MDM2啟動子309位點多態性與膠質母細胞瘤易感性的關系

楊 軍，劉運海

(1常寧市人民醫院，湖南常寧421500;2中南大學湘雅醫院)

膠質母細胞瘤(GBM)是最常見的顱內高度惡性腫瘤。現代分子遺傳學已經證實，腫瘤的發生和發展與抑癌基因和癌基因的改變密切相關。MDM2基因定位于人染色體12q13～14，編碼491個氨基酸，MDM2蛋白的主要功能是p53蛋白酸性活化域直接結合形成復合物，從而抑制野生型p53介導的轉錄激活功能，阻斷p53的細胞生長抑制作用，將野生型p53控制在較低無活性水平。MDM2過度表達時會促進腫瘤的發生發展，還會造成腫瘤對放療、化療的耐受，與腫瘤的不良反應有關［1］;而MDM2啟動子區SNP309(309T＞G)能加強SP1轉錄因子的結合能力，從而使MDM2的轉錄增強和表達增加，直接抑制p53，進一步削弱其腫瘤抑制作用［2］。本研究對MDM2基因啟動子309位點多態性與GBM易感性的關系進行分析。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2007年2月～2010年7月于中南大學湘雅醫院就診的GBM患者95例(病例組)，男 55例、女 40例，年齡 32～75(58.56±12.09)歲。均為影像學資料擬診為GBM，經術后組織病理證實。對照組為同期健康體檢者95例，男55例、女40例，年齡27～83(60.56±11.78)歲。兩組年齡、性別具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 采集患者外周血5 ml，通過酚—氯仿法提取外周血單個核細胞基因組DNA。

1.2.2 MDM2基因多態性檢測 采用PCR-RFLP方法檢測MDM2 SNP309基因型，下游引物序列F:5'-GATTTCGGACGGCTCTCGCGGC-3'，R:5'-CATCCGGACCTCCCGCGCTG-3'。PCR產物用限制性內切酶PstⅠ37℃孵育2 h，2.5%瓊脂糖凝膠觀察酶切結果，野生型純合子(T/T型)為104、17 bp兩個片段;突變型純合子(G/G型)為121、17 bp兩個片段;雜合子(T/G型)為121、104和17 bp三個片段。同時隨機抽取三種基因型的樣本進行PCR產物直接測序驗證，結果與PCR-RFLP方法所得結果一致。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0軟件。率的比較應用χ2檢驗，用Binary Logistic回歸模型計算表示相對風險度的比值比(OR)及其95%可信區間(CI)。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組MDM2 SNP309基因頻率分布 SNP309各基因型在病例組的頻率分布為:T/T型29.5%(28/95)、T/G 型 44.2%(42/95)、G/G 型 26.3%(25/95);在對照組的頻率分布為:T/T型30.5%(29/95)、T/G 型 54.7%(52/95)、G/G 型 14.8%(14/95)。兩組基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。

2.2 MDM2啟動子SNP309位點多態性與GBM發病風險的關系 見表1。G/G基因型，而不是T/G基因型對于T/T來說能增加GBM的患病風險，即G/G基因型與野生型T/T基因型相比能增加GBM的患病風險，而T/T基因型則不能增加GBM的患病風險。在隱性模型中，G/G基因型的GBM患病風險是T攜帶者的2.04倍(OR=2.04，95%CI=1.51～2.78)，然而顯性模型中G攜帶者基因型(T/G和G/G)與T/T相比，患病風險沒有統計學意義(P ＞0.05)。

表1 病例組與對照組MDM2 SNP309基因多態性與GBM風險的關系

3 討論

Qiao等［1］在李弗勞民綜合征患者身上發現了MDM2啟動子區SNP309，發現這些患者易患腫瘤的原因是生殖細胞系的p53突變，同時發現MDM2 SNP309 G/G基因型與腫瘤發生的年齡提前有關，而且使一生中原發性腫瘤的發生頻率增加。研究顯示，MDM2啟動子區SNP309(309T＞G)在不同腫瘤中發揮的作用不同，在散發性肉瘤［2］、子宮內膜癌［3］、胃癌［4］、肝癌［5］、食管鱗癌和膀胱癌中，能增加發病風險，而在卵巢癌、乳腺癌［6］、頭頸部腫瘤、結腸直腸癌和中發病風險與MDM2啟動子區SNP309(309T＞G)無關。MDM2作為p53的負性調控因子，具有抑制p53信號途徑的功能，從而削弱其腫瘤抑制作用。目前，關于MDM SNP309位點多態性與GBM易感性的研究較少，且存在爭議，國內目前還沒有相關研究報道。本研究結果顯示，SNP309G/G基因型與GBM的易感性顯著相關，SNP309G/G基因型的GBM患病風險是T攜帶者的2.04倍，進一步證實了MDM2啟動子309位點多態性與 GBM易感性的關系。Khatri等［7］研究顯示，MDM2 SNP309 G/G基因型能增加GBM的發病風險，本研究結果與其一致。同時，本研究還提示MDM2 SNP309 G/G基因型可使GBM的發病年齡提前。但在不同基因型GBM發病年齡差別方面我們未能發現統計學差異，其原因可能是不同人種或民族之間存在差異。

綜上所述，MDM2啟動子309位點多態性與GBM易感性相關，其中SNP309G等位基因能增加CBM的患病風險。另外，本研究結果是基于中國南方漢族人群，是否適用其他民族人群尚需進一步證實。

［1］Qiao D，Gaitonde SV，Qi W，et al.Deoxycholic acid suppresses p53 by stimulating proteasome-mediated p53 protein degradation［J］.Carcinogenesis，2001，22(6):957-964.

［2］Bond GL，Hu W，Bond EE，et al.A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans［J］.Cell，2004，119(5):591-602.

［3］Li Y，Zhao H，Sun L，et al.MDM2 SNP309 is associated with endometrial cancer susceptibility:a meta-analysis［J］.Hum Cell，2011，4.［Epub ahead of print］

［4］Ohmiya N，Taguchi A，Mabuchi N，et al.MDM2 promoter polymorphism is associated with both an increased susceptibility to gastric carcinoma and poor prognosis［J］.J Clin Oncol，2006，24(27):4434-4440.

［5］Liu GY，Jiang DK，Shen SQ，et al.MDM2 SNP309T＞G polymorphism with hepatocellular carcinoma risk:a meta-analysis［J］.Arch Med Res，2011，42(2):149-155.

［6］Krekac D，Brozkova K，Knoflickova D，et al.MDM2SNP309 does not associate with elevated MDM2 protein expression or breast cancer risk［J］.Oncology，2008，74(1-2):84-87.

［7］Khatri RG，Navaratne K，Weil RJ.The role of a single nucleotide polymorphism of MDM2 in glioblastoma multiforme［J］.J Neurosurg，2008，109(5):842-848.