棘頰雀鯛人工繁殖與育苗的初步研究

鮑 鷹,張 鵬,祝承勇,劉 鳴,徐 瑩,王沿淞

(1.中國科學院 海洋研究所,山東 青島 266071;2.青島絢海水族科技有限公司,山東 青島 266071)

棘頰雀鯛(Premnas biaculeatus)俗稱透紅小丑魚,分布于印度洋和太平洋珊瑚礁海域,屬雀鯛科(Pomacentridae)、棘頰雀鯛屬(Premna),是該屬唯一的種,在觀賞魚市場上它與雀鯛科雙鋸魚屬的其他魚統稱小丑魚。珊瑚礁中的成魚體長10～15cm,但在人工蓄養的條件下,體長至6cm左右就能達到性成熟。橢圓形,全身紫黑色,各鰭紫紅色,體側在眼睛后、背鰭中間、尾柄處有三條銀白色環帶。透紅小丑因其婀娜的游姿和美艷的色彩成為水族愛好者普遍飼養的水中寵物,也成為海水觀賞魚人工繁殖的熱點之一。

目前已發現的小丑魚約有28種。雖然在水族箱中飼養小丑魚的歷史已經有幾十年,而且早在 1978年Ross[1]就報道了黑紅小丑(Amphiprion melanopus)的繁殖習性,但是對小丑魚進行人工繁殖的報道主要集中在近十年中。2001年Ignatius等[2]報道了一種雙帶小丑A.sebae的產卵和仔魚培育技術,2002年Madhu 等[3]報道了黑邊公子小丑(A.percula)的人工繁殖。2005年Ho[4]報道了銀邊小丑(A.perideraion)的繁殖習性和人工培養;滕力平等[5]報道了雙帶小丑的人工繁殖;Aratake[6-7]先后報道了雙帶小丑魚(A.clarkii)卵徑和數量的季節性變化以及卵徑與能量之間的關系。2007年Yasir[8]報道了公子小丑(A.ocellaris)胚胎和仔魚的發育。2009年鮑鷹等[9]報道了紅小丑(A.frenatus)胚胎發育和人工育苗的研究。但是,關于透紅小丑的人工繁殖技術尚未見報道。

在人工培育的條件下,影響海水魚類生長繁殖的主要因子是光照、餌料、水溫、鹽度、pH、氨氮、亞硝酸鹽和硝酸鹽。在具備水處理能力的培育系統中,鹽度和pH是相對穩定的,氨氮、亞硝酸鹽和硝酸鹽是得到控制的,而光照、餌料和水溫在相對寬泛的范圍內皆能滿足成魚的生存,但對繁殖和仔魚的生長卻有特別的范圍。本研究注重于了解透紅小丑魚在繁殖和仔魚培養中的光照、水溫和餌料條件,為進一步的生產性人工繁殖提供理論依據。本實驗于2008年7月～2010年2月在青島絢海水族科技有限公司海水觀賞魚繁殖基地進行。

1 材料與方法

1.1 親魚

親魚于2008年7月購于廣州市的魚店,共49尾,體長為49～98 mm,空運回青島。從打包到解包,整個運輸途中的時間約10 h。運輸中無死亡。其中28條在 20天后配成 14對,分別養在 14個 40cm×40cm×38cm的玻璃水箱中。飼養水箱具有封閉式循環過濾系統,每星期換水 20%。飼養期間水溫(26±1)℃,pH8.0～8.1,鹽度 30～32,氨氮質量濃度低于 0.1 mg/L,溶解氧高于 5.8 mg/L。在水箱上方30cm處用 2只 36 W 普通日光燈照明,每天光照14 h,黑暗10 h。每天按照表1中組3的配方投喂飼料,分別于 9：00時和 15：00時各投喂 1次。至 2009年5月4日,共有9對親魚開始產卵。

1.2 溫度和光照對繁殖的影響

將產卵的9對親魚分成3組,每組3對,調整溫度和光照強度,使第1組的水溫為(26±1)℃、水面光照強度為2 000 lx;第2組的水溫為(26±1)℃、水面光照強度為500 lx;第3組的水溫為(24±1)℃、水面光照強度為2 000lx,3個組的光暗周期都是14L：10D。一個月后,即6月6日開始記錄這3組親魚所產卵的受精率、孵化率、受精卵的孵化時間、初孵仔魚的成活率以及兩次產卵的間隔時間。組 1和組2各連續記錄5個產卵批次,組3因為產卵間隔時間延長,只連續記錄3個產卵批次。

1.3 餌料對親魚產卵的影響

從8月28日開始,將9對親魚的光照強度全部調整為2 000 lx,也分成3組,每組3對。分別飼喂不同的餌料(表1)。從8月28日至11月4日為實驗預備期,期間每對親魚又各產卵 3次,但不做記錄,以消除前次實驗的分組給親魚帶來的影響。11月17日實驗開始,跟蹤記錄每對親魚所產卵的孵化率、初孵仔魚體長和仔魚的成活率,也是連續記錄 5個產卵批次。

表1 透紅小丑親魚的餌料組成Tab.1 Composition of experimental diets for the bloodstoch of Premnas biaculeatus

1.4 受精卵的計量和孵化

種魚產卵后在原池中受精孵化,由親魚看護。水質條件與上述相同。剛產出的卵是淡橘紅色,受精卵在第2天成淡紫紅色,而沒有受精的卵已被親魚清除。所以,在親魚產卵的當日和次日用 OLYMPUS 1030 SW 型水下數碼相機拍下成片附著于缸壁上卵的照片,然后在電腦上對照片上的卵計數,以產卵當日的卵量為產卵量,產卵次日的受精卵量除以產卵量則為受精率。

1.5 仔魚的收集與培育

在仔魚孵出后的1 h左右,用虹吸管將仔魚吸出,移到53cm×42cm×38cm的塑料箱中培養,此時塑料箱中的水質條件要與產卵缸中的完全一致。同時計出仔魚的數量,并取5尾測量體長。仔魚數量除以受精卵量為孵化率。由于卵質對仔魚存活的影響主要在孵化后的2 d內顯現出來,所以在孵化后第3天再計存活仔魚的數量,用以分析卵的質量。

培養仔魚的塑料箱放在120cm×120cm×80cm的水泥池中以水浴的形式保溫。每天吸底并換水25%。日投喂 2次,分別在上午 9：00和下午 3：00。為了研究水溫及餌料生物的營養強化對仔魚的存活及生長的影響,取同批初孵仔魚800尾以上的其中500尾仔魚,在5個上述塑料箱中飼養,每個塑料箱中放100尾初孵仔魚(孵化后12 h)。重復3次,其中培養條件相同的為一組。各組溫度設置和餌料的營養強化見表2。各組的輪蟲密度均保持在10個/mL左右;鹵蟲幼體的密度均控制在5個/mL左右。所有培養箱的pH為 8.0～8.2,鹽度為30～32,氨氮質量濃度低于0.1 mg/L,溶解氧高于5.8 mg/L。最長培養時間為20 d。每天記錄每個培養箱中存活仔魚的數量。

表2 仔魚培養中溫度和餌料強化實驗分組Tab.2 Experimental groups with different larve rearing temperature and diets

1.6 餌料生物的培養

餌料生物包括褶皺臂尾輪蟲(Brachionus plicatilis)和鹵蟲(Artemia sp.)無節幼體。輪蟲的平均體長是(239±36)μm,培育在 2個 100 L的玻璃鋼圓桶中,每天投喂2次,一次投喂小球藻(Chlorellasp.,5×104個/mL),另一次投喂面包酵母(5×106個/mL)。輪蟲在培養期間每天換水 30%。鹵蟲休眠卵購自濰坊安景水產技術公司,采自美國大鹽湖。鹵蟲卵的孵化環境是溫度28℃、鹽度32,孵化18 h后收集。對于需要進行營養強化的輪蟲和鹵蟲幼體,收集后再在同樣的水質條件下飼養6 h,加入5%的魚苗營養強化劑,強化劑的有效成分是高度不飽和脂肪酸(PUFA)。

2 結果與討論

2.1 溫度和光照對繁殖的影響

透紅小丑魚與其他雀鯛科魚一樣具有護卵的習性,不能將親魚和受精卵分開,親魚的培養條件也就是受精卵發育的條件。在水質條件優良的前提下,魚類的繁殖節律主要受水溫和光照周期的影響。從圖1可以看出,在(26±1)℃和14L：10D的光暗周期下,組1(2 000 lx)和組2(500 lx)兩種光照強度對親魚產卵周期(組 1：(13.0±0.8)d,n=15;組 2：(13.7±1.0)d,n=15)和受精率(組 1：(82.7±8.5)%,n=15;組 2：(85.8±6.1)%,n=15)并沒有明顯的影響,但是對受精卵的發育有明顯的影響,具體表現在低光照條件下(組2)受精卵的孵化時間延長((13.4±0.6)d,n=15)、孵化率低((48.9±7.5)%,n=15)和初孵仔魚的存活率極低((9.6±4.5)%,n=15),而2 000 lx的組1的孵化時間是(9.3±0.5)d(n=15)、孵化率是(79.7±7.6)%(n=15)、初孵仔魚存活率達(71.6±12.5)%(n=15)。通過對各批受精卵不同發育時期取樣的顯微觀察,前 7天的發育速度基本上是一致的,光照量對受精卵發育的影響主要發生在胚胎發育的后期。小丑魚仔魚的孵出總是發生在“日落”后的1 h之內,所以,明顯的晝夜交替對仔魚的孵出是至關重要的。在500 lx的低光下,晝夜交替不明顯,可能是造成孵化時間延長的重要原因。仔魚不能及時孵出,在膜內將卵黃物質消耗殆盡,在混合營養期沒有及時得到外源性營養,則是造成初孵仔魚大量死亡的直接原因。本實驗的結果說明,能滿足親魚產卵的光照條件不一定能滿足受精卵的正常發育和孵化。其原因可能是后期胚胎的眼組織發育尚不完善,對光照的敏感度遠遠不如親魚。

關于產卵間隔時間,本實驗中有一個現象值得關注：先后有 3對親魚在受精卵還沒有孵出就又產卵。這3次“非正?！碑a卵都發生在低光照量、受精卵延遲孵出時,說明在正常的環境中,小丑魚的產量間隔時間比受精卵的發育時間略長,在前一批受精卵孵化后數天再次產卵,這樣的繁殖節律是最高效的。但是,親魚體內卵細胞的發育和排放,并不受前批卵是否孵出的影響,只是與親魚本身的生活環境有關。只要水溫、光周期、餌料等條件適合,親魚就會按照固有的產卵節律產卵。上述三次產卵是正常的,只是產卵時前批卵尚未孵化,才出現兩批卵重疊的非正常現象。

溫度的變化則對親魚產卵和胚胎發育都有明顯的影響。從圖1可以看出,當溫度下降到24℃左右時,親魚的產卵間隔時間明顯延長((21.4±4.8)d,n=9),而且各對親魚的產卵間隔時間相差很大,表現出親魚處在適合產卵條件的邊緣狀態;孵化率是(42.1±5.3)%(n=9)、孵化時間延長到(13.8±0.4)d(n=9)、孵化后第3 天成活率下降到(16.0±7.3)%(n=9)。大部分珊瑚礁所處的赤道海域通常只有很小的水溫波動,如太平洋赤道海域水溫的季節性變化只有 4～6℃[10],因此,較小的溫度變化就會對透紅小丑的繁殖產生較大的影響。

3個組的受精卵依次是(82.7±8.5)%(n=15)、(85.8±6.1)%(n=15)、(74.4±7.1)%(n=9),差別不大。說明只要水溫和光照條件滿足親魚產卵,即使是處于適合條件的邊緣,對受精率的影響并不大。

圖1 水溫和光照量對棘頰雀鯛繁殖的影響Fig.1 Effects of temperature and photoperiod on the reproductive performance of Premnas biaculeatus broodstock

2.2 飼料的營養成分對卵質的影響

親魚培養中的另一個重要因素是餌料。餌料是種魚性腺發育的物質基礎,餌料的成分決定了卵子的質量,從而影響到受精卵的孵化率、初孵仔魚的體長和初孵仔魚的成活率。近20年來,親魚的營養問題引起了各國學者的關注[11]。許多研究資料表明,親魚飼料的營養質量是影響生殖性能的主要因素之一,它影響產卵量、精卵質量和仔魚的活力。親魚飼料中的脂類含量從 12%增加到 18%時,點斑藍子魚受精卵的孵化率明顯提高,仔魚的存活時間延長了14 d[12]。增加飼料的n-3 HUFA、特別是DHA含量,可顯著提高鱸魚仔魚的重量及其抗滲透休克的能力[13]。牙鲆正常仔魚率、孵化3 d后仔魚存活率都與飼料中 n-3 HUFA 水平(0.4%～2.1%)呈正相關關系[14]。本實驗的結果是相似的。從圖2可以看出,第3組親魚所產卵的孵化率((85.6±6.5)%,n=15)和初孵仔魚成活率((61.6±8.2)%,n=15))要比另外二組明顯高;第3組初孵仔魚的平均體長是(4.0±0.2)mm(n=15),而第1和第2組初孵仔魚的平均體長是(3.4±0.1)mm(n=15)和(3.7±0.2)mm(n=15)。組3和組2、組 1餌料的主要區別是添加了親魚營養強化劑,其主要有效成分是高度不飽和脂肪酸(PUFA)。組 2的飼料中有沙蠶,其 HUFA的含量相對的要比蝦肉和魷魚肉高,所以孵化率((40.8±5.4)mm,n=15)、初孵仔魚存活率((17.5±4.4)%,n=15)和仔魚體長都要略高于組 1(孵化率：((31.0±3.9)%,n=15);初孵仔魚成活率：((12.5±4.6)%,n=15)。

圖2 親魚餌料的營養成分對受精卵孵化率和初孵仔魚的影響Fig.2 The effect of broodstock diets on the hatch rates of fertilized eggs and the new-hatched larvae

2.3 仔、稚魚的培養要點

初孵仔魚具有極強的趨光性,能夠快速游動尋找食物,而體內的卵黃基本上已被吸收。仔魚孵化后9～11d進入稚魚階段,體長為(4.6～6.9)mm,平均為((5.8±1.1)mm,n=20);孵化后 16～18 d,魚苗已轉入幼魚階段,體長為(8.8～12.1)mm,平均為((10.6±1.8)mm,n=20),整個魚體呈現深棕紅色,眼睛后面出現第1條白色條紋,隨著幼魚的生長,前后背鰭之間和尾柄上的白色環紋將逐漸出現。

在人工培養條件下,最容易影響仔魚存活和生長的因子是水溫和餌料的營養。

從圖3可以明顯地看出,雖然組 1、組4、組 5都用了強化餌料,但是 24℃和 28℃皆不適合仔魚的生長,到孵化后第4天已經死亡過半,到第10天幾乎全部死亡,而在 26℃可以達到 63%的存活率。這也說明透紅小丑的繁殖只能在非常狹窄的溫度范圍內進行。Olivotto 等[15]在對一種生活在珊瑚礁的小型神仙魚Centropyge flavissimus的研究中也得到了相似的結果：仔魚在 28℃能夠存活,但是僅僅下降到 26℃就不能存活了。狹窄的適溫范圍應該和珊瑚礁魚所適應的生活環境有關。

圖3 營養強化對仔、稚魚成活率的影響Fig.3 The effect of diets on the larvaes of Premnas biaculeatus

從圖3還可以看出,透紅小丑初孵仔魚對不飽和脂肪酸的依賴非常高。組 3的輪蟲沒有用不飽和脂肪酸強化,仔魚的死亡集中發生在孵出后的第3天到第7天,到第8天已經沒有存活的仔魚了。從組1和組2的比較可以看出鹵蟲幼體強化與否對仔稚魚的影響還是比較明顯的,組 2的仔魚在攝食強化的輪蟲后順利發育到稚魚,但是在攝食未經強化的鹵蟲幼體后就陸續死亡。因此人工繁殖時在稚魚期對餌料進行強化是必需的。

一般來說,在魚的人工繁殖中,開口餌料是十分重要的。開口餌料的適時適量供應成為仔魚成活的關鍵因素。透紅小丑的初孵仔魚完全可以吞食 L型輪蟲,這給人工育苗提供了很大的方便,因為輪蟲的培養,特別是L型輪蟲的培養非常容易。

[1]Ross R M.Reproductive behavior of the anemonefishAmphiprion melanopuson Guam [J].Copeia,1978,1：103-107.

[2]Ignatius B,Rathore G,Jagadis I,et al.Spawning and larval rearing technique for tropical clown fishAmphiprion sebaeunder captive condition [J].Journal of Aquaculture in the Tropics,2001,16(3)：241-249.

[3]Madhu K,Madhu R.Successful breeding of common clownfishAmphiprion perculaunder captive conditions in Andaman and Nicobar Island [J].Fish Chimes,2002,22(9)：16-17.

[4]Ho Y-S,Chen C-M,Chen W-Y.Breeding behavior of the pink clownfish (Amphiprion perideraion) and its larval rearing study [J].Jour Fish Soci Taiwan,2005,32(1)：25-26.

[5]滕力平,楊擔光,李曉光,等.二線小丑魚的人工繁殖[J].水產科學,2005,24(2)：26-27.

[6]Aratake H,Naknzono A.Relationship between egg size and its energy content in anemonefish,Amphiprion clarkiai[J].Sci Bull Fac Agric Kyushu Univ,2005,60(2)：203-206.

[7]Aratake H,Nakazono A.Seasonal change of egg size and number in the anemonefishAmphiprion clarkiiat two different localities in the temperate Kyushu,Japan [J].Sci Bull Fac Agric Kyushu Univ,2006,61(1)：83-91.

[8]Yasir I,Qin J.Embryology and early ontogeny of an anemonefishAmphiprion ocellaris[J].J Mar Biol Assoc U K,2007,87(4)：1 025-1 033.

[9]鮑鷹,張鵬,祝承勇,等.紅小丑人工繁殖和育苗的初步研究[J].海洋科學,2009,33(2)：5-9.

[10]McGregor G R,Nieuwolt S.Tropical clinatology.An Introduction to the Climates of the Low Latitudes [M].NY：Wiley,1998：39.

[11]李遠友,禹龍香.親魚脂類營養對魚類生殖性能的影響[J].水產養殖,2006,27(1)：1-5.

[12]Duray M,Kohno H,Pascual F.The effect of lipid enriched broodstock diets on spawning and on egg and larval quality of hatchery-bred rabbitfishSiganus guttatus[J].Philipp Sci,1994,31：42-57.

[13]Aby-ayad S M E A,Melard C,Kestemont P.Effects of fatty acide in Eurasian perch broodstock diet on egg fatty acid composition and larvae stress resistance [J].Aquacult Int,1997,5：161-168.

[14]Furuita H,Tanaka H,Yamamoto T,et al.Effects of n-3 HUFA levels in broodstock diet on the reproductive performance and egg and larval quality of the Japanese flounder,Paralichthys olivaceus[J].Aquaculture,2000,187：387-398.

[15]Olivotto I,Holt S A,Carnevali O,et al.Spawning,early development,and first feeding in the lemonpeel angelfishCentropyge flavissimus[J].Aquaculture,2006,253：270-278.