瞬時受體電位通道C3/6與大電導鈣激活鉀通道在腎小球足細胞表面轉運中的作用

由Slo 1基因編碼的大電導鈣激活鉀通道（BKCa）與各種瞬時受體電位通道C（TRPCs）在許多細胞系上共表達，其中包括腎小球的足細胞（臟層上皮細胞）。在本實驗中，通過免疫共沉淀和谷胱甘肽S-轉移酶（GST）pull-down方法證實在分化的足細胞系上的BKCa通道與內源性的TRPC3/6通道相聯系。2種TRPC通道在足細胞上與Slo1共定位，并且在人胚腎(HEK)293T細胞上TRPC通道蛋白與Slo1瞬時共表達。在HEK293T細胞上，經細胞表面生物素化方法以及共聚焦顯微鏡測定，TRPC6的表達可增加Slo1亞基的剪切變體(Slo1 VE?DEC)。經膜片鉗全細胞以及膜內面向外記錄顯示，BKCa通道電流會隨TRPC6的共表達而增大。相反，TRPC3無論對HEK293T細胞上BKCa的表達還是對電流峰值均無影響。在足細胞，經小干擾RNA（siRNA）敲除內源性TRPC6，使內源性Slo1通道細胞表達下降，但是敲除TRPC3卻沒有影響。同時，敲除TRPC6也會降低足細胞BKCa通道的電壓激活外向電流，TRPC3則無此作用。這些資料表明TRPC3/6通道蛋白能與Slo1相結合，并且這種共定位可能成為BKCa通道激活的Ca2+庫。TRPC6通道在足細胞上BKCa通道亞基的表達調控中起重要作用。由Slo1基因編碼（也被稱為KCNMA1）的大電導鈣激活鉀離子通道（BKCa）在大量可興奮或不可興奮組織上均有表達并調控許多生理進程。鈣離子通過結合到BKCa通道C末端的復合位點，將其電壓激活的依賴性轉換為生理水平下的膜電位。BKCa通道通常表現出對鈣離子相對較低的親和力，并且只在鈣離子濃度高于胞漿鈣離子濃度時才會簇狀激活。胞質鈣離子緩沖實驗操作提示BKCa通道的激活至少需要質膜上的鈣離子通道的部分共定位。與此相一致的是，在大腦中表達的BKCa通道顯示能結合在不同類型電壓激活鈣通道的亞基上，從而形成通道復合體，這種排列提供了一種快速負反饋的結構基礎，因為BKCa通道的鈣依賴激活會導致神經元的復極化，電壓激活鈣離子通道的失活以及鈣離子內流的終止。