AIF、Bcl-2在慢性成人牙周炎齦組織中的表達

蘇文昕，何健民，馮 利，聶 敏，閆雪萍，宋 靜，車 謹

(1蘭州大學口腔醫學院，蘭州730000;2甘肅省人民醫院;3蘭州大學基礎醫學院;4蘭州市口腔醫院)

細胞凋亡是由特定的信號分子啟動，在基因調控下遵循自身程序而自我消亡的過程。近年來，國內外許多學者就牙周炎組織中的細胞凋亡狀況進行了研究［1，2］。本實驗通過觀察慢性牙周炎患者牙齦組織中的細胞凋亡現象及凋亡誘導因子(AIF)與凋亡抑制因子(Bcl-2)的表達和分布，探討慢性成人牙周炎患者牙齦組織中細胞凋亡的途徑，為臨床診治提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年8月～2010年8月甘肅省人民醫院及蘭州大學口腔醫院收治的慢性牙周炎患者17例(觀察組)，男8例、女9例，平均年齡43.4歲。根據1999年國際牙周病新分類方法，經臨床檢查及口腔X線檢查確診。入選標準:患牙牙周袋深度≥4 mm，附著喪失≥2 mm，X線片顯示牙槽骨水平型或角型吸收超過根長的1/3。另擇健康對照者17例(對照組)，男10例、女7例，平均年齡28.5歲。兩組性別、年齡具有可比性。排除糖尿病、系統性疾病、內分泌疾病及家族遺傳病，就診前6個月內未做牙周治療，3個月內未服用抗生素及免疫抑制劑等，排除侵襲性牙周炎。

1.2 檢測方法 取2cm×2cm×1 mm局部齦組織，4%多聚甲醛固定，蠟塊包埋后切5 μm切片，HE染色，光鏡下觀察。AIF及bcl-2基因表達采用免疫組化SP法檢測。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0軟件。計量資料以±s表示，組間比較采用兩獨立樣本的t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 組織病理學觀察 觀察組光鏡下可見牙周組織中結合上皮出現釘突，周圍有大量炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞和單核細胞多見，膠原纖維排列紊亂，部分纖維發生斷裂，固有層水腫變性，部分血管增生、擴張、充血。對照組牙齦組織上皮釘突呈鋸齒狀，炎性細胞較少，膠原纖維排列整齊，極少有充血、出血及水腫現象。

2.2 免疫組化結果 觀察組AIF、BCL-2陽性細胞胞質呈棕黃色或棕褐色，主要位于上皮全層，以棘細胞層和基底層細胞表達較強，固有層也有少量表達，以炎性細胞為主。對照組表達較少，多位于上皮層，其平均灰度值與病變組比較有統計學差異(P＜0.05)。見表1。

表1 慢性牙周炎牙齦組織中AIF、Bcl-2的表達(±s)

表1 慢性牙周炎牙齦組織中AIF、Bcl-2的表達(±s)

注:與對照組比較，*P＜0.05

組別 n AIF平均光密度 Bcl-2平均光密度對照組17 0.422±0.097 0.463±0.023觀察組 17 0.497±0.016* 0.418±0.081*

3 討論

細胞凋亡是受基因控制的細胞自主性的死亡過程，是在某些生理或病理因素誘導下，激活膜信號系統，啟動自身內部機制，主要通過內源性DNA內切酶的激活而發生的自然死亡現象［3］。線粒體在細胞凋亡中起中心作用，其可能通過釋放與凋亡相關的蛋白，如細胞色素C(CytC)、Smac/DIABLO蛋白以及AIF等激活 caspases，促進凋亡［4］。線粒體通過釋放AIF和CytC使細胞凋亡，而AIF和Cyt C的釋放均與線粒體膜電位及通透性的改變有關。Bcl-2是調節細胞凋亡途徑的一個重要因素，Bcl-2蛋白定位于細胞核膜、內質網、線粒體外膜上，對線粒體內一些促凋亡因子的釋放具有調控功能，可抑制多種組織細胞的凋亡和延長細胞壽命，故稱之為凋亡抑制基因。細胞凋亡與多種疾病的發病機制密切相關，在口腔科學領域，細胞凋亡較多的研究于口腔鱗癌［5］、扁平苔蘚［6］、病毒感染等，而在牙周炎方面的研究較少。Ellis等［7］檢測了三組牙齦組織中細胞凋亡和bcl-2含量與牙周病的關系，發現凋亡細胞僅在齦溝深度＞6 mm組牙齦內明顯，牙齦組織中bcl-2濃度隨齦溝加深而進行性下降，兩者呈負相關。馮利等［8］研究認為，在侵襲性牙周炎的牙齦組織中存在明顯的細胞凋亡現象。

綜上所述，慢性牙周炎患者牙齦上皮組織中AIF的表達顯著高于正常，Bcl-2表達顯著降低，而固有層的改變很少。說明在慢性牙周炎病變發生時，牙齦組織細胞發生凋亡，并依賴于線粒體途徑。

［1］胡野，凌志強，單小云，等.細胞凋亡的分子醫學［M］.北京:軍事醫學科學出版社，2002:3-10.

［2］Liu X，Kim CN，Yang J，et al.Induction of apoptotic program in cell-free extracts:requirement for dATP and cytochrome C［J］.Cell，1996，86(1):147-157.

［3］Loeffler M，Daugas E，Susin SA，et al.Dominant celldeath induction by extra mitochondrially targeted apoptosis inducing factor［J］.J FASEB，2001，15(3):758-767.

［4］Ohiro Y，Garkavtsev I，Kobayashi S，et al.A novel p53-inducible apop togenic gene，PRG3，encodes a homologue of the apop tosisinducing factor(AIF)［J］.J FEBS Lett，2002，524(123):163-171.

［5］Xu JH，Wang AX，Huang HZ，et al.Survivin shRNA induces caspase-3-dependent apoptosis and enhances cisplatin sensitivity in squamous cell carcinoma of the tongue［J］.J Oncol Res，2010，18(8):377-385.

［6］Deng GH，Chen ZL，Chen HB，et al.Significance of cell immunoreactions and cell apoptosis in oral lichen planus［J］.Huaxi Kouqiang Yixue Zazhi，2009，27(3):256-259.

［7］Ellis SD，Tucci MA，Serio FG，et al.Factors for progression of periodontal diseases［J］.J Oral Pathol Med，1998，27(3):101-105.

［8］馮利，何健民.侵襲性牙周炎齦上皮細胞凋亡的研究［J］.現代口腔醫學雜志，2008，22(6):615-617.