HIV篩查實驗室的質量管理

榮幸 張永旭 張海波

目前我國艾滋病流行形勢嚴峻，盡快發現感染者和患者、及時開展醫療救治工作是我國艾滋病防治工作的當務之急。HIV抗體篩查是發現HIV病毒攜帶者或患者的重要手段。我院在2008年建立了HIV篩查實驗室。為了確保檢驗結果的準確性、嚴謹性，我HIV篩查實驗室強化質量意識，嚴格遵守實驗室SOP，進行室內質量控制，同時還參加省室間質評。現將我室的質量管理進行總結分析如下。

1 建立HIV篩查實驗室SOP文件

HIV篩查實驗室SOP文件包括：①樣品的接收、登記、處理、保存和運輸；②檢測方法和步驟；③試劑使用和保存；④儀器的使用維護和校準；⑤質量控制要求及程序；⑥結果解釋與報告；⑦保密程序；⑧實驗室數據、相關文件記錄與保存；⑨不確定樣品追蹤和處理；⑩實驗室安全防護及實驗室的清理和消毒。SOP的編寫由HIV篩查實驗室工作人員起草，實驗室主任審定，每年修訂一次。所有HIV篩查實驗室工作人員都在SOP文件上簽名表示已經閱讀并掌握了有關內容，在實驗過程中嚴格執行標準操作程序（SOP），不得擅自修改。

2 人員的資質和培訓

HIV篩查實驗室工作人員需經過上崗培訓和在崗持續培訓。上崗培訓內容至少應包括：艾滋病檢測相關基礎知識，艾滋病相關檢測技術及管理要求，實驗操作，質量保證與質量控制，生物安全。要求HIV篩查實驗室工作人員掌握相關專業知識和技能，能獨立熟練地操作，并經考核合格，持證上崗。HIV篩查實驗室工作人員至少每2年1次進行在崗持續培訓，除接受檢測基本培訓內容外，還要求了解相關技術、質控及安全要求的新進展。

3 HIV篩查實驗室的質量管理

3.1 樣品的采集和處理 我室HIV抗體的檢測最常用的樣本是血清，根據需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5m L靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/m in離心15m in，備用。采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于尖銳危險品容器里，妥善處理，防止發生職業暴露。HIV篩查實驗室檢測的篩查陽性樣品應及時送省疾控中心的HIV確證實驗室，篩查陰性樣品，保存1個月。

3.2 篩查試劑和篩查方法 HIV篩查實驗室的篩查試劑必須是經國家食品藥品監督管理局注冊批準、在有效期內的試劑，其中酶聯免疫試劑應批批檢合格，臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑[1]。我室的篩查方法是酶聯免疫吸附法（ELISA）。

3.3 設備維護與校準 HIV篩查實驗室應設立常用儀器的維護及校準制度，以保證檢測工作正常運轉。必須經國家法定部門定期（每年至少1次）校準的儀器包括酶標儀/洗板機，加樣器，溫度計，高壓滅菌器。加樣器、溫濕度計須經計量部門校準。

3.3.1 酶標讀數儀、洗板機 每個工作日核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現象。定期清潔儀器表面，保護光學零件不沾灰塵。每月檢查洗板機洗滌時各孔是否與相應的沖洗頭對位良好；負壓是否符合規定要求。每年檢查、清洗濾光片，如果出現破裂或霉點須更換；根據儀器內具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。實驗過程中發現異常情況，應隨時進行處理，可根據使用情況更換必要的部件。

3.3.2 移液器 每年至少校準1次，發現異常情況應隨時進行校準。移液器的精密度應在廠家說明書規定的范圍內。

3.3.3 冰箱和孵育箱 每個工作日檢查和記錄冰箱溫度，每個工作日檢查記錄孵育箱溫度，并做好記錄。使用經過計量部門校準合格的溫度計測量冰箱和孵育箱的實際溫度。

3.3.4 生物安全柜和高壓滅菌器 每次使用前檢查儀器是否處于正常運轉狀態，并做好記錄。生物安全柜和高壓滅菌器必須每年1次請生產廠家校準。

3.4 HIV篩查實驗室的室內質量控制

3.4.1 試劑盒內部對照 試劑盒內部對照質控品即為試劑盒內提供的陽性和陰性對照血清。試劑盒內部對照用于判斷每次實驗的有效性，但不能作為室內質控品使用。每一次檢測臨床樣品時，必須有試劑盒內部對照，而且只能在同批號的試劑盒中使用。內部對照結果無效，必須重新試驗。

3.4.2 室內質控品 我室只設置一個由省檢驗中心提供的弱陽性質控品，S/CO值在2～4。外部質控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須包含室內質控品，其結果無效，必須重新試驗。

3.4.3 繪制質控圖 質控圖繪制步驟包括：①在常規條件下，對同一批血清連續測定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數和標準差（s），超出2s或3s的數據不應刪除。②將均值（x）和標準差（s）分別在質控框架圖中標示出來。以S/CO值作縱坐標（Y軸），每一批次試驗作橫坐標（X軸），繪制質控圖。③從第21次起，將每次質控血清的檢測結果依次點入該質控框架圖中，檢驗進入質控狀態。

3.4.4 質控規則及其使用 HIV篩查實驗室在報告實驗結果之前必須評價質控數據，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結果來決定。我室應用的是12S和13S規則。①告警（12S）：當外部質控品的S/CO值超出+2s范圍時，系統處于告警狀態，應予注意，是否可以繼續檢測需要進一步觀察。當天的結果一般可以報告。②失控（13S）：當外部質控品的S/CO值超出+3s范圍時，系統處于失控狀態，本次實驗結果不能被接受，可能是系統誤差、隨機誤差或外部質控品穩定性下降所致。③漂移：連續幾次（3～5次）外部質控品的S/CO值都落在均值的一側則稱為漂移，提示實驗條件發生了較大的變化。④趨勢：連續幾次（5～7次）外部質控品的S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數的緩慢改變引起。

質控規則的使用應檢出隨機誤差和系統誤差，多規則質控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。其要點為：出現1次2s范圍的變化時，系統處于告警狀態，應予注意，是否可以繼續檢測需要進一步觀察。

出現下列情況時，應暫停檢測查找原因：①出現1次超出3s范圍的變化；②連續2次出現同一方向超出2s范圍的變化；③連續4次出現同一方向的超出1s范圍的變化；④連續10次結果都在1s范圍內，但落在均值線的同一側。

3.4.5 質控圖的分析及失控處理 實驗室應建立質控圖分析及失控情況處理程序。當質控已有計劃并恰當地執行時，要求可靠的均值和標準差用于計算質控限，將假失控概率降到最低。當出現失控時，對原有外部質控品重復測定或更換新的外部質控品進行測定不是最有效的方法，必須找出問題發生的原因，找出解除問題的方法，并消除原因，防止將來出現同樣的問題。

[1]中國疾病預防控制中心.全國艾滋病檢測技術規范（2009年修訂版）[S].2009：50.