恒電位自動滴定法分析脂肪酶水解活性影響因素

摘 要 利用恒電位自動滴定法分析了脂肪酶（Candida rugosa lipase， CRL）催化橄欖油水解活性的影響因素，確定了適宜的酶活性測定條件，對比了傳統(tǒng)表面活性劑和咪唑類離子液體對酶活性的影響。37 ℃時，與酶蛋白濃度呈線性關(guān)系的酶活性測定范圍為1～14SymbolmA@ mol/min; 酶蛋白濃度范圍為0.01～0.07 g/L；水解反應(yīng)的米氏常數(shù)Km＝4.828×10－4 mol/L，最大反應(yīng)速率3.498×10－3 mol/min；緩沖液pH值 7.2、溫度 37 ℃， 攪拌速度為1200 r/min；PVA、AOT和卵磷脂對酶活的促進和抑制作用與其濃度有關(guān)，最大相對酶活力分別為297%， 255%和154%；離子液體對酶活的最大促進效果為［OMIM］［Br］ ＞［BMIM］［Br］ ＞［EMIM］［Br］＞［OMIM］［BF4］＞［BMIM］［BF4］＞［EMIM］［BF4］； 最大相對酶活力分別可達到1734%， 1709%， 1579%， 1063%， 1030%和960%；陰離子種類對酶活性的影響大于陽離子種類的影響；離子液體的烷基鏈長對酶活性的影響與其濃度密切相關(guān)，烷基鏈越長，其達到最大酶活促進效果的濃度越低。本研究為篩選合適的離子液體種類及濃度提供了快速有效的分析方法。

關(guān)鍵詞 恒電位滴定； 假絲酵母脂肪酶； 酶活性； 離子液體； 表面活性劑