流式細胞術和腫瘤標志物在婦科腫瘤早期診斷中的研究進展

蔡元菊 黃文波 馬占忠

（1 韶關學院醫學院醫學技術系，廣東 韶關 512026；2 汕頭大學附屬粵北人民醫院醫院檢驗科，廣東 韶關 512026）

目前，婦科腫瘤的發病率呈上升趨勢，且出現年輕化趨勢[1]。其中卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌是最常見的三大婦科惡性腫瘤，已成為嚴重威脅婦女生命的主要頑癥，其主要原因是早期診斷困難及高復發率，特別是卵巢癌在婦科惡性腫瘤中的病死率最高，其發病隱匿，約70%～80%的患者發現時已為晚期，5年存活率僅為20%～30%，而早期卵巢癌患者的生存率可達90%。因此，提高腫瘤的早期診斷水平、爭取有利的治療時機、對改善預后尤為重要。

長期以來，組織病理學檢查一直作為腫瘤診斷的重要手段，但組織病理學作為形態學檢查方法存在檢測時間長、主觀性強、陽性率低等缺點，尤其是對癌前病變和臨界瘤的惡變傾向缺乏有效判斷，常見腫瘤標志物檢測已廣泛應用于臨床疾病診治，但因其特異性不高，敏感性差，至今沒有一種腫瘤標志物能完全滿足臨床需求。尋找早期診斷婦科惡性腫瘤的檢測方法，一直是婦科臨床所面臨的主要任務，它對于早期診治和預后評估有著極為重要的意義。近年來，流式細胞術作為新技術在腫瘤診斷中也取得了一定的進展，它們在腫瘤早期診斷中展示了良好的應用前景。

1 腫瘤標志物在婦科腫瘤診斷中的應用

腫瘤標志物是與腫瘤的生長密切相關的一組蛋白質，是腫瘤細胞分泌或脫落到體液或組織中的物質，也有一部分是宿主對體內寄生物反應后產生的物質。近年來，應用腫瘤標志物監測惡性腫瘤的生長狀況是腫瘤診斷學上的巨大進步。

1.1 癌胚抗原125（cancer antigen 125，CA125）

CA125 是卵巢上皮性癌最常用的腫瘤標記物，在Ⅰ期卵巢上皮性癌患者中只有50 %～60 %為陽性，Ⅱ～Ⅳ期在80%以上。且存在一定假陽性。雖然CA125升高較臨床上能檢查到腫瘤通常要早3～6個月，但其在卵巢癌篩查中的價值尚未肯定，因此CA125不能單獨用于卵巢癌篩選或早期診斷。CA125在卵巢漿液性上皮性癌、卵巢上皮性交界性腫瘤、宮頸癌、子宮內膜癌中均有升高，存在一定假陽性[2]。臨床多用化學發光法進行檢測，血清CA125參考值為＜35 U/ml。Moss 等[3]對799 例接受過血清CA125 測定的患者進行回顧性研究表明其在卵巢癌早期患者中CA125升高者僅占20%。因此是否適用于卵巢癌早期診斷有待于進一步研究。

1.2 癌胚抗原（carcinoembryonic，CEA）

CEA是一種酸性糖蛋白，編碼基因位于19號染色體，是由29個分離基因組成的基因家族。臨床常用化學發光法檢測，血清CEA的參考值為＜3.4ng/mL。CEA對卵巢上皮性腫瘤較敏感，特別是在卵巢黏液性腫瘤時的陽性率為32.5%，是診斷卵巢黏液性腫瘤較好的標志物，血清CEA水平與卵巢腫瘤手術分期、組織學分級、病理學類型及患者預后均呈正相關。CEA也可做為子宮內膜癌組織分級及早期診斷復發的一項標志物，特別是與CA125聯合檢測時，對子宮內膜癌診斷、評價患者預后等方面均有較大意義[4]。

1.3 甲胎蛋白（alpha-feto protein，AFP）

AFP是由胚胎的卵黃囊和不成熟肝細胞合成的一種血清糖蛋白。正常情況下，主要在胎兒組織中存在。肝癌時血清AFP明顯升高。生殖腺胚胎性腫瘤血清AFP水平也升高。血清AFP參考值為＜5.8IU/mL。婦科常用血清AFP作為卵巢胚胎性腫瘤的標志物。

1.4 人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）

HCG為一種糖蛋白激素，在正常妊娠時由胎盤滋養細胞產生，非孕期多為腫瘤產生。由α、β兩個亞基組成，其β亞基具有較高特異性，β-HCG是各種腫瘤標志物中敏感性和特異性最高的一種，對卵巢原發性絨癌、胚胎癌具有特異性診斷價值。

另外，CA19-9、CA72-4、CA50等腫瘤標志物檢測也已廣泛應用于臨床，在疾病診治中提供了一定幫助，但因單獨檢測某一項腫瘤標志物其特異性不高，敏感性差，即使治療后仍然有腫瘤生長，也有可能因為單項檢測的局限性而不能及時發現。至今沒有一種腫瘤標志物能完全滿足臨床要求。聯合檢測多項腫瘤標志物的方法來提高對腫瘤的檢出率、特異性和敏感性，并在治療后對患者的腫瘤標志物進行聯合檢測也可以及早發現治療措施的合適與否，及時提醒醫師對其做出恰當處理，為患者贏得寶貴的治療時間和治療機會。但婦科領域的腫瘤標志物甚多，敏感性及特異性各異，采用何種聯合檢測方式才是最經濟、最實用的仍值得深入研究和探討。

2 流式細胞術在婦科腫瘤診斷中的應用

流式細胞術（Flow Cytometry，FCM） 是20 世紀70 年代發展起來對單細胞定量分析的一種新技術。它借鑒了熒光標記技術、激光技術、單抗技術和計算機技術，具有極高的檢測速度和統計精確性，而且從單一細胞可以同時測得多個參數，為生物醫學與臨床檢驗提供了一個全新視角和強有力手段。隨著單克隆抗體技術的發展，流式細胞術已廣泛應用在基礎研究和臨床實踐的各個方面。在細胞生物學、腫瘤學、免疫學、遺傳學及臨床檢驗學等領域內發揮著重要的作用。目前，流式細胞術在腫瘤學中的應用主要集中在免疫功能檢測、腫瘤早期診斷、預后評估和多藥耐藥基因相關蛋白表達檢測等方面。

2.1 在腫瘤早期診斷中的應用

FCM 對DNA、RNA 含量及細胞周期的分析具有獨到之處，人體正常的體細胞均有較恒定的DNA 二倍體含量，細胞癌變過程中伴隨細胞DNA 含量的改變，DNA 非整倍體細胞是惡性腫瘤的特異性標志。根據DNA 分布直方圖，可對細胞周期的分布狀態進行分析，計算出G0/ G1期、S 期和G2/M期的比率并了解細胞的增殖能力。在腫瘤病理學研究中，通常以S 期比率（S-phase fraction，SPF） 作為判斷腫瘤增殖狀態的指標。此外，DNA 指數（DI）對腫瘤的早期診斷、鑒別診斷、判斷預后及評價療效有重要意義。大量研究表明：癌前病變的癌變率與病變的增生程度一致，而增生程度與DNA 含量的異常改變又呈平行關系。FCM 通過精確定量DNA 含量，能對癌前病變的性質和發展趨勢作出判斷，有助于癌前病變的早期判斷。

黃紅梅等[5]用細胞DNA定量分析宮頸癌及早期癌前病變發現DNA定量分析方法在篩查宮頸病變的敏感性為86%，特異性為71%；而常規細胞學方法則為57%和91%。黃宏思等[6]將l 206例婦科檢查分別采用傳統宮頸細胞學與細胞DNA倍體分析進行宮頸早期病變篩查，結果顯示DNA 倍體分析宮頸上皮內瘤樣變檢出率為82.22%，明顯高于傳統宮頸細胞學檢查，證實DNA 倍體分析是早期篩查宮頸癌和癌前病變敏感而準確的方法。

FCM對宮頸癌的早期診斷較之形態學方法更為敏感、準確，它可以測得正常細胞與異常細胞間的微小差異，在形態學還不能作出確診癌變之前，使從DNA 定量的分子水平進行超早期癌變診斷成為現實。因此，FCM在腫瘤的早期診斷中有很好的應用前景。

2.2 作為判斷良惡性腫瘤的輔助診斷指標

目前，組織病理學進行腫瘤良惡性分級時，切片的厚度可以影響計數結果，視野的人為選擇更可使計數結果相差倍之多，組織切片計數的有絲分裂指數作為衡量細胞增殖活性的指標的不準確性，足以影響到腫瘤良惡性的判斷。另外，通過病理學尚不能證實為惡性的交界瘤，經FCM檢測出DNA 非整倍體細胞時可考慮為惡性腫瘤，而病理學認為良性的腫瘤經流式細胞儀測出非整倍體則提示有惡性轉變的可能。流式細胞術對腫瘤組織進行細胞周期分析作為增殖指標，較全面了解細胞增殖情況，用于評價不典型、惡性腫瘤的侵襲性已得到許多學者的認可。

2.3 DNA 異倍體與惡性腫瘤預后的關系

國內外大量病理和臨床資料已證明：腫瘤細胞倍型異常是惡性腫瘤的特征之一，用FCM分析DNA 含量和DNA 倍體及S 期分析對腫瘤的惡性程度判定、治療方案選擇、預測預后具有重要價值。通常認為，較高的S 期比率和非整倍體的腫瘤惡性程度高、預后差、復發率、轉移和病死率均較高，而二倍體或近二倍體腫瘤預后則較好[7]。

相信通過新技術的轉化應用能找出檢出率高、特異性強和敏感性高的生物學檢測指標，為婦科腫瘤的早期診治和預后評估提供科學依據。

[1]王臨虹.中國婦科腫瘤的流行病學[C].2008中國國際婦科腫瘤會議日程冊和論文集,2008.

[2]吳文湘,蔣英萍,劉朝暉,等.卵巢癌九例誤診分析[J].中國全科醫學,2005,8 (19):1612-1613.

[3]Moss EL,Hollingworth J,Reynolds TM.The role of CA125 in clinical practice[J].Clin Pathol,2005,58(3):308-312.

[4]劉堅,郡甫.多腫瘤標志物聯合檢測在婦科惡性腫瘤臨床治療中的應用研究[J].實用癌癥雜志,2008,3(5):480-482.

[5]黃紅梅,雪梅,云光.細胞DNA定量分析用于宮頸癌及癌前病變早期篩查的臨床觀察[J].當代醫學,2010,6(15):3.

[6]黃宏思,黃衛彤,黃燕.用細胞DNA倍體分析法篩查宮頸癌[J].檢驗醫學與臨床,2010, 7(8): 724-725.

[7]李際春,李妍.卵巢惡性腫瘤的DNA倍體分析及臨床意義[J].寧夏醫科大學學報,2010,32(2):220-222.