全自動加樣儀的應用

李 榮 龐麗麗 杜新鳳

（廣西玉林市中心血站，廣西 玉林537000）

全自動加樣儀的應用

李 榮 龐麗麗 杜新鳳

（廣西玉林市中心血站，廣西 玉林537000）

全自動加樣儀；自動化；血液檢測

隨著人們對安全輸血問題的日益重視，采供血機構的質量保證工作已成為其關注焦點，全面質量管理的理念使血液的質量保證已不局限于對其最終的檢查，而依賴于對生產過程的每一個環節加以控制。自動化設備如全自動加樣儀解決了大量標本加樣和數據傳輸的問題，通過實驗室管理系統軟件與其他檢測設備連接，最終與局域網聯網，使操作過程標準化、規范化，大大減輕了工作人員的工作強度、降低職業暴露的機會并減少了人為誤差，提高了實驗室檢測的準確度和特異性，有效的保證血液檢測質量。筆者根據實際工作經驗并參照有關文獻，從全自動加樣儀的概況、發展、應用等方面加以綜述。

1 ELISA試驗

盡管在20世紀90年代初期，由于以聚合酶鏈反應（PCR）技術為代表分子生物學水平技術的發明，人們紛紛預測，酶免試驗將被更高靈敏度、數百萬級信號放大的、病原體水平檢測的核酸檢測（NAT）所取代。ELISA試驗仍然是傳染病血清學標志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch）、腫瘤標志物及內分泌等各種臨床免疫指標檢測的主導技術，它檢測的是免疫抗原或抗體，NAT檢測的是病毒核酸，兩個方法對同一份標本的檢測是互補的[1]，NAT法雖然靈敏度更高，但據報道抗-HCV陽性而HCV核酸檢測陰性的血液亦能使受血者感染，也就是說NAT亦會有部分弱陽性標本漏檢；HIV DNA測不出不能說明HIV感染已消失，因為HIV還存在于人體的CD4淋巴細胞和其他細胞、組織、器官中，而且在停藥治療后HIV RNA水平還可能反彈，所以抗-HIV陽性（經確證）在目前還是我國診斷HIV感染的主要指標。我們應當充分利用兩種方法優勢互補作用用于血液篩查，不能互相代替[2,3]。

全自動加樣儀與全自動酶免分析儀(后處理)——如瑞士Hamilton公司制造的FAME、Tecan公司生產的BEPⅢ等連接，這就是全自動酶免分析系統，實現了ELISA試驗從標本加樣、稀釋到酶標孵育、洗板、加試劑、讀數和結果打印全自動。

2 病毒核酸檢測（NAT）

隨著科學技術的發展，輸血傳染病的檢測技術也在不斷進步，如化學發光免疫法（CLIA）、NAT也逐步引進和應用。核酸檢測能大大縮短窗口期、避免病毒變異和免疫沉默性感染等造成的漏檢，在歐美等發達國家，NAT已成為常規血液篩查技術。我國自2000年起即已有人對獻血者HCV NAT篩查的必要性和可行性做了初步探討，現在國家也將NAT納入新的輸血技術操作規程，部分采供血機構也開展一些病毒的核酸檢測。鑒于我國各地采供血機構發展不平衡，在獻血者中全面推廣應用NAT技術尚存在技術、資金等問題。但血液行業是一個特殊的行業，正如美國AABB出版的《新千年血液》所言：“極少有其他某個行業能夠像血液制品行業這樣，始終處于公眾、新聞媒體、乃至政府高官的密切關注之下。當發生血液安全問題時，往往激發出極其獨特的情緒化反應，其強度常超過其他更大的公共衛生問題[4]?！蔽覈晒┭獧C構實施HBV、HCV、和HIV病毒核酸檢測或許是發展方向，但有關技術問題如試劑的靈敏度和實驗的準確性、標本匯集檢測的限度等還有待解決。

NAT血液篩查主要有單個樣品（ID-NAT）和多樣品匯集（MPNAT）兩種模式，目前大多采用多樣品匯集模式[5]，這是由我國的國情所決定。有研究[6]在已有加樣設備基礎上開發自動標本匯集，在MPLC上進行全自動核酸提取，最后在COBAS AMPLICOR上擴增和檢測，實現從標本準備、核酸提取及擴增和檢測一體化和自動化。

3 ALT檢測

對獻血者血液丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotrasferase，ALT)檢測的意義雖然存在很大的爭議，但ALT目前仍是我國采供血機構獻血者必查項目之一?！东I血者健康檢查要求》[7]規定酮體粉法只限于ALT初檢使用，復檢必須用賴氏法或速率法。由于全自動生化分析儀價格昂貴還不能在中小血站普遍推廣，所以不能使用FICC推薦的速率法，多數還是采用賴氏試管法，操作煩瑣，費工費時，不適宜大批量標本的檢測，而且無法對原始數據進行網絡化管理。利用全自動加樣器加樣，結合微孔板、酶標儀以及局域網從而實現ALT的自動化檢測。與傳統賴氏法比較，微孔板法可實現自動化，具有測量速度快、操作簡便的優點，雖然由于標本、試劑用量小容易出現誤差，且受脂肪血和溶血的影響較大[8]，但只要加以制，還是能滿足質量要求?，F在多數中小血站都采用賴氏微孔板法檢測獻血者ALT。

4 血型自動化檢測

以前采供血機構實驗室多使用手工法玻片（紙板）法或試管法作ABO正反定型和RhD血型篩查，操作煩瑣，每天大量的標本做得手酸眼花，錯型、誤報等差錯時有發生。利用全自加樣儀處理樣本，用微孔板法對獻血者血液樣本進行ABO及RhD血型篩查，血液標本、試劑紅細胞、標準血清等均由全自動加樣儀完成，即便是用人工判讀結果，也減少了大量煩瑣的手工操作，實現血型檢測的自動化；由于全自動加樣儀加樣精度高，保證了實驗結果的重復性，實現了血型檢測的標準化[9]。如果再配以全自動血型分析儀（如國產愛康智能血型分析儀），利用其判讀系統所具有的自動讀取自動加樣儀生成的條碼，并有影像記錄，保存原始數據，便于查詢和溯源；通過局域網自動發布結果，實現了血型檢測的數字化和規范化，避免人為因素對血型檢測結果的影響，提高工作質量，并可減輕勞動強度，提高工作效率，還可大量節約試劑[10]，尤其適合采供血機構大批量標本血型篩查。有關權威人士認為[11]，自動化檢測可檢出ABO亞型及相應鹽水不規則抗體，從而保障輸血的安全性和有效性，但微孔板的自動判讀與肉眼判斷結合還是必須的，特別是亞型。

5 標本留樣存檔

我國《血站管理辦法》第三十一條規定：血清（漿）標本的保存期應在血液使用后2年。一般血站保存的血樣為血袋小辮，先離心后熱合，由于小辮軟而不直，即使充分離心，仍有血樣中紅細胞不能完全下沉的現象，致使保存的血漿辮中混雜紅細胞，冷凍后溶血，影響標本質量。采用保存板（Archive plare，孔深35mm，孔容量1.5mL）結合全自動加樣儀和條形碼技術留取血樣（血清/漿），通過電腦記錄留樣信息并生成詳細的留樣文件，使血樣保存板和加樣文件形成一一對應的關系，確保留樣的準確、可靠，便于查找，具有簡單快捷、效率高且質量好、保存量大的特點[12,13]。更重要的是微板留樣確保檢測標本與留樣標本一致，對實驗室來說是一種有效的自我保護。但有報道[14]微板留樣會造成弱陽性標本OD值顯著下降，因此在微板留樣的同時不能舍棄血袋上的小辮標本。

6 其 他

DNA純化、PCR加樣、DNA測序加樣、克隆快速篩選分配、藥物篩選自動分配、梅毒凝集實驗等。

發展到今天的全自動加樣儀其功能越來越功能強大，能滿足醫院和采供血機構的不同需求，可使用96孔板、384孔板、120孔血型板或非標準微板、試管、試紙等。完全可以有理由相信，全自動加樣儀以其高度智能化和自動化的特點，將在現代實驗室得到更廣泛應用。

[1]吳劍媚,張慶武.核酸檢測技術在血液病毒篩查中的應用[J].臨床輸血與檢驗,2008,10(1):86-90.

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[3]季陽,鄭忠偉,蔡輝,等.病毒血清學檢測與核酸檢測技術在輸血傳染病篩查中的應用[J].中國輸血雜志,2010,23(6):413-416.

[4]任芙蓉.實施血液病毒核酸檢測策略的相關問題探討[J].中國輸血雜志,2010,23(1):1-3.

[5]蔣昵真,黃成垠,肖建宇,等.獻血者HBV、HCV、HIV的單人份核酸檢測[J].臨床輸血與檢驗,2010,12(3):208-210.

[6]葉賢林,周一炎,楊立新,等.血液HBV DNA全自動檢測及基因分型分析[J].中國輸血雜志,2005,18(2):94-96.

[7]中華人民共和國國家標準《獻者健康檢查要求》,GB18467-2001[S].2001.

[8]陳惠民,吳麗惠.丙氨酸氨基轉移酶3種方法檢測結果比較[J].中國輸血雜志,2007,20(56):382-383.

[9]趙樹銘,張循善.關于紅細胞ABO血型鑒定規范化的思考及建議[J].中國輸血雜志,2009,22(6):431-433.

[10]王福成,施之雍,蔡雋,等.梯形微板技術在ABO血型檢測中的應用[J].中國輸血雜志,2007,20(1):53-54.

[11]周筱嫣,向東,徐忠,等.ABO血型自動化檢測[J].中國輸血雜志,2010,23(3):205-206.

[12]潘海平,吳玉清,趙林.應用全自動加樣儀留取血樣的探討[J].中國輸血雜志,2007,20(2):142-143.

[13]曹慶宏,王子成,朱廣亮,等.保存板在保存血樣中的應用[J].中國輸血雜志,2001,14(6):374.

[14]王旭安,方昌志,簡雪平,等.保存后的微板留樣血液檢測結果分析.中國輸血雜志,2010,23(4):304.

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1671-8194（2011）20-0171-03