睪丸肉膜囊固定術在大鼠精索扭轉模型中的應用*

文焰林，鄧顯忠，崔 曙，姜 果，鮮述彥，廖 波

(川北醫學院附屬醫院泌尿外科，四川南充 637000)

目前，大鼠精索扭轉模型仍被廣泛運用于精索扭轉及睪丸移植缺血再灌注損傷的實驗研究。但以往該模型的建立往往利用縫線縫合睪丸白膜固定扭轉模型，或用線結扎精索血管。由于縫線縫合導致血睪屏障的破壞及睪丸炎癥性反應，使得精索扭轉模型的建立相對后續研究有很大干擾，而用線結扎容易導致結扎處水腫，要求恢復血供時不易解除結扎線。本文就利用睪丸肉膜囊固定術來建立一種對睪丸無損傷、簡便易行的大鼠精索扭轉模型，為臨床病理生理、形態學、缺血再灌注損傷及對健側睪丸功能影響的進一步研究打下基礎。

1 材料與方法

1.1 材 料

選用SD雄性大鼠42只，購自川北醫學院動物實驗中心［scxn(川)2008－18］，體重(65－219)g，平均120g。手術在川北醫學院動物實驗中心動物手術室進行。

1.2 方 法

將大鼠稱重，利用隨機數字表分組編號。用2%戊巴比妥鈉50mg/kg腹腔注射麻醉后，固定與鼠板上，消毒。用手將左側睪丸由腹腔推送至左側陰囊內，剪開陰囊皮膚，用齒躡提起左側陰囊皮膚，擴大陰囊皮膚切口，暴露肉膜層，用止血鉗充分分離、擴張左側陰囊皮膚與肉膜層之間的間隙，提起并打開肉膜層，通過肉膜層拉出睪丸、附睪(圖1 A)，分離睪丸引帶，按要求將精索順時針扭轉720°后維持精索位置不變(圖1B)，縫合縮小肉膜層切口，使僅容精索通過，將睪丸、附睪置于陰囊皮膚與肉膜層之間分離的肉膜囊內，拉攏縫合陰囊切口。96小時后(按后續試驗要求所選擇的時間)打開原切口進入陰囊，見睪丸、附睪缺血壞死(圖1C)，以上所有手術操作均嚴格按照無菌原則進行。

2 結果

手術時間為(3－5)分鐘，麻醉后死亡3只，都為體重相對輕的大鼠，其余39只大鼠于手術96小時后打開切口見睪丸、附睪缺血壞死提示建模成功。

3 討論

精索扭轉又稱睪丸扭轉，好發于青少年，每年25歲以下的青少年發病率為1/4000［1］，成人發病率相對較低，Witherington等［2］統計睪丸扭轉患者中成人患者所占比例為39%。目前研究證明一側睪丸扭轉可致同側睪丸的組織學損傷，對側睪丸是否受損在解剖和生理方面都有爭議，雖然Turner等［3］、Tarhan等［4］認為一側睪丸扭轉對對側睪丸沒有影響。但絕大多數學者認為會導致對側睪丸功能受損，關于對側睪丸損傷的發生也存在不同的學說:①交感神經反射學說:部分學者認為雙側睪丸之間的神經反射導致對側損傷。Shiraishi等［5］通過實驗發現一側睪丸扭轉1小時后復位，對側睪丸組織的NO合成酶(NOS)表達增加，睪丸組織萎縮，生精細胞凋亡增加，認為可能存在神經血管舒縮反射導致對側的睪丸發生改變。Otcu等［6］觀察到一側睪丸扭轉導致健側生殖股神經交感神經沖動釋放增加，推測存在一種自主反射機制，由傷害性刺激激活導致對側睪丸損傷。②自身免疫學說:由于血生精小管屏?障的破壞，導致激活了例如抗精子抗體、抗間質細胞抗體等免疫反應，引起對側和患側睪丸功能受損。Rodriguez等［7］通過實驗發現一側睪丸扭轉后復位導致對側睪丸曲精小管和生殖細胞凋亡，認為由于體液和細胞免疫激活巨噬淋巴細胞系統和肥大細胞等引起腫瘤壞死因子、炎癥反應作用導致對側睪丸生殖細胞凋亡。③缺血再灌注損傷:對側睪丸的缺血再灌注損傷導致ROS增加和氧自由基等致細胞線粒體等的脂質過氧化反應引起對側睪丸受損。

關于精索扭轉動物模型的研究歷史較長，但到目前為止尚無公認的方案。Turner等［8］報道取下腹正中切口，拖出睪丸，切斷睪丸引帶，分離周圍筋膜至附睪頭，按要求旋轉睪丸制作扭轉模型后用6－0單絲線縫合睪丸和陰囊，Abasiyanik等［9］取左側腹股溝切口，拖出睪丸，按要求扭轉睪丸，用11－0無損傷縫合線縫合睪丸白膜和陰囊。Merimsky等［10］取腹部切口，拖出精索睪丸，將精索結扎，保證靜脈回流受阻，引起充血性壞死，但又不能完全阻斷睪丸血供，按要求保留結扎線到規定時間后去掉結扎線。以上三種是常見的建立精索扭轉模型的方法，但關于結扎精索后缺血致對側睪丸功能受損的報道不盡相同，Savas等［11］也認為結扎引起的缺血導致對側睪丸功能受損，但Nagler等［12］認為結扎后不會導致對側睪丸功能受損。關于利用縫線固定睪丸建立模型有很多弊端，Lotan等［13］利用流式細胞術分析利用縫線縫合睪丸固定的方法導致生精細胞萎縮的比例超過肉膜囊固定的方法，并且縫線穿過睪丸實質易導致睪丸炎癥性損害，會明顯干擾精索扭轉的實驗相關數據資料。雖然利用線結扎精索的方法沒有破壞血睪屏障，不會導致由于縫線破壞睪丸曲細精管引致精子等抗原溢出引起的免疫性反應，但由于大鼠精索細小，結扎后組織水腫，不易拆除結扎線，結扎程度也不易掌握。鑒于一側精索扭轉導致健側睪丸生精功能受損的機制未明，現三種學說中明確提出了自身免疫學說，所以建立精索扭轉模型時必須避免人為的引起睪丸自身免疫反應。Ritchey［14］等介紹利用睪丸肉膜囊固定術是無損傷的睪丸固定術，筆者采用睪丸肉膜囊固定術用于大鼠精索扭轉模型的建立，最大程度的模擬了該病的自然發病過程，該建模方法國內外未見報道，此種方法建立大鼠精索扭轉模型成功，手術操作簡單、出血少，沒有損傷睪丸實質，對缺血再灌注損傷、免疫學研究等沒有干擾，是建立精索扭轉模型的良好方法，值得推廣。

［1］ 文焰林，鄧顯忠，廖 波.睪丸扭轉的診斷治療進展［J］.中華臨床醫師雜志(電子版)，2011，5(4):1099 －1102

［2］ Witherington R，Jarrell TS.Torsion of the spermatic cord in adults［J］.JUrol，1990，143(1):62 －63

［3］ Turner TT.Acute experimental testicular torsion.No effect on the contralateral testis［J］.JAndrol，1985，6(1):65 －72

［4］ Tarhan F，Yildiz K，Kuyumcuoglu U.An enigma:Contralateral effects of experimental unilateral testicular torsion ［J］.Int Urol Nephrol，1996，28(3):359 －366

［5］ Shiraishi K，Yoshida K，Naito K.Activation of endothelial nitric oxide synthase in contralateral testis during unilateral testicular torsion in rats［J］.Arch Androl，2003，49(3):179 －190

［6］ Otcu S，Durakogugil M，Orer HS，et al.Contralateral genitofemoral sympathetic nerve discharge increases following ipsilateral testicular torsion［J］.Urol Res，2002，30(5):324 －328

［7］ Rodriguez MG，Rival C，Theas MS，et al.Immunohistopathology of the contralateral testis of rats undergoing experimental torsion of the spermatic cord［J］.Asian JAndrol，2006，8(5):576 －583

［8］ Turner TT，Lysiak JJ，Shannon JD，et al.Testicular torsion alters the presence of specific proteins in themouse testis as well as the phosphorylation status of specific proteins［J］.JAndrol，2006，27(2):285－293

［9］ Turner TT，Lysiak JJ，Shannon JD，et al.Testicular torsion alters the presence of specific proteins in themouse testis as well as the phosphorylation status of specific proteins［J］.JAndrol，2006，27(2):285－293

［10］ Abasiyanik A，Dagdonderen L.Beneficialeffectsofmelatonin compared with allopurinol in experimental testicular torsion［J］.JPediatr S urg，2004，39(8):1238 －1241

［11］ Savas C，Ozogul C，Karaoz E，et al.Ischemia，whether from ligation or torsion，causes ultrastructural changes on the contralateral testis［J］.Scand JUrol Nephrol，2002，36(4):302 －306

［12］ Filho DW，Torres MA，Bordin AL，et al.Spermatic cord torsion，reactive oxygen and nitrogen species and ischemia-reperfusion injury［J］.Mol Aspects Med，2004，25(1 －2):199 －210

［13］ Lotan G，Golan R，Efrati Y，et al.An experimental study of the effect of two distinct surgical techniquesoforchiopexy on spermatogenesis and testicular damage in cryptorchid testes［J］.Fertil Steril，2005，84(3):749 －755

［14］ Ritchey ML，Bloom DA.Modified dartos pouch orchiopexy［J］.U-rology，1995，45(1):136 －138