鼠。成模后，隨機抽取15只大鼠殺檢，觀察胸主動脈弓的病理改變，如電鏡下見動脈血管內皮細胞局部損傷嚴重，內皮細胞與內彈力板連接處空隙增加等，證實T2DM大血管損傷模型復制成功。

1.4.3 實驗分組、給藥及指標檢測 T2DM大血管病變大鼠按血糖結合體重分層隨機分為5組:PRD低、中、高劑量組，馬來酸羅格列酮組，模型組，另取8只大鼠作為正常對照組。各組動物每日灌胃給藥1次，正常對照組和模型組灌胃等劑量自來水，連續給藥4 w。實驗期間除正常對照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂高熱量飼料。4 w后大鼠用30mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，股動脈取血，離心，檢測NO、ET-1、FFAs含量。

1.5 統計學分析 計量資料用x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，應用SPSS13.0軟件進行統計。

2 結果

模型組大鼠血清ET-1、FFAs水平較正常對照組上調，NO水平明顯下調(P＜0.01)。PRD中、高劑量組均能顯著降低血清ET-1、FFAs的含量(P＜0.01～0.05)，PRD低、中、高劑量組均能顯著提高血清NO含量(P＜0.01)。見表1。

表1 PRD對T2DM大鼠血清NO 、ET-1、FFAs的影響(x±s)

3 討論

T2DM大血管病變以AS為病理基礎，AS的啟動常發生在損傷和缺損的內皮或功能異常的內皮細胞。高濃度的FFAs可增加AS的危險性。其可能機制為:(1)FFAs直接導致內皮細胞依賴性血管舒張功能受損，而內皮細胞功能異常是AS病理過程的啟動因素之一。(2)高FFAs加劇脂代謝紊亂。胰島素抵抗時脂肪組織中的HSL活性增強，使組織釋放大量的FFAs。增高的FFAs刺激肝細胞合成TG、TC及VLDL。(3)FFAs易致凝血纖溶系統改變，誘導局部血栓形成。(4)FFAs水平升高激活IκB/核因子(NF)-κB途徑。NF-κB的活化參與許多炎癥反應過程，促進T2DM動脈粥樣硬化的形成〔2～5〕。

NO與ET-1是VEC合成和分泌的具有拮抗作用的血管活性物質，NO能舒張血管，抑制血小板黏附和聚集，抑制血管平滑肌細胞增殖和遷移;ET-1是已知最強的縮血管多肽，具有促血管收縮和平滑肌細胞增殖分裂的作用。ET-1可負性調節內皮NO的釋放，NO濃度增高可抑制ET的生成，二者的動態平衡維持著正常的血管內皮功能，ET-1升高和NO減少是血管內皮損傷的標志〔6～9〕。

本研究結果顯示:肥胖型T2DM大血管損傷大鼠的血清ET-1較正常組上調，NO明顯下調，FFAs較正常組上調。提示模型大鼠出現了血管內皮功能損傷和脂代謝異常現象。PRD中、高劑量組均能極顯著降低血清ET-1的含量，PRD低、中、高劑量組均能極顯著提高血清NO含量，PRD中、高劑量組均能顯著降低血清FFAs的含量。提示以益氣養陰、化瘀通絡為治則的PRD處方，能有效地降低血清FFAs含量，調節異常的脂質代謝，調整血管舒縮功能，保護損傷的血管內皮細胞，進而對防治T2DM大血管病變起重要作用。

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