小多孢菌菌絲體中化學成分的研究

楊曉軍

(延安大學化學與化工學院，陜西 延安 716000)

小多孢菌(Micropolysporasp.)是一種放線菌。針對放線菌細胞內外次生代謝產物通常不同這一特點[1]，作者在研究小多孢菌發酵液化學成分的基礎上[2]，對其菌絲體甲醇提取部分化學成分進行了研究，從中分離到5個單體化合物，并對其進行了鑒定。

1 實驗

1.1 材料

小多孢菌，自行從陜西省靖邊縣沙漠中分離得到。

1.2 提取與分離

將發酵96 h的發酵液以3000 r·min-1離心，菌絲體部分用蒸餾水洗滌后，于50℃烘箱中烘干。取4.5 kg干菌絲體分別用丙酮和甲醇超聲提取，將丙酮和甲醇提取液減壓濃縮，其中甲醇提取浸膏15.5 g，將其用200 mL水溶解，溶解部分用1.5 L正丁醇分3次萃取。合并正丁醇萃取液，蒸干得7.2 g粗提物 。上硅膠柱，用氯仿∶甲醇=95∶5洗脫并分段收集得樣品A 54 mg、B 68 mg、C 32 mg。樣品A、B和C繼續上Sephadex LH-20凝膠柱，用甲醇∶水(1∶1)洗脫，各流分以TLC檢測，相同組分合并，從A中分離得到化合物Ⅰ(10 mg)、化合物Ⅱ(13 mg)；從B中分離得到化合物Ⅲ(9 mg)、化合物Ⅳ(7 mg)；從C中分離得到化合物Ⅴ(6 mg)。

2 結果與討論

化合物Ⅰ:白色粉末，m.p.337～ 339℃。ESI(+)-MS：(m/z) 285 [M+H]+；從元素分析得知碳、氫的含量分別為67.52%、4.31%，確定化合物的分子式為C16H12O5，不飽和度為11。IR(KBr),νmax,cm-1：3406(酚羥基)，2832、1615(α，β-不飽和羰基)，1577、1556、1520(苯環骨架伸縮振動)，1273(芳香醚C-O-C伸縮振動)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ, ppm：8.29(1H，s，H-2)，7.43 (1H，s，H-5)，7.38 (2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′)，6.95 (1H，s，H-8)，6.81(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′)，3.88 (3H，s，-OCH3)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ, ppm：174.2(C-4)，157.09 (C-4′)，152.8 (C-7)，152-4 (C-8a)，151.6 (C-2)，146.8 (C-6)，129.9 (C-2′，6′)，122.8(C-3)，122.7 (C-1′)，116.1 (C-4a)，114.8 (C-3′，5′)，104.69 (C-5)，102.7 (C-8)，55.7 (-OCH3)。以上數據與文獻[3～5]基本一致，故鑒定化合物Ⅰ為4′，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮。

化合物Ⅱ：白色粉末狀固體，m.p.121～123℃。ESI(+)-MS：(m/z) 239 [M+H]+，261[M+Na]+；從元素分析得知碳、氫的含量分別為60.46%和5.62%；確定化合物的分子式為C12H14O5。IR (KBr)，νmax，cm-1：3209～2546(-OH)，1684(C=O)，1608、1505、1449 (苯環骨架伸縮振動)，1286、1125(β-C-H)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：12.16 (1H，brs，COOH)，7.63 (1H，d，J=16.2 Hz，H-7)，6.37 (1H，d，J=16.2 Hz，H-8)，6.82 (2H，s，H-2，6)，3.92 (6H，s，3，5-OCH3)，3.90 (3H，s，4-OCH3)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：169.6(COOH)，153.2 (C-3，5)，145.3(C-7)，139.8(C-4)，130.4(C-1)，117.7(C-8)，105.4(C-2，6)，60.2(4-OCH3)，55.5(3，5-OCH3)。以上數據與文獻[6，7]基本一致，故鑒定化合物Ⅱ為3，4，5-三甲氧基肉桂酸。

化合物Ⅲ：無色針狀晶體，m.p.198～200℃。ESI(+)-MS：(m/z) 155 [M+H]+，331 [2M+Na]+；從元素分析得知碳、氫的含量分別為54.62%和3.87%；確定化合物的分子式為C7H6O4。IR (KBr)，νmax，cm-1：3485～2492(-COOH)，1672(C=O)，1610、1528、1451 (苯環骨架伸縮振動)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：12.24 (1H，brs，COOH)，7.35 (1H，s，H-3)，6.64 (1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.27 (1H，d，J=8.2 Hz，H-6)；13CNMR (125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：167.3 (COOH)，151.3(C-4)，145.4(C-2)，122.2(C-6)，121.7(C-5)，116.5(C-1)，115.0(C-3)。以上數據與文獻[8]基本一致，故鑒定化合物Ⅲ為2，4-二羥基苯甲酸。

化合物Ⅳ：無色針狀晶體，m.p.204～206℃。ESI(+)-MS：(m/z)155[M+H]+，177[M+Na]+；從元素分析得知碳、氫的含量分別為54.58%和3.90%；確定化合物的分子式為C7H6O4。IR (KBr)，νmax，cm-1：3395～2467(-COOH)，1678(C=O)，1605、1532(苯環骨架伸縮振動)。1HNMR (500 MHz，DMSO-d6),δ，ppm：7.44(1H，d，J=1.5Hz，H-2)，7.42 (1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6)，6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-5) ；13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)，δ，ppm：170.2 (COOH)，151.4(C-4)，146.1(C-3)，123.9(C-1)，123.1(C-6)，117.6(C-2)，115.8 (C-5)。以上數據與文獻[9]基本 一致，故鑒定化合物Ⅳ為3，4-二羥基苯甲酸。

化合物Ⅴ：無色針狀晶體，m.p.165～167℃，味甜，易溶于水。IR (KBr)，νmax，cm-1：3285(-OH)，1419、1279、1080、1016(C-O) 。將該化合物與甘露醇標準品點于同一硅膠G板上，用醋酸乙酯-吡啶-水(7∶2∶1)展開，取出晾干后用濃硫酸顯色，樣品與標準品Rf值完全一致。且樣品與標準品混合物熔點不降低。故鑒定化合物Ⅴ為甘露醇。

3 結論

通過對小多孢菌菌絲體的甲醇提取部分進行化學成分研究，從中分離到5個化合物，經波譜數據分析，鑒定其結構為4′，7-二羥基-6-甲氧基異黃酮、3，4，5-三甲氧基肉桂酸、2，4-二羥基苯甲酸、3，4-二羥基苯甲酸、甘露醇，5個化合物均為首次從該菌中分離得到。

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