尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+及CD8+CD25+細胞的檢測

張艷杰，張士發，王莉麗，王良民

銀屑病目前發病機制尚不明確，其外周血及皮損中CD4+CD25+調節性T細胞的抑制能力降低，導致效應T細胞活性增強，是銀屑病免疫功能紊亂的特點之一[1]。目前有關CD4+CD25+調節性T細胞與銀屑病的關系的研究結果不甚一致，而對于CD8+CD25+調節性T細胞與銀屑病關系的研究更少。本文對進行期尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+調節性T細胞進行研究，以探討這兩類調節性細胞亞群的變化及作用機制。

1 資料與方法

1.1 研究對象

隨機選擇進展期的尋常型銀屑病患者21例，其中男 13例、女 8例，年齡（35±8）歲，病程（6.2±3.8）年，近2月未接受系統治療和外用藥治療，不伴有系統性疾病。正常對照組21名，其中男13名、女8名，年齡（37±9）歲，均為志愿者，無銀屑病、急慢性疾病史及家族史。

1.2 試劑和儀器

抗 CD4-PE、 抗 CD8-PE、 抗 CD25-FITC、IgG1-FITC和IgG1-PE熒光抗體均為Immunotech公司產品，FACScan流式細胞儀（Becton Dickinson公司）。

1.3 外周血淋巴細胞的提取和流式細胞術檢測

常規分離單一核細胞，每管分裝3×105～5×105個細胞。對照管分別加入10μL的IgG1-FITC和IgG1-PE，實驗管分別加入10μL的CD4-PE+CD25-FITC和CD8-PE+CD25-FITC，混勻，37℃避光30min后洗滌3次，再加入PBS至總體積約0.5mL。進入流式細胞儀Machintosh操作系統進行檢測，數據經Cellquest軟件獲取和分析，每個樣本檢測約104個細胞。

1.4 統計學方法

2 結果

進展期尋常型銀屑病外周血CD4+CD25+T細胞及CD8++CD25+調節性T細胞數量與正常對照組相比，均顯著降低，CD4+CD25+/CD8+CD25+比值則無明顯差異（表1）。流式圖見圖1-4。

表1 進展期尋常型銀屑病患者與健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 調節性T細胞的檢測（ ±s）

表1 進展期尋常型銀屑病患者與健康人外周血CD4+CD25+及CD8+ CD25+ 調節性T細胞的檢測（ ±s）

例數 CD4+CD25+ CD8+CD25+ CD4+CD25+/CD8+CD25+患者組 21 19.82±4.86 15.60±2.53 1.14±0.12對照組 21 27.25±4.92 23.73±3.06 1.31±0.16 t 2.29 3.15 0.83 P<0.05 <0.005 >0.05

3 討論

既往研究發現尋常型銀屑病外周血CD4+CD25+調節性T細胞數量明顯升高，但與病情嚴重程度無明顯相關[2]，也有報道其數量無明顯變化，而僅僅表現為功能上的缺欠[1]。至于這些現象是由于反饋性的升高，還是銀屑病僅與其功能缺欠有關，尚無統一意見。而近年來更多的研究報道發現CD4+CD25+調節性T細胞明顯降低[3,4]，與本研究的結果一致。

在銀屑病患者的外周血中，作為調節性T細胞，CD4+CD25+調節性T細胞數量降低可導致其抑制能力降低，或者其功能存在缺陷，導致Th1細胞失去抑制而過度活化，從而釋放IFN和IL-2等細胞因子，通過K17-自身反應性T細胞，IFN環路等途徑引起或加速銀屑病的免疫病理損傷[5]。臨床研究發現，應用他克莫司等治療尋常型銀屑病，治療前CD4+CD25+調節性T細胞明顯降低，治療后隨著病情的緩解，CD4+CD25+調節性T細胞明顯升高[5]，也支持本文觀點。

近年來CD8+CD25+調節性T細胞的作用引起人們的重視。CD8+CD25+調節性T細胞與CD4+CD25+調節性T細胞一樣，具有抑制免疫反應和誘導免疫耐受作用，但其影響顯著超過了CD4+CD25+調節性T細胞的調節作用[6]。有報道尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調節性T細胞顯著升高，與病情嚴重程度相關，認為CD8+CD25+調節性T細胞的激活是銀屑病皮損發生和加重的重要炎癥細胞[7]，但從近年來對CD8+CD25+調節性T細胞的作用機理認識和銀屑病的免疫病理學特點來看，二者存在矛盾之處，而且難以作出合理解釋。

本研究發現，進展期尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調節性T細胞顯著降低，由此可能導致其失去對CD4自身反應性T細胞的增殖、分泌IFN-γ和IL-17等功能的抑制，使STAT3和細胞毒T細胞抗原-4（CTLA-4）依賴性機制誘導的免疫耐受途徑受阻，從而引起銀屑病的病理改變，其作用顯著超過了CD4+調節性T細胞的作用[7]。因此本文的結果可以更為合理地解釋銀屑病的免疫學發病機理。

圖1 尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+調節性T細胞流式圖

圖2 正常人外周血CD4+CD25+調節性 T細胞流式圖

圖3 尋常型銀屑病患者外周血CD8+CD25+調節性T細胞流式圖

圖4 正常人外周血CD8+CD25+調節性 T細胞流式圖

既往許多研究發現尋常型銀屑病外周血CD4+/CD8+調節性T細胞比例失調，與銀屑病的發病及加重有密切相關，而本研究發現，雖然銀屑病患者外周血CD4+CD25+和CD8+CD25+調節性T細胞的數量均低于正常對照組，但兩組CD4+CD25+/CD8+CD25+比值并未出現顯著性差異。提示尋常型銀屑病患者外周血CD4+CD25+與CD8+CD25+調節性T細胞分別通過不同的機制促進銀屑病的發生和發展，二者是否有內在聯系和詳細機制有待進一步探討。

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[4]楊曉梅, 何榮國. 外用他克莫司對尋常型銀屑病患者CD4+CD25+調節性T細胞的影響 [J]. 國際醫藥衛生導報, 2010,16(l5):1858-1860.

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