運動與復方丹參合劑聯合應用對去卵巢大鼠骨體積和骨量的影響

陳鴻生 宋冰 張兆強

1 廣東醫學院體育部（廣東 湛江 524023） 2 湛江師范學院基礎教育學院 3 廣東醫學院生理學教研室

補充雌激素是防治絕經后骨質疏松的主要措施之一，但基于雌激素對心血管系統及乳腺、子宮的毒副作用，在臨床使用中具有一定的局限性。植物性雌激素以其對子宮乳腺相對較小的副作用［1，2］，在絕經后骨質疏松的防治中逐漸受到人們的關注。但一般植物中雌激素的含量較低，服用劑量和療效需進一步研究，通過聯合應用其他措施能否加強植物性雌激素的療效值得探討。運動對骨質疏松的防治作用已得到公認。丹參中所含的丹參酮有雌激素活性。本研究用去卵巢的方法建立大鼠骨質疏松模型，用丹參配以淫羊藿、牡蠣等制成復方丹參合劑，觀察運動與復方丹參合劑聯合應用對去卵巢大鼠骨體積和骨量的影響，以了解運動能否加強復方丹參合劑的作用，從而為骨質疏松癥防治措施的研究提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

健康4月齡Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠48只（廣東醫學院實驗動物中心提供，實驗動物合格證書編號：粵檢證字2002A013號），體重325±15 g，動物編號，采用抽簽法隨機分成6組：正常對照組、假去卵巢組、去卵巢組、去卵巢＋復方丹參合劑組、去卵巢＋運動組、去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組，每組8只。實驗期間，各組大鼠自由攝食標準固體飼料（廣東省衛生廳南海實驗動物中心生產），自由飲水。各組大鼠照明、通風、溫度、濕度等飼養環境條件相同。

1.2 去卵巢動物模型的建立

去卵巢組、去卵巢＋復方丹參合劑組、去卵巢＋運動組和去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組大鼠用10 g/L戊巴比妥鈉溶液腹腔麻醉（3.0 ml/kg體重），無菌條件下，經腹部正中線切口，切除雙側卵巢。切下的卵巢經組織學鑒定確認。假去卵巢組手術過程及操作與上述各組相同，但不切除卵巢，只切除腹腔內一小塊脂肪組織，經組織學鑒定確認。

1.3 動物給藥

去卵巢＋復方丹參合劑組和去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組大鼠給予復方丹參合劑溶液灌胃。復方丹參合劑由丹參、淫羊藿、牡蠣等多種藥物的醚和水提取物混合制成。將復方丹參合劑原液用蒸餾水稀釋4倍后，按10 ml/kg體重的劑量于去卵巢手術后第2天開始灌胃，每天1次，持續11周。

1.4 動物運動訓練

去卵巢＋運動組和去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組于去卵巢術后第7天開始，在YD-1型大鼠專用跑臺［3］上進行中等強度［4］運動訓練，每周5天，每天45 min，速度16 m/min，跑道傾角0，持續10周。

1.5 標本收集與測定

各組大鼠分別于實驗后第11周末動脈放血處死，取左股骨，剝凈軟組織，測量以下指標：

（1）骨直徑：在量取左股骨的長度后，分別于右股骨的近端1/3點、中點、遠端1/3點，用游標卡尺量取其最大外徑及最小外徑，將6個數值相加后平均，作為骨直徑的數值。

（2）骨體積：根據阿基米德（Archimedes）原理，浸沒在液體中的不規則物體的體積等于其排開液體的體積。將左股骨置于裝有蒸餾水的量筒中，并使其完全浸沒，通過量筒中液體所示刻度的前后變化測量右股骨的體積（cm3）。

（3）骨濕重：左股骨剝凈軟組織后，即置于1/100000分析天平上稱重。

（4）骨干重：左股骨稱濕重后置烤箱中，于110oC溫度下烤48 h至恒重，于1/100000分析天平上稱骨干重。

（5）骨灰重：左股骨稱干重后將其炭化，后在箱式電阻爐（SX 2-4-10型）中700℃ 6 h使其灰化，用1/100000分析天平稱灰重。

1.6 統計學分析

應用SPSS13.0統計軟件處理數據。各組數據以均數±標準差（±s）表示，多個均數間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

表1顯示，去卵巢組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較假去卵巢組顯著降低（P < 0.01）。假去卵巢組大鼠各項指標與正常對照組比較均無顯著性差異（P > 0.05）。去卵巢＋復方丹參合劑組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等較去卵巢組均顯著增加（P < 0.01），但仍顯著低于假去卵巢組（P < 0.01）。去卵巢＋運動組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較去卵巢組顯著增加（P < 0.01），但仍顯著低于假去卵巢組（P < 0.01）。去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等均較去卵巢＋復方丹參合劑組和去卵巢＋運動組顯著增加（P < 0.01）。去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等與假去卵巢組比較差異均無統計學意義（P> 0.05）。

表1 各組大鼠骨體積和骨量比較

3 討論

去卵巢大鼠模型是一種高轉換型骨質疏松模型，已被公認為“金標準”模型。在本實驗中，去卵巢組與假去卵巢組大鼠比較，骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標均顯著降低，說明去卵巢可使大鼠骨體積和骨量下降。假去卵巢組大鼠與正常對照組大鼠比較，各項指標均無顯著性差異，說明手術本身對大鼠骨體積和骨量無明顯影響，也說明去卵巢組大鼠與假去卵巢組大鼠各項指標的差異是切除卵巢引起的。

復方丹參合劑由丹參、淫羊藿、牡蠣等多種藥物的醚和水提取物混合制成。《神農本草經》認為牡蠣“久服強骨節，……”。《海藥本草》認為牡蠣“久服補腎正氣，……”。丹參為中醫活血化瘀要藥。丹參中含有的丹參酮有雌激素活性，對免疫功能有促進作用。淫羊藿有雄激素樣作用，含微量元素鋅、錳、鐵等，能促進垂體分泌生長激素。牡蠣殼含80%～95%的鈣鹽（碳酸鈣、磷酸鈣、硫酸鈣）和鎂、鐵、硅、鋁等元素［5］。去卵巢大鼠給予復方丹參合劑溶液灌胃后，對由于去卵巢所引起的大鼠骨礦鹽丟失和骨元素代謝紊亂有改善作用，但其作用與劑量有關，小劑量組效果并不理想［6，7］。本研究觀察到，去卵巢大鼠給予復方丹參合劑溶液灌胃后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標均較去卵巢組顯著增加，但仍顯著低于假去卵巢組，說明復方丹參合劑對去卵巢大鼠骨體積和骨量雖有一定改善作用，但效果不甚理想，與上述文獻報道相似。

運動對骨代謝的影響及其在骨質疏松癥中的防治作用已受到眾多關注。單純運動或運動和雌激素聯合應用可改善去卵巢大鼠骨生物力學性能［8］，增加去卵巢大鼠股骨骨密度，提高骨硬度和增強骨的抵抗變形能力［9］。Tromp 等［10］和 Renno 等［11］的研究證實，機械負荷或運動能使去卵巢大鼠骨量和骨密度增加。適宜強度游泳運動對生長發育期大鼠骨發育、骨組織形態和結構力學特性有促進作用［12，13］。跑臺運動能通過刺激骨形成、抑制骨吸收而促進生長期大鼠脛骨骨量積累［14］。Kemmler等［15］和 Engelke等［16］研究發現，運動能抑制絕經后婦女受力部位骨密度下降，增加骨直徑和骨礦物質含量。運動可提高青春前期和青春期受試者的骨量［17］。本研究結果顯示，去卵巢大鼠給予中等強度的運動訓練后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標均較去卵巢組顯著增加，但仍顯著低于假去卵巢組，說明運動雖然對改善去卵巢大鼠骨體積和骨量有一定作用，但效果還不甚理想。

前已述及，單純使用復方丹參合劑或給予運動訓練對改善去卵巢大鼠骨體積和骨量有效果但均不甚理想。本研究發現，去卵巢＋復方丹參合劑＋運動組大鼠骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等指標均較單純使用復方丹參合劑組或單純給予運動訓練組顯著增加，說明運動與復方丹參合劑聯合應用對改善去卵巢大鼠骨體積和骨量的作用優于單純使用復方丹參合劑或單純給予運動訓練，表明運動和復方丹參合劑對去卵巢大鼠骨體積和骨量的改善作用有協同效應。去卵巢組大鼠采用中等強度運動訓練與復方丹參合劑聯合干預后，其骨直徑、骨體積、骨濕重、骨干重、骨灰重等與假去卵巢組比較差異均無統計學意義，說明大鼠骨體積和骨量基本上恢復至對照水平。

綜上所述，運動對復方丹參合劑改善去卵巢大鼠骨體積和骨量的效應有加強作用。臨床上使用復方丹參合劑治療骨質疏松癥時，可考慮聯合應用適量運動，以增強療效。

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