胭脂樹低聚糖增強小鼠免疫功能的研究

王秒 白玉 李鋼 任鳳芝

（華北制藥新藥研究開發中心藥理研究室 河北石家莊050015）

低聚糖或稱寡糖，是由2～20個單糖通過糖苷鍵連接形成的直鏈或支鏈的低度聚合糖，有功能性低聚糖和普通性低聚糖兩大類。多項文獻研究報道顯示，功能性低聚糖可以促進腸道內有益菌的增殖，激活機體的體液、細胞免疫系統從而提高動物機體的免疫力[1～3]。胭脂樹低聚糖是由粉碎后的胭脂樹種子或提取色素后的胭脂樹種子，通過水或乙醇煮提，濃縮，加水稀釋，離心，上清液經活性炭和凝膠柱層析處理，得到的低聚糖，其化學結構為α-D-Gal-(1→3)-α-D-Gal-(1→6)-α-D-Glc-(1→2)-β-D-Fru。本試驗擬研究胭脂樹低聚糖對小鼠體液免疫和單核巨噬細胞吞噬功能的影響。

1 材料與方法

1.1 藥品與儀器 胭脂樹低聚糖，華藥新藥研發中心；蜂膠膠囊，浙大生命藥業公司；2100紫外分光光度計，Amersham Biosciences公司；BX-51生物顯微鏡，Olympus公司。

1.2 實驗動物 清潔級KM小鼠，體重18～22 g，河北醫科大學實驗動物中心提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 血清溶血素實驗 KM小鼠40只，隨機分為四組：陰性對照組（蒸餾水）、胭脂樹低聚糖高劑量組(0.6 g/kg)、低聚糖低劑量組(0.2 g/kg)、陽性對照蜂膠組(1.6 g/kg)，每組10只，雌雄各半。各組小鼠灌胃給藥，1次/d，連續9 d。于給藥第2天，小鼠腹腔注射5%雞紅細胞(CRBC)混懸液0.2 mL進行免疫。免疫7 d后，小鼠摘眼球取血1 mL，分離血清，用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清1 mL加入5%CRBC 0.5 mL，每管加入0.5 mL生理鹽水1:10稀釋過的豚鼠血清，隨即移至37℃恒溫水浴中，保溫30 min，即放入冰浴以終止反應，2 000 r/min離心10 min，取上清1 mL，546 nm處測定吸光度(A)值。

1.3.2 小鼠腹腔巨噬細胞吞噬實驗 KM小鼠40只，分組同上。各組小鼠灌胃給藥，1次/d，連續30 d。末次給藥后每只小鼠腹腔注射10%雞紅細胞混懸液1 mL，間隔1 h頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2 mL，轉動鼠板1 min，吸出腹腔洗液1 mL，分滴于玻片上，置于墊有濕紗布的搪瓷盤內，于37℃孵箱內孵育30 min，用生理鹽水漂洗輕洗，除去未貼牢固的細胞，晾干，以甲醇固定，Giemsa染色15 min，再以蒸餾水漂洗晾干，用油鏡觀察計數，每片計100個巨噬細胞，計算吞噬百分率。

2 實驗結果

2.1 對小鼠血清溶血素的影響 與對照組相比，陽性藥蜂膠顯著增加血清溶血素含量，比對照組提高了35.6%，差異極顯著（P＜0.01）；胭脂樹低聚糖0.6 g/kg顯著增加小鼠的血清溶血素含量，比對照組提高了20.5%（P＜0.05）。見表1。

表1 各組小鼠溶血素值比較 (±S)

表1 各組小鼠溶血素值比較 (±S)

注：與陰性對照組比較，**P ＜0.01，*P ＜0.05。

組別 溶血素值（OD546值）陰性對照 0.073±0.008蜂膠(1.6 g/kg) 0.099±0.021**胭脂樹低聚糖(0.2 g/kg) 0.083±0.013胭脂樹低聚糖(0.6 g/kg) 0.088±0.019*

2.2 對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬的影響 與對照組相比，陽性藥蜂膠顯著增加小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率，比對照組提高了75.4%（P＜0.01）；胭脂樹低聚糖0.2 g/kg和0.6 g/kg均顯著增加小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率，比對照組分別提高了36.5%和47.8%（P＜0.01）。見表 2。

表2 各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率比較 (±S) %

表2 各組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率比較 (±S) %

注：與陰性對照組比較，*P＜0.01。

組別 巨噬細胞吞噬率陰性對照 29.3±11.2蜂膠(1.6 g/kg) 51.4±19.2*胭脂樹低聚糖(0.2 g/kg) 40.0±11.1*胭脂樹低聚糖(0.6 g/kg) 43.3±12.2*

3 討論

動物血清溶血素含量的高低是衡量體液免疫的重要指標，當動物血清抗體水平提高的同時血清凝集素水平也會提高[4]。本研究結果顯示灌胃給予小鼠胭脂樹低聚糖后，0.6 g/kg劑量的胭脂樹低聚糖可顯著增加小鼠的血清溶血素值，說明胭脂樹低聚糖可以促進小鼠體液免疫功能。巨噬細胞是由循環血液中的單核細胞衍化而來，在免疫過程中起著重要作用。有研究報道大豆低聚糖是通過增殖的雙歧桿菌而激活機體免疫系統中的巨噬細胞，提高其吞噬能力[5]。本研究結果顯示灌胃給予小鼠0.2 g/kg和0.6 g/kg劑量的胭脂樹低聚糖30 d后，可顯著增加小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率，說明胭脂樹低聚糖可以明顯促進小鼠單核巨噬細胞吞噬能力。綜上所述，胭脂樹低聚糖能增強小鼠體液免疫功能和巨噬細胞的吞噬功能，具有一定的增強免疫作用。

[1]張樹清,李小成,孫玉華.大豆低聚糖對小鼠體液免疫功能的影響試驗研究[J].微生物學雜志,2007,27(2):97-99

[2]徐超斗,梁愛君,祝業,等.大豆低聚糖對免疫功能的促進作用[J].解放軍藥學學報,2005,21(1):37-39

[3]杭鋒,伍劍鋒,龔廣予,等.不同劑量蔗果低聚糖對小鼠免疫調節的研究[J].食品工業科技,2010,31(10):359-363

[4]江振友,林晨,劉小澄,等.靈芝多糖對小鼠體液免疫功能的影響[J].暨南大學學報,2003,24(2):51-53

[5]王立生,朱惠明,楊林,等.雙歧桿菌的完整肽聚糖對巨噬細胞產生IL-18的影響[J].中國微生態學雜志,2004,16(4):195-196