宮頸病變中HPV16/18、p16INK4及CK17的表達研究

程文德 蔡芬蘭 王偉源 冷敏芳 陳艷芬 林梅英

（深圳市觀瀾人民醫院，廣東 深圳 518110）

宮頸癌是婦女中常見的多發性生殖道惡性腫瘤，在全世界范圍內其發病率和死亡率都較高，嚴重影響女性的生活質量[1]。近年來，我國的發病率一直居高不下并有逐漸上升的趨勢，已經成為我國女性惡性腫瘤的第二大殺手。本病的形成必須經過一系列病變，如在初期是不成熟的病變，即子宮頸不典型不成熟鱗狀化生（atypical immature metaplasia，AIM），隨后細胞逐漸分化成熟，呈子宮頸上皮內病變（cervical in traepithelial neaplasia，CIN），按級別分為低級別鱗狀上皮內病變（LSIL）及高級鱗狀上皮內病變（HSIL）[2]等。針對不同的宮頸病變，其治療方法和預后均不相同。因此明確患者的病變程度對于治療和預后都起著至關重要的作用。本文收集120例2007至2010年在深圳市觀瀾人民醫院病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蠟塊，探討以上宮頸病變中HPV16/18、p16INK4及CK17表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2007至2010年在深圳市觀瀾人民醫院共收集到120例病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者及其病理蠟塊，年齡34～62歲，平均年齡（54.3±5.3）歲，其中AIM組36例，LSIL組44例，HSIL組40例。AIM組、LSIL組和HSIL組的基本情況如年齡、性別、病程等各項指標經統計學分析，差異均無統計學意義，具有可比性。

1.2 入選標準

①經病理診斷為AIM、LSIL及HSIL的患者的病理蠟塊；②以上病例均根據宮頸上皮內病變的診斷標準及Crum對AIM的定義進行分組[3]；排除標準：①合并肝、腎功能不全等其他嚴重的全身性疾病；②患有其他嚴重的急性或慢性疾病；③合并女性除宮頸癌之外的腫瘤患者，如乳腺癌、卵巢癌等；④合并其他病毒性感染等[2]。

1.3 檢測方法

①p16INK4及CK17表達檢測：常規制片后采用免疫組織化學及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中p16INK4A及CK17蛋白表達[1,2]；②HPV16/18的檢測：采用核酸分子快速雜交儀檢測，HPV16、HPV18是HPV感染的高危型別[3]。

1.4 判定標準

p16INK4A：細胞核中出現棕褐色染色為陽性細胞；CK17：以胞質棕黃色為陽性；按陽性細胞所占的百分數分為：（-）：0%～1%；（+）：1%～5%；（++）：5%～25%；（+++）：＞25%[1-3]

1.5 研究方法

采用SPSS18.0統計軟件進行統計學分析，率的比較采用卡方檢驗，計量資料二者之間的比較采用t檢驗，計量資料以均數±標準差（±s）表示。

2 研究結果

2.1 CK17表達情況的比較

采用免疫組織化學及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中CK17蛋白表達情況，結果詳見表1，AIM組陽性率較高，為100%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較低，為13.1%（11/84），經過卡方檢驗，χ2=17.9，P＜0.01，差異有統計學意義；LSIL組和HSIL組陽性率分別為11.4%、15%，經過卡方檢驗，χ2=1.9，P＞0.05，差異無統計學意義。即AIM組陽性率明顯高于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組陽性率無明顯差異。

2.2 p16INK4表達情況的比較

采用免疫組織化學及原位雜交方法檢查120例宮頸病變中p16INK4蛋白表達情況，結果詳見表2， AIM組陽性率較低，為11.1%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較高，為100%，經過卡方檢驗，χ2=18.3，P＜0.01，差異有統計學意義；LSIL組和HSIL組陽性率均為100%，即AIM組陽性率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）。

2.3 HPV16/18感染情況的比較

采用核酸分子快速雜交儀檢測120例宮頸病變中HPV16/18感染情況，結果見表3， AIM組陽性率較低，為22.2%，CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）陽性率較高，為80.8%（68/84），經過卡方檢驗，χ2=12.6，P＜0.01，差異有統計學意義；LSIL組和HSIL組陽性率分別為79.5%和82.5%，經過卡方檢驗，χ2=1.3，P＞0.05，差異無統計學意義。即AIM組檢出率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組檢出率無明顯差異。

3 討 論

目前對宮頸癌的病因并不明確，大量流行病學資料研究了多種高危因素，主要與女性體內激素等內分泌水平、病毒感染等密切相關。有大量流行病學資料表明HPV與女性宮頸癌的發生密切相關，其陽性率可高達90%[3]，尤其是高危型的HPV16/18與宮頸病變的關系更為密切。宮頸癌的發生是一個多因素、多階段的長時間病變，初期是不典型不成熟鱗狀化生（AIM），細胞逐漸分化成熟，呈子宮頸上皮內病變（CIN），包括低級別鱗狀上皮內病變（LSIL）及高級鱗狀上皮內病變（HSIL）。在形態學中AIM 和CIN的表現相似，容易導致誤診。但各病變中p16INK4A、CK17蛋白表達情況各不相同，因此p16INK4A、CK17蛋白的陽性表達率和HPV16/18的檢出率對診斷宮頸病變有重要的意義。由本次研究結果顯示，AIM組CK17表達陽性率明顯高于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和 HSIL組陽性率無明顯差異；AIM組p16INK4A表達陽性率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組）；AIM組HPV16/18檢出率明顯低于CIN病變組（LSIL組+ HSIL組），且LSIL組和HSIL組檢出率無明顯差異。

在宮頸中，CK17主要表達于宮頸儲備細胞，是細胞分化不成熟的標志，成熟細胞中不會表達，因此AIM組中陽性率較高，LSIL組和HSIL組陽性率較低。p16INK4A是位于人染色體9p21區的一種抑癌基因，主要參與細胞周期調節，阻止細胞從G1期進入S期，從而抑制細胞增殖。在人正常宮頸鱗狀上皮中， 絕大多數上皮細胞呈陰性[4,5]，因此AIM組中陽性率較低，LSIL組和HSIL組陽性率較高。高危型HPV（HPV16/18）持續感染是宮頸癌及其癌前病變發病的主要危險因素，感染人體后可以產生癌蛋白E6和E7，通過E6蛋白與p53結合，E7蛋白與pRb結合，使p53降解和pRb失活，從而細胞周期控制失常，發生癌變[6]，因此AIM組中陽性率較低，LSIL組和HSIL組陽性率較高。綜上所述，在宮頸病變的連續過程中，可借助CKl7、p16INK4A的表達和HPV16/18的檢出率來認識AlM和CIN的細胞分子特征，同時進行二者的鑒別診斷。

[1]丁嵐,楊永國,梅霞.CKl7和p16在宮頸鱗狀上皮不成熟化生和宮頸上皮內瘤變中的表達及意義[J].臨床病理學雜志,2009,16(3):174-175.

[2]徐秋霞,關紅瓊.p16INK4A 、p14ARF和Ki67在宮頸癌中的表達特點[J].海南醫學院學報,2010,16(1):17-18.

[3]范麗萍,丁宇,李靜,等.不同宮頸病變組織HPV6/11、HPV16/18、p53、Ki67表達的臨床意義[J].山東醫藥,2010,50(37):81-82.

[4]梁艷芳,胡新榮.HPV和p16INK4A與宮頸癌的關系研究進展掌[J].西南軍醫,2009,11(4):731-732.

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[6]劉彤,崔莉,許麗娟,等.p16、Ki67蛋白表達及HPV檢測在宮頸上皮內瘤變中的診斷意義[J].診斷病理學雜,2009,16(5):343-344.