可溶性CD40L 、MMP-2 、MMP-9 與急性冠脈綜合征的關系

王 寧,康治臣

（1.長春市中心醫院 心內科,吉林 長春 130061;2.吉林大學第二醫院,吉林 長春 130041）

急性冠狀動脈綜合征（ACS）是引起冠心病患者死亡及致殘的主要原因,各種致炎因素導致的炎癥反應破壞冠狀動脈斑塊纖維帽的穩定性,使斑塊發生破裂、出血,繼而血栓形成是ACS發生的主要原因[1]。CD40 L屬于TNF超家族成員,是相對分子質量為39×103的Ⅱ型跨膜蛋白,由261個氨基酸殘基組成,其三維結構類似于TNF2α。sCD40L由膜結合型CD40L水解而成。其質量濃度可反映體內CD40 L水平[1]。sCD40 L水平與急性心血管事件相關sCD40 L水平與急性心血管事件相關。提示sCD40L有可能成為識別不穩定斑塊、評估預后的指標MMPs是作用強大的蛋白酶系,可降解幾乎所有的細胞外基質（ECM）,其在斑塊內的活性增高使基質成分降解增多,從而降低斑塊的穩定性,促使易損斑塊的形成,進而導致ACS的發生。MMP2特異性地降解膠原蛋白和基底膜,在斑塊基質成分的降解中發揮主要作用。MMP-2、MMP-9,在冠脈斑塊破裂區域表達的增強,主要通過降解細胞外基質而削弱纖維帽促進斑塊破裂[2],而導致冠心病的發生發展。本文探討血清sCD40L、MMP-2和MMP-9的水平在ACS中的致病作用,旨在為探討冠心病的防治提供實驗依據。

1 資料和方法

1.1 研究對象 選擇2008年12月-2009年12月在長春市中心醫院心內科ACS住院患者60例,其中男40例,女20例,年齡 42-83（58.1±9.3）歲。其中不穩定型心絞痛（UA）42例,急性心肌梗死（AM I）18例。入選標準:①急性心肌梗死的診斷根據WHO標準:持續典型的胸痛30 min以上;典型心電圖動態變化:心肌酶譜或肌鈣蛋白的動態變化。具有以上任何兩項可確診。②不穩定性心絞痛的診斷標準:心絞痛癥狀伴有ST段壓低或T波改變和或肌鈣蛋白的陽性,但無心肌壞死的EKG及心肌酶學動態改變。凡有下列情況者予以剔除:①腦卒中;②嚴重的肝、腎功能不全;③感染性疾病;④近期使用炎癥抑制藥物如非甾體類消炎鎮痛藥、類固醇類藥物等。另選擇與ACS組相匹配的同期健康體檢者40例,其中男 28例,女 12例,年齡 45-79（59.1±11.2）歲。

1.2 方法 分別在入院24 h內采集晨起空腹肘靜脈血2m l,常溫下1 500 rpm離心15m in,取血清,標本-70℃冰箱保存待測。血清MMP2、sCD40L、MMP-9測定︰采用 ELISA檢測血清中 sCD40L、MMP2、MMP-9濃度,酶聯免疫反應試劑盒由北京晶美生物科技有限公司提供。嚴格按說明書進行操作隨診:隨訪期為住院期及出院后其一個月時間。觀察心血管事件:頑固性心絞痛（指在充分應用各種藥物等情況下,每天仍胸痛發作1次以上）AM I,心源性猝死。

2 結果

2.1 各組血清 sCD40L、MMP-2、MMP-9水平的比較 EL ISA 法檢測顯示,血清sCD40L、MMP-2、MMP-9的水平比較,UA組、AM I組患者均顯著高于正常對照組（P＜0.01）,見表1。

表1 各組血清sCD40L、MMP-2、MMP-9水平比較

2.2 SCD40L、MMP-2、MMP-9水平與 ACS近期預后的關系 隨訪期平均30d,共出現心血管事件10例,其中頑固性心絞痛7例,心源性猝死1例,AM I 3例,22例sCD40L、MMP-2、MMP-9增高組共出現心血管事件8例,31例正常組為3例,P＜0.01。

3 討論

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的病理基礎是動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）。AS是一種多種免疫因素參與的慢性炎性疾病,免疫和炎性反應在AS的發生、發展過程中起著重要作用。CD40/CD40L是免疫和炎性反應中的重要信號轉導系統,存在于AS相關的巨噬細胞、平滑肌細胞、血管內皮細胞和T細胞）及血小板中[3,4]。CD40L是一種跨膜蛋白,是腫瘤壞死因子（TNF）超基因家族中的一員,存在于T淋巴細胞及血小板表面。CD40L分為可溶性及膜結合性兩種,sCD40L由膜結合型CD40L水解而成。95%以上的sCD40L來源于血小板,其質量濃度可反映體內CD40L水平,二者均可與B淋巴細胞、巨噬細胞、內皮細胞及血管平滑肌細胞的上的CD40相結合產生一系列的炎癥反應。目前認為,CD40L是各種炎癥反應免疫調節的信號通路[5,6],與動脈斑塊的形成有密切關系。CD40L能誘導巨噬細胞表達炎癥介質,而導致炎癥反應,眾多研究發現sCD40L可激活斑塊中的巨噬細胞、內皮細胞以及T淋巴細胞分泌產生在動脈粥樣硬化及其斑塊穩定中起關鍵作用的成分,如基質金屬蛋白酶等。因此,CD40-sCD40L激活能加速動脈粥樣硬化的發生和發展,并觸發斑塊不穩定,甚至破裂,導致ACS的發生[7]。因此,該研究從另一側面進一步支持炎癥反應和免疫活化在ACS發病過程中起重要作用。冠狀動脈粥樣硬化斑塊的易損性可導致ACS的發生,而斑塊纖維帽中SMC合成ECM減少和蛋白溶解酶降解ECM的增加,是斑塊破裂的內在主要原因。MMPs是一組同源的以元活性酶原形成分泌的Zn2+依賴性肽鏈切酶。需在中性PH條件下Ca2+參與,酶切斷N末端,被激活來發揮作用。在體內主要參與細胞外基質（ECM）的降解或重構,動脈硬化（AS）、炎癥反應,腫瘤的擴散轉移,缺血、缺氧損傷等各種生理及病理過程[2]。MMPs可降解所有ECM成分,削弱纖維帽的機械強度。研究發現,在不穩定斑塊,特別是易發生破裂的斑塊肩部區域及脂核邊緣,MMP2、MMP-9的含量較高,活性增加,是造成斑塊不穩定并引發ACS發生的主要降解酶[3]。MMP-2、MMP-9參與AS斑塊局部炎性細胞的浸潤。在此過程中,MMPs對AS斑塊內皮細胞基底膜的降解,可導致內皮細胞防御功能下降,從而導致血管壁的損傷。本研究結果顯示,ACS患者sCD40、MMP-2、MMP-9L水平顯著高于正常對照組,提示sCD40L、MMP-2、MMP-9可能參ACS的發生,這一結果與國內外研究一致[8,9]。在ACS患者中,AM I患者sCD40L、MMP-2、MMP-9 水平較UA 患者水平高,其機制可能是急性心肌梗塞患者粥樣斑塊相對更不穩定 ,炎癥更活躍的緣故。sCD40L、MMP-2、MMP-9水平在一定程度上反映了ACS病情的嚴重性[9,10]。在1個月的近期隨訪中,觀察到ACS患者,sCD40L、MMP-2、MMP-9增高組在住院后1個月內的心血管事件發生率較sCD40L、MMP-2、MMP--9正常組高,說明 sCD40L、MMP-2、MMP-9與 ACS的嚴重性及預后有關,并可將其作為動脈粥樣硬化斑塊不穩定的標志。因此,檢測 sCD40L、MMP-2、MMP-9水平對冠心病患者的病情判斷或預后估計有著一定的臨床意義。

[1]AndréP,Nannizzi-Alaimo L,Prasad SK,et al.Platelet-derivedCD40L:the switch-hittingp layer ofcardiovascular disease[J].Cir-culation,2002,106（8）:896.

[2]Ikeda U,Shimada K.Matrixmetallop roteinses and coronary arterydiseases[J].Clin Cardiol,2003,26（2）:55.

[3]Davies MJ.Reactive oxygen species,metalloproteinases,and plaque stability[J].Circulation,1998,97（24）:2382.

[4]Hou G,Mulholland D,GronskaMA,etal.Type VIII collagen stimulatessmoothmusclecellmigration andmatrixmetalloproteinase synthesisafterarterial injury[J].Am JPathol,2000,156（2）:467.

[5]龔非力,賈思東.醫學免疫學[M].北京:科學出版社,2003:80.

[6]Mach F,Schondeck U,Sukhowa GK,et al.Functional CD40 ligandisexp ressed on human vascular endothelial cells,smoothmusc le cellsand macrophages imp lication for CD40 ligand signaling in athero-sclerosis[J].Proc N atlAcad Sci USA,1997,94（5）:1931.

[7]Lee Y,LeeWH,Lee SC,et al.CD40L activation in circulating p late-lets in patientswith acute coronary syndrome[J].Cardiology1999,92（1）:11.

[8]彭道泉,趙水平,李毅夫,等.急性冠狀動脈綜合病患者血漿CD40L變化及其與可溶性血管粘附分子關系[J].中華心血管病雜志,2002,30（3）:141.

[9]Aukrust P,MullerF,Ueland T,et al.Enhanced levels of solubleandMembrane-Bound CD40L Ligand in PatientsWith UnstableAngina[J].Circulation,1999,100:614.

[10]嚴重川,吳宗貴,張玲珍,等.CD40L高表達與不穩定型心絞痛之間的關系.中國動脈硬化雜志,2001,9（5）:409.